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Chiarimento del Laboratorio-Disgaggio delle colture cellulari mammifere che esprimono gli anticorpi recombinanti

insights from industryTina Stoschek & Marcus GerlachResearch, Development & Lab ManagementTubulis Technologies

Un'intervista con Tina Stoschek e Marcus Gerlach, discutente massimizzando la generazione dell'anticorpo monoclonale facendo uso del chiarimento del laboratorio-disgaggio delle colture cellulari mammifere che esprimono gli anticorpi recombinanti.

Gli anticorpi monoclonali sono sempre più importanti come terapeutica mirata a. Faccia prego una generalità di questa industria e le sfide hanno affrontato quando produce questi anticorpi al disgaggio.

La produzione degli anticorpi monoclonali in disgaggio variante, dai piccoli batch nell'accademia e dall'industria fino a fabbricazione in serie nell'industria biofarmaceutica è un trattamento elaborato. Gli anticorpi recombinanti sono espressi in celle mammifere della sospensione ed il trattamento di coltura è più complesso confrontato ai sistemi batterici di espressione (per esempio crescita più bassa delle cellule, fisiologia cellulare sensibile, nutrizione complessa).

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Questa complessità piombo ai requisiti di in tempo aumentati ed all'più alto costo delle merci. La progettazione trattata ad un trattamento veloce, di risparmio di costi e stabile di biomanufacturing senza perdita di qualità del prodotto e di titolo del prodotto è una delle sfide principali.

Che lavoro state facendo a Tubulis per migliorare la ricerca dell'anticorpo e per massimizzare la generazione dell'anticorpo monoclonale?

Tubulis è un progetto secondario situato al LMU Monaco di Baviera, mettente a fuoco sullo sviluppo dei coniugati di prossima generazione della droga dell'anticorpo (ADCs). Nei nostri impianti di ricerca, ogni punto trattato determinato è veduto come un fattore elementare e continuamente è ottimizzato per raggiungere la migliori qualità e quantità del prodotto.

Per soddisfare questa condizione, l'uso delle tecnologie avanzate è essenziale. Il nostro dipartimento è fornito dell'infrastruttura per lo sviluppo trattato verso l'alto efficiente (USP), lo sviluppo trattato a valle (DSP) ed abbiamo stabilito i metodi bioanalytic per la caratterizzazione del prodotto.

Possiamo amplificare il processo di fabbricazione in qualunque momento per mezzo di portiamo su scala industriale e gli approcci di alto-capacità di lavorazione. Inoltre, possiamo produrre gli alti titoli in un corto periodo di tempo. Malgrado i flussi di lavoro altamente standardizzati, l'ottimizzazione in corso del trattamento è sempre presente - come l'entrata in vigore del raccolto diretto della coltura cellulare facendo uso dei kit del laboratorio V di dinamica di Sartoclear.

Che cosa è coniugazione® del Vasca-tag? Perché è importante potere da coniugare un rapporto definito dell'droga anticorpo?

La tecnologia® del Vasca-tag permette allo sviluppo degli ADC altamente stabili ed omogenei. È una tecnologia recombinante e chemoenzymatic di coniugazione permettendo al functionalization sito-specifico dell'anticorpo. La coniugazione delle molecole citotossiche alto-potenti ad un anticorpo obiettivo-specifico permette generalmente la consegna tumore-mirata a della droga nel trattamento del cancro.

Anticorpi che legano ai ricevitori della superficie della cellula tumorale

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L'approccio anticorpo-mediato della consegna della droga fa diminuire la dose efficace minima e potenzialmente diminuisce gli effetti secondari rispetto alla chemioterapia convenzionale. Durante gli anni scorsi è stato riconosciuto che la coniugazione sito-specifica ed omogenea ai anticorpo-prodotti ha il potenziale di migliorare l'indice analitico terapeutico del anticorpo-droga-coniugato risultante (ADC).

Il rapporto dell'droga anticorpo (DAR) di un ADC può urtare l'efficacia terapeutica, poichè gli anticorpi unconjugated diminuiscono la potenza, mentre un alto DAR può pregiudicare le farmacocinesi e causare la tossicità. Ciò crea il requisito gestire e determinare una distribuzione definita del carico utile degli ADC. Con il Vasca-tag®, Tubulis ha sviluppato una tecnologia di prossima generazione della piattaforma dell'ADC che gli indirizzi correnti e che stampano sfida nella coniugazione dell'ADC.

Faccia prego una generalità di nuovo metodo del laboratorio-disgaggio per filtrazione veloce dal Sartorius. Come ha questo influenzato il vostro lavoro?

I kit del laboratorio V di dinamica di Sartoclear permette ad un trattamento una tappa per coltura cellulare che raccoglie al laboratorio-disgaggio. L'aggiunta diretta di terra di diatomee (DE) al galleggiante delle cellule rende il punto standard di centrifugazione ridondante. Il galleggiante raccolto può direttamente essere filtrato con un filtro dalla cima della bottiglia e un vuoto pump.news

Durante la filtrazione, DE forms un pannello poroso che contribuisce a chiarire le celle e le particelle delle cellule ed impedisce il blocco del filtro. L'entrata in vigore dei kit del laboratorio V di dinamica di Sartoclear, raccogliendo si è trasformata in in un punto trattato veloce ed affidabile nella fabbricazione dell'anticorpo.

Clarification and Sterile Filtration of Mammalian Cell Culture in a Single Step

Come il kit del laboratorio V di dinamica di Sartoclear paragona al sistema monetario aureo precedente? Che cosa sono i vantaggi e le limitazioni?

Il sistema monetario aureo per la raccolta della coltura cellulare comprende un punto di chiarimento via centrifugazione per eliminare le celle ed i più grandi detriti. Particolarmente per gli più alti volumi del laboratorio-disgaggio (~ 2000 ml) ha limitato lo spazio della centrifuga piombo alle esecuzioni multiple ed aumentato il momento per chiarimento.

Ad un secondo punto, il galleggiante restante è filtrato per eliminare i più piccoli detriti delle cellule. Oltre alle portate lente a questo punto, lo svantaggio principale è ostruzione del filtro che cosa piombo ad una considerevole perdita di prodotto e ad un più alto consumo di membrane del filtrante.

Facendo uso del laboratorio dinamico di Sartoclear V i kit chiarimento e filtrazione è raggiunto all'interno di un punto, aggirando il punto di centrifugazione e le emissioni relative come la capacità e la disponibilità della centrifuga. Il tempo di filtrazione e del preparato è diminuito dovuto un'aggiunta diretta del DE al brodo ed alla filtrazione della coltura cellulare a pressione ridotta.

Perché è importante eliminare i detriti delle cellule e le piccole particelle dal galleggiante? Come questo pregiudica il risultato finale?

Il ripristino dell'anticorpo recombinante espresso è un trattamento a più gradi, richiedente il priore-chiarimento del brodo della coltura cellulare di ottenere liberamente una soluzione della particella per la cromatografia di affinità successiva della proteina A. Ma accanto alla rimozione delle particelle di submicron per evitare l'alto caricamento della particella sulla colonna della proteina A, deve essere considerato che una rimozione senza tosatura delle celle egualmente minimizzi la formazione di più piccoli detriti delle cellule ed ancora la versione degli enzimi o del DNA intracellulari dalle cellule danneggiate.

Un punto duro di centrifugazione può destruct la membrana cellulare, piombo al contatto delle molecole intracellulari al prodotto. Alla fine, questo può piombo ai cambiamenti del reticolo alterato della glicosilazione e della struttura terziaria e di funzionalità dell'anticorpo recombinante.

C'è una differenza nel rendimento della proteina o l'aggregazione di mAb con il metodo del laboratorio V di dinamica di Sartoclear contro i metodi precedenti?

L'analisi dei campioni chiariti DE via la cromatografia di esclusione di dimensione ha mostrato un simile contenuto delle specie di alto peso molecolare e del frammento della catena pesante confrontati al campione quale è stato raccolto con un punto di centrifugazione.

Ancora, il titolo di IgG di totale è stato determinato con la cromatografia di affinità analitica della proteina A ed è stato confrontato al metodo convenzionale di chiarimento via centrifugazione. Un più alto titolo totale di IgG era risoluto per i campioni chiarito con il kit del laboratorio® V di dinamica di Sartoclear.

Che limitazioni sono ci per il kit di Sartoclear?

Dal momento che, egualmente usiamo i kit del laboratorio® V di dinamica di Sartoclear per il chiarimento dei batch del bioreattore del laboratorio-disgaggio (~2000 ml). In questo caso il raccolto dei campioni mammiferi ad alta densità della coltura cellulare con i kit del laboratorio® V di dinamica di Sartoclear è limitato da 1000 ml per kit. Un bloccaggio della membrana del filtrante non è stato osservato per le densità delle cellule di 1*107 c/ml.

Che cosa è seguente per la vostri ricerca e Tubulis?

Tubulis ha luogo corrente nella fase finale della convalida preclinica della tecnologia® del Vasca-tag per lo sviluppo degli ADC di prossima generazione. Basato sopra le nostre tecnologie della piattaforma stiamo lavorando verso i primi ADC privati di sviluppo. Inoltre, siamo interessati partner la nostra tecnologia con le società interessate di Pharma e di biotecnologia.

Dove possono i lettori trovare più informazioni?

Circa Tubulis: www.tubulis.com

Dinamica di Sartoclear: https://www.sartorius.com/en/products/lab-filtration-purification/harvesting-devices

Circa Tina Stoschek

B.Sc e M.Sc di biologia dall'università Monaco di Baviera (LMU) di Ludwig-Maximilian. Dopo il suo titolo universitario ha lavorato al Pharma di Roche che si occupa del raccolto della coltura cellulare in disgaggio industriale. Dal 2017 sta lavorando per Tubulis®, un progetto secondario al LMU Monaco di Baviera dove sta mettendo a fuoco sulla coltura e sugli anticorpi della coltura cellulare.

Circa Marcus Gerlach

Marcus Gerlach ha terminato i suoi studi dello studente non laureato in biochimica all'università di Bielefeld. Dopo che un internato all'istituto per scienze biologiche molecolari a Brisbane lui ha terminato i suoi studi di laurea all'università di Bielefeld nel gruppo di Norbert Sewald, mettente a fuoco sulla derivatizzazione chemo-enzimatica delle proteine e dei peptidi. Dal 2017 sta lavorando a Tubulis®, sta sviluppando e caratterizzando i coniugati sito-specifici dell'anticorpo per la ricerca ed il trattamento del cancro.

Citations

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    Sartorius Lab Instruments GmbH & Co. KG. (2019, January 23). Chiarimento del Laboratorio-Disgaggio delle colture cellulari mammifere che esprimono gli anticorpi recombinanti. News-Medical. Retrieved on October 19, 2021 from https://www.news-medical.net/news/20190123/Lab-Scale-Clarification-of-Mammalian-Cell-Cultures-Expressing-Recombinant-Antibodies.aspx.

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