Salir la mayoría de la técnica de la CLARIDAD

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Una entrevista con el Dr. Tim Steppe (Ph.D.) de biosistemas de los logotipos en SfN 2018, discutiendo los últimos avances en la técnica de la CLARIDAD y sus extremos superiores para los científicos que usan este método en su investigación.

¿Qué hace CLARIDAD una técnica tan útil de la investigación para los neurólogos?

La CLARIDAD permite a investigadores a las proyecciones de mapa en neuronas por la proyección de imagen profundizada de realización 3D en órganos y tejidos. El cerebro es uno de los mejores tejidos que usted puede imagen usando este método pues tiene un tan alto contenido del lípido. La CLARIDAD permite que los investigadores tracen caminos de neuronas, mirada en las conexiones, y potencialmente mirada en las descontinuidades entre los estados sanos y alterados.

Ejemplo rosado del cerebro humano - usado para estudiar enfermedades neurológicas con la técnica de la CLARIDAD - por el niño de los años 80niño de los años 80 | Shutterstock

Algunos de los ejemplos tempranos de la CLARIDAD que usaba investigaban la drogadicción en ratones dentro del laboratorio y el modelado de la enfermedad. La CLARIDAD provee de investigadores la capacidad de considerar el cerebro más detalladamente y de desarrollar una comprensión de cómo ha ordenado en el nivel celular.

¿Qué clase de enfermedades neurológicas se puede la CLARIDAD utilizar para estudiar?

¡Toda clase de enfermedades! Puede también ser utilizada para estudiar el revelado neuronal y cómo las estructuras crecen y proyectan. El uso mayor de la CLARIDAD es el estudio de los estados de la enfermedad, tales como enfermedad de Alzheimer, ser comparado a los estados normales. También se ha utilizado para observar glioblastoma, la enfermedad de Parkinson, y otras lesiones neurológicas.

¿Qué retos tienen investigadores hicieron frente en el pasado al realizar CLARIDAD?

Después de que el laboratorio de Karl Deisseroth en la Universidad de Stanford liberara el método en 2013, los investigadores comenzaron a intentar construir sus propios sistemas electroforéticos de cosecha propia. Los biólogos no son generalmente ingenieros, tan muchos se ejecutaron en toda clase de problemas que eso llevó a las muestras mal autorizadas o arruinadas.

En los biosistemas de los logotipos, hemos dirigido los sistemas y los reactivos de X-CLARITY para el claro del tejido que permite a investigadores los tejidos a seguro y constantemente sin obstrucción. Esto evita que los investigadores arruinen su muestra y ofrece el claro reproductivo de la muestra a la muestra.

¿Cuál es el X-CLARITY y qué ventajas ofrece sobre manualmente la realización de la técnica?

La cosa más importante para todo el mundo: tiempo.  Después de que los investigadores comenzaran a explorar CLARIDAD, realizaron que era también una técnica realmente grande para autorizar tejidos del tejido cerebral, pero también para los lípidos que autorizaban de otros tejidos y órganos. Sin embargo, la falta de éxito con muchos sistemas hechos en casa impulsó a muchos investigadores de nuevo pasivo a autorizar sus muestras, donde no actual es ayuda aplicada quita los lípidos. La entrega con esto es que usted se está ejecutando en semanas y semanas del tiempo del claro.

Con el X-CLARITY, los investigadores pueden aclarar a seis cerebros enteros en tan poco tiempo como 7 a 12 horas. Bastante que semanas a los meses para el claro pasivo, con el X-CLARITY, ahora tarda solamente horas.

Previamente, cuando la gente quiso construir una imagen 3D o un modelo de su sistema, ella tuvo que cortar cuidadosamente muestras hacia abajo a 20 a 30 micrones, prepara esas muestras, imagen cada uno por separado, y después las cose juntas.

La CLARIDAD permite que la gente mejore la tecnología de seccionamiento óptica de la acción de una palanca, que es apenas una manera de lujo de describir un microscopio confocal, un microscopio liviano de la hoja, o un microscopio del multifotón. Una vez que se han quitado los lípidos, estos sistemas pueden cavar profundamente en la muestra, generando mejores imágenes de una manera lejos más rápida.

Otro aspecto es adaptabilidad. El X-CLARITY permite la corriente, el voltaje, y la temperatura que se modulará, dependiendo del tipo de la muestra. Esto permite que los investigadores optimicen las condiciones para su propia muestra determinada y sistema modelo.

Tenemos un equipo general de las pautas que ofrecemos para ayudar a investigadores, pero cada muestra o cada sistema modelo va a ser ligeramente diferente. Hemos desarrollado los protocolos y los parámetros que trabajarán bastante bien para todo, con pellizcar y la optimización finales viniendo de los investigadores ellos mismos.

¿Por qué usted lo aserraba al hilo era importante desarrollar una solución de la CLARIDAD para la etiqueta del anticuerpo?

Con los casquillos de la multi-muestra que hemos desarrollado y velocidad del sistema de X-CLARITY, el atascamiento a tiempo ahora baja a la etiqueta del anticuerpo. Con nuestro nuevo kit de etiquetas, hemos partido en dos el periodo de tiempo que toma para manchar la muestra.

El anticuerpo convencional etiqueta con un ratón entero autorizado que la muestra del cerebro puede requerir un período de incubación de 7 a 14 días con cada anticuerpo - primario y secundario - que lo significa puede tomar dondequiera entre dos a cuatro semanas para hacer la etiqueta. Con el anticuerpo de DeepLabel manchando el estuche, sin embargo, requiere solamente un total de 7 días para un cerebro entero del ratón.

La otra ventaja de nuestro kit de etiquetas es que aumenta el atascamiento de los anticuerpos a los objetivos. Esto se aplica no sólo para autorizar, las muestras de tejido gruesas, pero también enrarece secciones.  Así pues, por ejemplo, puede ayudar a aumentar el atascamiento de anticuerpos a los objetivos recalcitrantes tales como neurotransmisores.

Sinapsis que muestra los neurotransmisores - ejemplo por el nobeastsofiercenobeastsofierce | Shutterstock

¿Cuáles son los pasos siguientes para su compañía, y las tecnologías que usted produce?

Durante los próximos años, quisiéramos poder ofrecer una solución completa al flujo de trabajo entero del claro del tejido. Nuestra meta total es proveer de investigadores un sistema entero que entregue tejidos sin obstrucción, imágenes, y análisis.

Nuestros pasos siguientes inmediatos incluirán perfeccionar el método del claro y el kit de etiquetas del anticuerpo que hemos desarrollado, y después desarrollar un microscopio liviano de la hoja que se optimice para el uso con CLARIDAD.

Nuestra misión de la base es desarrollar las herramientas celulares innovadoras de la proyección de imagen y de análisis.  Actualmente, nuestra línea de productos principal es contratirantes de célula automatizados junto con los microscopios automatizados para los estudios de blindaje y otros de la alto-producción.

¿Dónde pueden los programas de lectura encontrar más información?

Una guía gradual a la CLARIDAD por biosistemas de los logotipos.

Sobre el Dr. Tim Steppe

Imagen del retrato de la estepa de Tim, el entrevistadoLa estepa de Tim tiene Ph.D. en ciencias marinas de la colina de la UNC-Capilla y tiene 15 años de experiencia de la industria pasados sobre todo con lanzamientos y compañías más pequeñas en diversos papeles incluyendo soporte técnico, ventas, y el márketing.

En su papel actual como especialista del uso en los biosistemas de los logotipos, Tim es responsable de cliente y de la educación de la fuerza de ventas y del revelado de mercado para los nuevos productos de los logotipos.

Sobre biosistemas de los logotipos

Los biosistemas de los logotipos se especializan en herramientas y tecnologías de las ciencias de la vida que se convierten para una amplia gama de usos incluyendo la investigación básica, el control de calidad, y el descubrimiento de la droga. Desde su fundación en 2008, los biosistemas de los logotipos han estado desarrollando una serie de sistemas y de instrumentos automatizados de la proyección de imagen para los laboratorios que empeñaban a la investigación con un énfasis celular y molecular.

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    Logos Biosystems. (2019, March 29). Salir la mayoría de la técnica de la CLARIDAD. News-Medical. Retrieved on November 20, 2019 from https://www.news-medical.net/news/20181217/Getting-the-Most-Out-of-the-CLARITY-Technique.aspx.

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