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Éclaircissement de Laboratoire-Écaille des cultures cellulaires mammifères exprimant les anticorps recombinés

insights from industryTina Stoschek & Marcus GerlachResearch, Development & Lab ManagementTubulis Technologies

Une entrevue avec Tina Stoschek et Marcus Gerlach, discutant maximisant le rétablissement d'anticorps monoclonal utilisant l'éclaircissement de laboratoire-écaille des cultures cellulaires mammifères exprimant les anticorps recombinés.

Les anticorps monoclonaux sont de plus en plus importants en tant que thérapeutique visée. Veuillez donner une synthèse de cette industrie et les défis ont fait face en produisant ces anticorps à l'écaille.

La production des anticorps monoclonaux dans l'écaille variable, de petits lots dans le milieu universitaire et d'industrie jusqu'à la fabrication en vrac dans l'industrie biopharmaceutical est un procédé élaboré. Les anticorps recombinés sont exprimés en cellules mammifères de suspension et le procédé de culture est comparé plus complexe aux systèmes bactériens d'expression (par exemple croissance des cellules inférieure, physiologie sensible de cellules, nutrition complexe).

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Cette complexité mène aux plus grandes conditions en temps et au coût plus élevé de marchandises. Le modèle de processus à un procédé rapide, économique et stable de biomanufacturing sans perte de qualité des produits et de titre de produit est l'un des défis majeurs.

Quel travail faites-vous chez Tubulis pour améliorer la recherche d'anticorps et pour maximiser le rétablissement d'anticorps monoclonal ?

Tubulis est un projet secondaire situé au LMU Munich, se concentrant sur le développement des conjugués de la deuxième génération de médicament d'anticorps (ADCs). Dans nos installations de recherches, chaque opération de processus individuelle est vue comme un facteur élémentaire et est continuement optimisée pour réaliser la meilleures qualité des produits et quantité.

Afin de remplir cette condition, l'utilisation des technologies de pointe il est essentielle. Notre service est équipé de l'infrastructure pour le développement de processus en amont efficace (USP), le développement de processus en aval (protocole de système d'annuaire) et nous avons déterminé des méthodes bioanalytic pour la caractérisation de produit.

Nous pouvons amplifier le processus de fabrication à tout moment au moyen d'écaille- et approches de haut-débit. De plus, nous pouvons produire des titres élevés dans une courte période. En dépit des flux de travail fortement normalisés, l'optimisation actuelle du procédé est toujours présente - comme la mise en place de la récolte droite de culture cellulaire utilisant des nécessaires du laboratoire V de dynamique de Sartoclear.

Quelle est conjugaison® de Baquet-balise ? Pourquoi est-il important de pouvoir conjuguer un rapport défini de médicament-à-anticorps ?

La technologie® de Baquet-balise active le développement des CDA hautement stables et homogènes. C'est une technologie recombinée et chemoenzymatic de conjugaison activant le functionalization d'anticorps de site-détail. Généralement la conjugaison des molécules cytotoxiques élevé-efficaces à un anticorps d'objectif-détail permet la distribution tumeur-visée de médicament dans le traitement contre le cancer.

Anticorps grippant aux récepteurs de surface de cellule cancéreuse

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L'approche anticorps-assistée de la distribution de médicament diminue la dose efficace minimum et réduit potentiellement les effets secondaires par rapport à la chimiothérapie conventionnelle. Pendant les dernières années on l'a identifié que le site-détail et la conjugaison homogène aux anticorps-produits a le potentiel d'améliorer l'index thérapeutique du l'anticorps-médicament-conjugué donnant droit (ADC).

Le rapport de médicament-à-anticorps (DAR) d'un CDA peut influencer l'efficacité thérapeutique, car les anticorps non-conjugués réduisent le pouvoir, alors qu'un haut DAR peut affecter la pharmacocinétique et entraîner la toxicité. Ceci produit la condition de régler et déterminer une distribution définie de charge utile des CDA. Avec la Baquet-balise®, Tubulis a développé une technologie de la deuxième génération de plate-forme de CDA qui adresse actuel et appuyer des défis dans la conjugaison de CDA.

Veuillez donner une synthèse de la méthode neuve de laboratoire-écaille pour la filtration rapide du Sartorius. Comment a ceci affecté votre travail ?

Les nécessaires du laboratoire V de dynamique de Sartoclear active un procédé en une étape pour la culture cellulaire moissonnant à la laboratoire-écaille. L'ajout direct de la terre à diatomées (DE) au surnageant de cellules rend l'opération normale de centrifugation redondante. Le surnageant moissonné peut être directement filtré avec un filtre et un aspirateur pump.news de haut de bouteille

Pendant la filtration, DE forms un produit de filtration poreux qui aide à expliquer des cellules et des particules de cellules et évite le blocage du filtre. La mise en place des nécessaires du laboratoire V de dynamique de Sartoclear, moissonnant est devenue une opération de processus rapide et fiable à la fabrication d'anticorps.

Clarification and Sterile Filtration of Mammalian Cell Culture in a Single Step

Comment le nécessaire du laboratoire V de dynamique de Sartoclear rivalise-t-il avec l'étalon-or précédent ? Quels sont les avantages et les limitations ?

L'étalon-or pour la moisson de culture cellulaire comprend une opération d'éclaircissement par l'intermédiaire de la centrifugation pour enlever des cellules et de plus grandes saletés. Particulièrement pour des volumes plus élevés de laboratoire-écaille (~ 2000 ml) a limité l'espace de centrifugeuse mène aux passages multiples et augmente le moment pour l'éclaircissement.

Dans une deuxième opération, le surnageant restant est filtré pour enlever de plus petites saletés de cellules. Sans compter que des débits lents dans cette opération, le désavantage principal est encrasser de filtre ce qui mène à une perte considérable de produit et à une consommation plus élevée des membranes de filtre.

Utilisant le laboratoire dynamique de Sartoclear V des nécessaires éclaircissement et filtration est réalisés à moins d'une opération, évitant l'opération et les questions connexes de centrifugation comme la capacité et la disponibilité de centrifugeuse. Le temps de préparation et de filtration sont dû réduit à un ajout direct de De au bouillon et à la filtration de culture cellulaire à pression réduite.

Pourquoi est-il important de retirer des saletés de cellules et de petites particules du surnageant ? Comment est-ce que ceci affecte le résultat final ?

La guérison de l'anticorps recombiné exprimé est un procédé multipas, exigeant du l'antérieur-éclaircissement du bouillon de culture cellulaire d'obtenir une solution de particules librement pour la chromatographie d'affinité suivante de la protéine A. Mais près du démontage des particules submicroniques pour éviter la charge élevée de particules sur le fléau de la protéine A, il doit considérer qu'un démontage sans cisaillement des cellules réduit à un minimum également la formation de plus petites saletés de cellules et en outre du desserrage des enzymes intracellulaires ou l'ADN des cellules endommagées.

Une opération brutale de centrifugation peut détruire la membrane cellulaire, menant au contact des molécules intracellulaires au produit. En fin de compte, ceci peut mener aux modifications de configuration modifiée de glycosylation et de structure tertiaire et de fonctionnalité de l'anticorps recombiné.

Y a-t-il une différence dans la puissance de protéine ou totalisation de mAb avec la méthode du laboratoire V de dynamique de Sartoclear contre des méthodes précédentes ?

L'analyse des échantillons expliqués par De par l'intermédiaire de la chromatographie d'exclusion de taille a montré une teneur assimilée de l'éclat de substance de poids et de réseau lourd comparé à l'échantillon ce qui a été moissonné avec une opération de centrifugation.

En outre, tout le titre d'IgG a été déterminé avec la chromatographie d'affinité analytique de la protéine A et comparé à la méthode conventionnelle d'éclaircissement par l'intermédiaire de la centrifugation. Un titre plus élevé du total IgG était déterminé pour les échantillons expliqué avec le nécessaire du laboratoire® V de dynamique de Sartoclear.

Quelles limitations y a-t-il pour le nécessaire de Sartoclear ?

Au moment où, nous employons également les nécessaires du laboratoire® V de dynamique de Sartoclear pour l'éclaircissement des lots de bioréacteur de laboratoire-écaille (~2000 ml). Dans ce cas la récolte des échantillons mammifères à haute densité de culture cellulaire avec des nécessaires du laboratoire® V de dynamique de Sartoclear est limitée par 1000 ml selon le nécessaire. On n'a pas observé une obstruction de la membrane de filtre pour des densités de cellules de 1*107 c/ml.

Quel est prochain pour votre recherche et Tubulis ?

Tubulis a lieu actuel pendant la phase finale de la validation préclinique de la technologie® de Baquet-balise pour le développement des CDA de la deuxième génération. Basé sur nos technologies de plate-forme nous travaillons vers les premiers CDA de propriété industrielle se développants. De plus, nous sommes intéressés de partner notre technologie avec les compagnies intéressées de biotechnologie et de Pharma.

Où peuvent les lecteurs trouver plus d'informations ?

Au sujet de Tubulis : www.tubulis.com

Dynamique de Sartoclear : https://www.sartorius.com/en/products/lab-filtration-purification/harvesting-devices

Au sujet de Tina Stoschek

B.Sc et M.Sc de biologie de l'université Munich (LMU) de Ludwig-Maximilian. Après son degré d'université il a travaillé chez Roche Pharma traitant la récolte de culture cellulaire dans l'échelle industrielle. Depuis 2017 il travaille pour Tubulis®, un projet secondaire au LMU Munich où il se concentre sur la culture et les anticorps de culture cellulaire.

Au sujet de Marcus Gerlach

Marcus Gerlach a achevé ses études d'étudiant préparant une licence en biochimies à l'université de Bielefeld. Après qu'un internat à l'institut pour des biosciences moléculaires à Brisbane il ait achevé ses études doctorales à l'université de Bielefeld dans le groupe de Norbert Sewald, se concentrant sur la dérivatisation chimio-enzymatique des protéines et des peptides. Depuis 2017 il avait travaillé chez Tubulis®, avait développé et avait caractérisé des conjugués d'anticorps de site-détail pour la recherche et le traitement contre le cancer.

Citations

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    Sartorius Lab Instruments GmbH & Co. KG. (2019, January 23). Éclaircissement de Laboratoire-Écaille des cultures cellulaires mammifères exprimant les anticorps recombinés. News-Medical. Retrieved on October 20, 2021 from https://www.news-medical.net/news/20190123/Lab-Scale-Clarification-of-Mammalian-Cell-Cultures-Expressing-Recombinant-Antibodies.aspx.

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