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Clarificación de la Laboratorio-Escala de los cultivos celulares mamíferos que expresan los anticuerpos recombinantes

insights from industryTina Stoschek & Marcus GerlachResearch, Development & Lab ManagementTubulis Technologies

Una entrevista con Tina Stoschek y Marco Gerlach, discutiendo maximizando la generación del anticuerpo monoclonal usando la clarificación de la laboratorio-escala de los cultivos celulares mamíferos que expresan los anticuerpos recombinantes.

Los anticuerpos monoclonales son cada vez más importantes como terapéutica apuntada. Dé por favor una reseña de esta industria y los retos hicieron frente al producir estos anticuerpos en la escala.

La producción de anticuerpos monoclonales en escala diversa, de las pequeñas mezclas en academia y de la industria hasta la fabricación a granel en industria biopharmaceutical es un proceso elaborado. Los anticuerpos recombinantes se expresan en células mamíferas de la suspensión y el proceso del cultivo es más complejo comparado a los sistemas bacterianos de la expresión (e.g un incremento más inferior de la célula, fisiología sensible de la célula, nutrición compleja).

3d rindió el ejemplo médicamente exacto de anticuerpos

Shutterstock | Sebastian Kaulitzki

Esta complejidad lleva a los requisitos crecientes del tiempo y a un costo más alto de mercancías. El diseño de proceso a un rápido, a un ahorro y a un proceso estable del biomanufacturing sin la baja de la calidad del producto y del título del producto es uno de los retos mayores.

¿Qué trabajo usted está haciendo en Tubulis para perfeccionar la investigación del anticuerpo y para maximizar la generación del anticuerpo monoclonal?

Tubulis es un proyecto de efecto situado en el LMU Munich, centrándose en el revelado de las conjugaciones de la droga del anticuerpo de la siguiente-generación (ADCs). En nuestros centros de investigación, se considera como un factor elemental y se optimiza contínuo cada paso de proceso individual para lograr la mejores calidad y cantidad del producto.

Para satisfacer este requisito, el uso de tecnologías avanzadas es esencial. Nuestro departamento se equipa de la infraestructura para el revelado de proceso por aguas arriba eficiente (USP), el revelado de proceso rio abajo (DSP) y establecimos los métodos bioanalytic para la caracterización del producto.

Podemos reforzar el proceso de fabricación en cualquier momento mediante escala-hacia arriba y aproximaciones de la alto-producción. Además, podemos producir altos títulos en un corto período de tiempo. A pesar de flujos de trabajo altamente estandardizados, la optimización en curso del proceso está siempre presente - como la puesta en vigor de la cosecha directa del cultivo celular usando estuches del laboratorio V de la dinámica de Sartoclear.

® ¿Cuál es conjugación de la Tina-etiqueta? ¿Por qué es importante poder conjugar una índice definida del droga-a-anticuerpo?

La tecnología® de la Tina-etiqueta habilita el revelado de los ADC altamente estables y homogéneos. Es una tecnología recombinante, chemoenzymatic de la conjugación habilitando el functionalization sitio-específico del anticuerpo. La conjugación de moléculas citotóxicas alto-potentes a un anticuerpo objetivo-específico permite generalmente lanzamiento tumor-apuntado de la droga en el tratamiento contra el cáncer.

Anticuerpos que atan a los receptores de la superficie de la célula cancerosa

Shutterstock | Gráficos alfa de Tauri 3D

La aproximación anticuerpo-mediada del lanzamiento de la droga disminuye la dosis efectiva mínima y potencialmente reduce los efectos secundarios con respecto a la quimioterapia convencional. Durante los años pasados se ha reconocido que la conjugación sitio-específica y homogénea a los anticuerpo-productos tiene el potencial de perfeccionar el índice terapéutico de la anticuerpo-droga-conjugación resultante (ADC).

La índice del droga-a-anticuerpo (DAR) de un ADC puede afectar la eficacia terapéutica, pues los anticuerpos sin conjugar reducen potencia, mientras que un alto DAR puede afectar a la farmacinética y causar toxicidad. Esto crea el requisito de controlar y de determinar una distribución definida de la carga útil de los ADC. Con la Tina-etiqueta®, Tubulis ha desarrollado una tecnología de la plataforma de la siguiente-generación ADC que los direccionamientos actuales y que prensan desafían en la conjugación del ADC.

Dé por favor una reseña del nuevo método de la laboratorio-escala para la filtración rápida del sartorio. ¿Cómo tiene esto afectada su trabajo?

Los estuches del laboratorio V de la dinámica de Sartoclear habilitan un proceso de un solo paso para el cultivo celular que cosecha en la laboratorio-escala. La adición directa de la tierra diatomácea (DE) al sobrenadante de la célula hace el paso estándar de la centrifugación redundante. El sobrenadante cosechado se puede filtrar directamente con un filtro y un vacío pump.news de la capota de la botella

Durante la filtración, DE forms un producto de filtración poroso que ayuda a clarificar las células y las partículas de la célula y previene cegar del filtro. La puesta en vigor de los estuches del laboratorio V de la dinámica de Sartoclear, cosechando se ha convertido en un paso de proceso rápido y seguro en la fabricación del anticuerpo.

Clarification and Sterile Filtration of Mammalian Cell Culture in a Single Step

¿Cómo el estuche del laboratorio V de la dinámica de Sartoclear compara con el patrón oro anterior? ¿Cuáles son las ventajas y las limitaciones?

El patrón oro para la cosecha del cultivo celular incluye un paso de la clarificación vía la centrifugación para quitar las células y escombros más grandes. Especialmente para volúmenes más altos de la laboratorio-escala (~ 2000 ml) limitó el espacio de la centrifugadora lleva a las corridas múltiples y aumenta la época para la clarificación.

En un segundo paso, el sobrenadante restante se filtra para quitar escombros de célula más pequeños. Además de flujos lentos en este paso, la desventaja principal es obstrucción del filtro qué lleva a una considerable baja del producto y a un consumo más alto de membranas del filtro.

Usando el laboratorio dinámico de Sartoclear V los estuches clarificación y filtración se logran dentro de un paso, evitando el paso y los temas relacionados de la centrifugación como capacidad y disponibilidad de la centrifugadora. El tiempo de la preparación y de filtración es reducido debido a una adición directa del DE al caldo y a la filtración del cultivo celular bajo presión reducida.

¿Por qué es importante quitar los escombros de célula y las pequeñas partículas del sobrenadante? ¿Cómo esto afecta al resultado final?

La recuperación del anticuerpo recombinante expresado es un proceso de varias fases, requiriendo la anterior-clarificación del caldo del cultivo celular obtener una solución de la partícula libremente para la cromatografía de afinidad subsiguiente de la proteína A. Pero al lado del retiro de las partículas de submicron para evitar la alta carga de la partícula en la olumna de la proteína A, tiene que ser considerado que un retiro de la resistencia-menos de células también disminuye la formación de escombros de célula más pequeños y además la baja de enzimas o de la DNA intracelulares de las células dañadas.

Un paso duro de la centrifugación puede destruct la membrana celular, llevando al contacto de moléculas intracelulares al producto. En el extremo, esto puede llevar a los cambios de la configuración alterada del glycosylation y de la estructura terciaria y de las funciones del anticuerpo recombinante.

¿Hay una diferencia en rendimiento de la proteína o agregación del mAb con el método del laboratorio V de la dinámica de Sartoclear comparado con métodos anteriores?

El análisis de muestras clarificadas DE vía la cromatografía de la exclusión de la talla mostró un contenido similar del fragmento de la especie de molecularidad elevada del peso y de la cadena pesada comparado a la muestra cuál fue cosechado con un paso de la centrifugación.

Además, el título de IgG del total fue determinado con cromatografía de afinidad analítica de la proteína A y comparado al método convencional de la clarificación vía la centrifugación. Un título total más alto de IgG era resuelto para las muestras clarificado con el estuche del laboratorio® V de la dinámica de Sartoclear.

¿Qué limitaciones hay para el estuche de Sartoclear?

En el momento que, también utilizamos los estuches del laboratorio® V de la dinámica de Sartoclear para la clarificación de las mezclas del biorreactor de la laboratorio-escala (~2000 ml). En este caso la cosecha de las muestras mamíferas de alta densidad del cultivo celular con los estuches del laboratorio® V de la dinámica de Sartoclear es limitada por 1000 ml por estuche. Un bloqueo de la membrana del filtro no fue observado para las densidades de célula de 1*107 c/ml.

¿Cuál es siguiente para su investigación y Tubulis?

Tubulis es actualmente en la fase final de la validación preclínica de la tecnología® de la Tina-etiqueta para el revelado de la siguiente-generación ADC. Basado sobre nuestras tecnologías de la plataforma estamos trabajando hacia los primeros ADC propietarios que se convierten. Además, estamos interesados partner nuestra tecnología con las compañías interesadas de la biotecnología y de Pharma.

¿Dónde pueden los programas de lectura encontrar más información?

Sobre Tubulis: www.tubulis.com

Dinámica de Sartoclear: https://www.sartorius.com/en/products/lab-filtration-purification/harvesting-devices

Sobre Tina Stoschek

B.Sc y M.Sc de la biología de la universidad Munich (LMU) de Luis-Maximiliano. Después de su título universitario ella trabajó en Roche Pharma que se ocupaba de la cosecha del cultivo celular en escala industrial. Desde 2017 ella está trabajando para Tubulis®, un proyecto de efecto en el LMU Munich donde ella se está centrando en el cultivo y anticuerpos del cultivo celular.

Sobre Marco Gerlach

Marco Gerlach terminó sus estudios del estudiante en bioquímica en la universidad de Bielefeld. Después de que una prácticas en el instituto para la ciencia biológica molecular en Brisbane él terminara sus estudios doctorales en la universidad de Bielefeld en el grupo de Norberto Sewald, centrándose en la derivatización chemo-enzimática de proteínas y de péptidos. Desde 2017 él ha estado trabajando en Tubulis®, ha estado desarrollando y ha estado caracterizando las conjugaciones sitio-específicas del anticuerpo para la investigación y el tratamiento contra el cáncer.

Citations

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    Sartorius Lab Instruments GmbH & Co. KG. (2019, January 23). Clarificación de la Laboratorio-Escala de los cultivos celulares mamíferos que expresan los anticuerpos recombinantes. News-Medical. Retrieved on October 17, 2021 from https://www.news-medical.net/news/20190123/Lab-Scale-Clarification-of-Mammalian-Cell-Cultures-Expressing-Recombinant-Antibodies.aspx.

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