Factura do a maioria de Microdialysis para a análise do neurotransmissor

insights from industryMartin EysbergDirector of Sales and MarketingAntec Scientific

Notícia-Médico fala a Martin Eysberg, que discute os efeitos dos monoamines tais como a dopamina no comportamento e na doença neurológica e fornece uma introdução ao analisador do neurotransmissor de ALEXYS, um detector extremamente preciso de UHPLC-EC que seja ideal para o estudo da neurotransmissão ao longo do tempo.

Como o microdialysis está sendo usado para promover nossa compreensão da neurotransmissão?

Microdialysis é uma técnica de amostra que seja usada para recolher o líquido extracelular do cérebro. É usado para estudar uma escala das circunstâncias, incluindo Parkinson, Alzheimer, apego, comportamento com relação ao medo, neuroactivity que segue o consumo de álcool e assim por diante.

Uma ilustração de uma neurotransmissão entre duas pilhas de nervo. Membro da anatomia | Shutterstock

Na pesquisa, no microdialysis biomedicáveis realizados frequentemente em combinação com a cromatografia líquida para tomar medidas directas dos analytes no cérebro ou para recolher amostras em uns tubos de ensaio pequenos.

Esta instalação pode ser usada para observar mudanças na concentração de neurotransmissor depois da estimulação, ou um disparador. Por exemplo, as mudanças internas na neurotransmissão e na concentração do neurotransmissor podem ser medidas depois da administração do álcool a um assunto.

Por que o microdialysis é combinado frequentemente com a HPLC para a detecção do monoamine?

Microdialysis transformou-se uma ferramenta inestimável que fornecesse a informação do tempo real de níveis do neurotransmissor in vivo. As amostras de Microdialysis são recolhidas e armazenadas ou analisadas imediatamente em uma configuração em linha usando UHPLC e a detecção electroquímica (ECD).

Há duas razões principais pelas quais combinar estas tecnologias é necessária; a sensibilidade da técnica e do volume de amostra pequeno disponíveis. É um desafio analítico para fornecer dados reprodutíveis e exactos porque os níveis do neurotransmissor estão frequentemente abaixo da escala de concentração nanomolar e às vezes mesmo abaixo picomolar, assim que a sensibilidade é essencial. Além, a maioria de sistemas do microdialysis podem somente extrair 1 amostra do µL pela acta, assim que mesmo se você prova sobre cinco a dez minutos, você pode somente obter o µL 5-10 da amostra.

Os detectores eletroquímicos, igualmente conhecidos como detectores da análise de traço, são conseqüentemente a escolha óbvia para este tipo de análise. Outros detectores, como o MS ou UV, que exigem volumes de amostra maiores, não são apropriados para esta aplicação específica.

Que são os grandes desafios para cientistas ao detectar e ao analisar neurotransmissor in vivo?

A análise do neurotransmissor vem com um par desafios; o primeiro é o sentido científico. Como podem os pesquisadores obter tanta informação como possível fora de uma gota pequena da amostra?

A neurobiologia é limitada in vivo já pelo tamanho da amostra, especialmente para os pesquisadores que trabalham com ratos, e se você quer executar a amostra de alta freqüência para melhorar sua definição de tempo, as amostras tornam-se mesmo menores (para baixo a 1 µL). Desenvolver as tecnologias que podem analisar amostras pequenas sem sensibilidade de comprometimento é muito um grande desafio.

A outra dificuldade é que a maioria dos cientistas que trabalham na neurologia têm formações académicas na biologia. Isto significa que muitos cientistas o encontram desafiar para analisar amostras pequenas tais como monoamines (por exemplo dopamina) com sensibilidade alta.

Ilustração de pilhas de nervo no cérebro - neurotransmissorTatiana Shepeleva | Shutterstock

Como o analisador do neurotransmissor de ALEXYS endereça estas edições?

O analisador de ALEXYS combina a potência de UHPLC com a sensibilidade da detecção electroquímica, fazendo lhe a ferramenta perfeita para a detecção de neurotransmissor.

Com o ALEXYS, nosso objetivo era facilitar a vida do cientista. Nós quisemos abordar a falta da experiência na indústria e fazer executando estas experiências mais simples e mais eficiente. Medir amostras é de uma parte, mas os cientistas igualmente precisam um método robusto, seguro.

Nós desenvolvemos este com o ALEXYS, e agora monitoramos constantemente que tipo das ferramentas está no mercado para melhorar a definição, a injecção da amostra, e a velocidade, enquanto consumo precioso de diminuição da amostra.

Finalmente, o analisador de ALEXYS é instalado por um de nossos cientistas, que passarão cinco dias no laboratório que realiza a instalação e a formação. Quando nós saimos do laboratório, mesmo o neurocientista o mais inexperiente terá o conhecimento para executar suas próprias amostras para uma aplicação específica.

Como pode o analisador do neurotransmissor de ALEXYS ser usado para estudar níveis da dopamina com relação aos problemas comportáveis (por exemplo apego) e às desordens neurológicas (por exemplo a doença de Parkinson)?

O cérebro é um órgão dinâmico onde a concentração de neurotransmissor possa mudar ràpida após um disparador. Pode, conseqüentemente, vindo como nenhuma surpresa que os pesquisadores neste campo querem recolher muito tantos dados como possível durante um curto período de tempo.

No passado, os cientistas recolhiam 20 amostras do microdialysis do µL, nos caudais altos (2-3 µL/min), dando lhes o µL 40-60 de uma amostra muito diluída. Isto fez difícil obter a definição de tempo suficiente (isto é recolhe bastante pontos de dados em um curto período de tempo) e sem este, você é incapaz de detectar flutuações rápidas na concentração do neurotransmissor.

É por isso nós desenvolvemos um sistema que poderia analisar volumes de amostra muito pequenos (por exemplo µL 1,5) obtivesse cada 1,5 minutos, sem comprometer na sensibilidade (aproximadamente ao redor 100 pM).

Que outras amostras podem o ALEXYS ser usadas para estudar?

Há três ensaios principais usados para a análise dos neurotransmissor. O primeiro ensaio é para monoamines e metabolitos tais como a dopamina, o norepinephrine, e a serotonina.

Em seguida, nós temos um ensaio para ácidos aminados tais como GABA e glutamato. Este ensaio exige a derivatização da pre-coluna e uma análise muito selectiva de UHPLC separar o glutamato, de GABA, no mesmo cromatograma.

Nosso ensaio final é para o acetylcholine e o choline e é realizado usando um reactor imobilizado do reactor (IMER) de enzima onde você converta o acetylcholine/choline no peróxido.

Estes são nossos três grupos principais. Contudo, há igualmente os cientistas que estão usando nosso sistema para a detecção de outros produtos químicos, que adicionam um outro detector. Por exemplo, se um pesquisador precisa de detectar neuropeptides, podem usar o mesmo analisador com um detector UV.

Onde podem os leitores encontrar mais informação?

Sobre Martin Eysberg

Foto de Martin EysbergMartin é o director das vendas e do mercado para Antec científico, e focalizou os produtos/aplicações em torno das necessidades analíticas de neurocientistas. Interessou particularmente em mudanças comportáveis tais como o apego, e nas desordens neurológicas causadas por defeitos na neurotransmissão.

Martin conduz a revelação do mercado para produtos novos, e lançou recentemente o EC de ROXY, um sistema da electroquímica para a espectrometria em massa. A linha de produtos com o foco na simulação de reacções naturais dos redox na linha da Senhora.

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