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Esclarecimento da Laboratório-Escala das culturas celulares mamíferas que expressam anticorpos de recombinação

insights from industryTina Stoschek & Marcus GerlachResearch, Development & Lab ManagementTubulis Technologies

Uma entrevista com Tina Stoschek e Marcus Gerlach, discutindo maximizando a geração do anticorpo monoclonal usando o esclarecimento da laboratório-escala das culturas celulares mamíferas que expressam anticorpos de recombinação.

Os anticorpos monoclonais são cada vez mais importantes como a terapêutica visada. Dê por favor uma vista geral desta indústria e os desafios enfrentaram ao produzir estes anticorpos na escala.

A produção de anticorpos monoclonais na escala de variação, dos grupos pequenos na academia e da indústria até a fabricação maioria na indústria biofarmaceutico é um processo elaborado. Os anticorpos de recombinação são expressados em pilhas mamíferas da suspensão e o processo do cultivo é mais complexo comparado aos sistemas bacterianos da expressão (por exemplo mais baixo crescimento da pilha, fisiologia sensível da pilha, nutrição complexa).

3d rendeu a ilustração medicamente exacta dos anticorpos

Shutterstock | Sebastian Kaulitzki

Esta complexidade conduz às exigências aumentadas do tempo e a um custo mais alto dos bens. O projecto de processo a um rápido, a uma economia de gastos e a um processo estável do biomanufacturing sem perda de qualidade de produto e de titer do produto é um dos desafios principais.

Que trabalho você está fazendo em Tubulis para melhorar a pesquisa do anticorpo e para maximizar a geração do anticorpo monoclonal?

Tubulis é um projecto de derivado situado no LMU Munich, centrando-se sobre a revelação de conjugado da droga do anticorpo da próxima geração (ADCs). Em nossas instalações de investigação, cada etapa individual do processo é considerada como um factor elementar e aperfeiçoada continuamente para conseguir a melhores qualidade e quantidade de produto.

A fim cumprir esta exigência, o uso de tecnologias avançadas é essencial. Nosso departamento é equipado com a infra-estrutura para a revelação de processo ascendente eficiente (USP), a revelação de processo a jusante (DSP) e nós estabelecemos métodos bioanalytic para a caracterização do produto.

Nós podemos impulsionar o processo de manufactura a qualquer hora por meio da escala-acima e das aproximações da alto-produção. Além, nós podemos produzir titers altos em um curto período de tempo. Apesar dos trabalhos altamente estandardizados, a optimização em curso do processo está sempre actual - como a aplicação da colheita directa da cultura celular usando jogos do laboratório V da dinâmica de Sartoclear.

Que é conjugação® da Cuba-etiqueta? Por que é importante poder conjugar uma relação definida do droga-à-anticorpo?

A tecnologia® da Cuba-etiqueta permite a revelação de CAD altamente estáveis e homogêneos. É uma tecnologia de recombinação, chemoenzymatic da conjugação permitindo o functionalization local-específico do anticorpo. Geralmente, a conjugação de moléculas citotóxicos alto-poderosos a um anticorpo alvo-específico permite a entrega tumor-visada da droga no tratamento contra o cancro.

Anticorpos que ligam aos receptors da superfície da célula cancerosa

Shutterstock | Gráficos alfa dos Touros 3D

A aproximação anticorpo-negociada da entrega da droga diminui a dose eficaz mínima e reduz potencial os efeitos secundários em comparação com a quimioterapia convencional. Durante os últimos anos reconheceu-se que a conjugação local-específica e homogênea aos anticorpo-produtos tem o potencial melhorar o deslocamento predeterminado terapêutico do anticorpo-droga-conjugado resultante (ADC).

A relação do droga-à-anticorpo (DAR) de um CAD pode impactar a eficácia terapêutica, porque os anticorpos unconjugated reduzem a potência, quando um DAR alto puder afectar farmacocinética e causar a toxicidade. Isto cria a exigência controlar e determinar uma distribuição definida da carga útil dos CAD. Com Cuba-etiqueta®, Tubulis desenvolveu uma tecnologia da plataforma da próxima geração CAD que os endereços actuais e que pressionam desafiassem na conjugação do CAD.

Dê por favor uma vista geral do método novo da laboratório-escala para a filtragem rápida do sartório. Como tem isto afetado seu trabalho?

Os jogos do laboratório V da dinâmica de Sartoclear permitem um processo de uma etapa para a cultura celular que colhe na laboratório-escala. A adição directa de terra diatomaceous (DE) ao supernatant da pilha faz a etapa padrão da centrifugação redundante. O supernatant colhido pode directamente ser filtrado com um filtro da parte superior da garrafa e um vácuo pump.news

Durante a filtragem, DE formulário um bolo de filtro poroso que ajude a esclarecer pilhas e partículas da pilha e impeça a obstrução do filtro. A aplicação de jogos do laboratório V da dinâmica de Sartoclear, colhendo transformou-se uma etapa rápida e segura do processo na fabricação do anticorpo.

Clarification and Sterile Filtration of Mammalian Cell Culture in a Single Step

Como o jogo do laboratório V da dinâmica de Sartoclear compara com a bandeira de ouro precedente? Que são as vantagens e as limitações?

A bandeira de ouro para a colheita da cultura celular inclui uma etapa do esclarecimento através da centrifugação para remover as pilhas e os restos maiores. Especialmente para uns volumes mais altos da laboratório-escala (~ 2000 mL) limitou o espaço do centrifugador conduz às corridas múltiplas e aumenta o momento para o esclarecimento.

Num segundo a etapa, o supernatant restante é filtrada para remover os restos de pilha menores. Além dos caudais lentos nesta etapa, a desvantagem principal é obstrução do filtro o que conduz a uma perda considerável de produto e a um consumo mais alto de membranas do filtro.

Usar jogos dinâmicos esclarecimento e filtragem do laboratório de Sartoclear V é conseguida dentro de uma etapa, contornando a etapa da centrifugação e as edições relacionadas como a capacidade e a disponibilidade do centrifugador. O tempo da preparação e de filtragem é reduzido devido a uma adição directa de DE ao caldo e à filtragem da cultura celular sob a pressão reduzida.

Por que é importante remover os restos de pilha e as partículas pequenas do supernatant? Como isto afecta o resultado final?

A recuperação do anticorpo de recombinação expressado é um processo da multi-etapa, exigindo o prévio-esclarecimento do caldo da cultura celular obter livre uma solução da partícula para a cromatografia de afinidade subseqüente da proteína A. Mas ao lado da remoção das partículas submicrónicas para evitar a carga alta da partícula na coluna da proteína A, tem-se que considerar que uma remoção da tesoura-menos das pilhas igualmente minimiza a formação de restos de pilha menores e além disso a liberação de enzimas intracelulares ou de ADN das pilhas danificadas.

Uma etapa áspera da centrifugação pode destruct a membrana de pilha, conduzindo ao contacto de moléculas intracelulares ao produto. Na extremidade, isto pode conduzir às mudanças do teste padrão alterado do glycosylation e da estrutura terciária e da funcionalidade do anticorpo de recombinação.

Há uma diferença no rendimento da proteína ou agregação do mAb com o método do laboratório V da dinâmica de Sartoclear contra métodos precedentes?

A análise de amostras esclarecidas DE através da cromatografia da exclusão do tamanho mostrou um índice similar da elevação - fragmento da espécie do peso molecular e da corrente pesada comparado à amostra qual foi colhido com uma etapa da centrifugação.

Além disso, o titer de IgG do total foi determinado com cromatografia de afinidade analítica da proteína A e comparado ao método convencional do esclarecimento através da centrifugação. Um titer total mais alto de IgG era determinado para as amostras esclarecido com o jogo do laboratório® V da dinâmica de Sartoclear.

Que limitações há para o jogo de Sartoclear?

No momento em que, nós igualmente usamos os jogos do laboratório® V da dinâmica de Sartoclear para o esclarecimento dos grupos do bioreactor da laboratório-escala (~2000 mL). A colheita de amostras mamíferas high-density da cultura celular com os jogos do laboratório V® da dinâmica de Sartoclear é limitada neste caso por 1000 mL pelo jogo. Um bloqueio da membrana do filtro não foi observado para densidades de pilha de 1*107 c/ml.

Que é seguinte para seus pesquisa e Tubulis?

Tubulis realiza-se actualmente na fase final da validação pré-clínica da tecnologia® da Cuba-etiqueta para a revelação da próxima geração CAD. Baseado em nossas tecnologias da plataforma nós estamos trabalhando para primeiros CAD proprietários tornando-se. Além, nós somos interessados partner nossa tecnologia com empresas interessadas da biotecnologia e do Pharma.

Onde podem os leitores encontrar mais informação?

Sobre Tubulis: www.tubulis.com

Dinâmica de Sartoclear: https://www.sartorius.com/en/products/lab-filtration-purification/harvesting-devices

Sobre Tina Stoschek

B.Sc e M.Sc da biologia da universidade Munich de Ludwig-Maximilian (LMU). Após sua licenciatura trabalhou em Roche Pharma que trata a colheita da cultura celular na escala industrial. Desde 2017 está trabalhando para Tubulis®, um projecto de derivado no LMU Munich onde está focalizando no cultivo e nos anticorpos da cultura celular.

Sobre Marcus Gerlach

Marcus Gerlach terminou seus estudos do universitário na bioquímica na universidade de Bielefeld. Depois que um estágio no instituto para a ciência biológica molecular em Brisbane ele terminou seus estudos doutorais na universidade de Bielefeld no grupo de Norbert Sewald, centrando-se sobre a derivatização chemo-enzimático das proteínas e dos peptides. Desde 2017 tem trabalhado em Tubulis®, tem desenvolvido e tem caracterizado conjugado local-específicos do anticorpo para a pesquisa e o tratamento contra o cancro.

Citations

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    Sartorius Lab Instruments GmbH & Co. KG. (2019, January 23). Esclarecimento da Laboratório-Escala das culturas celulares mamíferas que expressam anticorpos de recombinação. News-Medical. Retrieved on October 28, 2021 from https://www.news-medical.net/news/20190123/Lab-Scale-Clarification-of-Mammalian-Cell-Cultures-Expressing-Recombinant-Antibodies.aspx.

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