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Le test de LC-MS/MS pour la progestérone surpasse des immunoessais traditionnels

Les chercheurs ont conçu un moyen bon marché, non envahissant et de détail de surveiller la production de progestérone chez les femmes. La technique neuve emploie la salive et la spectrométrie de masse chromatographie-tandem liquide (LC-MS/MS). La recherche était publiée dans les annales des biochimies cliniques.

Le test de LC-MS/MS pour la progestérone surpasse des immunoessais traditionnelsTimonina | Shutterstock

Les scientifiques ont évité le besoin d'immunoessais de limité-spécificité en employant LC-MS/MS qui fournit l'avantage ajouté d'être haut-débit. Cette analyse nouvelle active le profilage de la progestérone, un indicateur d'ovulation, dans toutes des règles ; un contributeur aux moyens couronnés de succès des glissières reproductrices aidées et inassistées.

Les niveaux de progestérone sont un indicateur intense de fertilité maximale et sont essentiels pour la grossesse. En soi, la surveillance des concentrations en progestérone est une partie essentielle de traitements reproducteurs et des moyens de réduire l'incidence des naissances avant terme.

Les techniques actuelles se fondent sur la collection répétée multiple de prise de sang des femmes sous le contrôle des cliniciens. Ainsi, l'utilisation de la salive abroge le besoin de personnel clinique, qui présente un efficace, réduction des coûts et le moyen non envahissant d'auto-administré, acquisition de multi-échantillon.

Immunoessais contre LC-MS/MS

Les méthodes traditionnelles et disponibles dans le commerce de quantification de progestérone se fondent sur les immunoessais qui souffrent de la spécificité limitée. LC-MS/MS représente des moyens attrayants d'éviter ceci, pourtant son application a été entravée par la préparation des échantillons et les temps de traitement prolongés exigés. Ainsi, le besoin de haut-débit et d'analyse fiable, comme développée par des chercheurs de l'université de Birmingham, présentent des moyens améliorés du futur profilage de progestérone.

La recherche antérieure a indiqué que la salive, par rapport au sang, fournit plus de mesure précise de la forme bioactive de la progestérone, réfléchissant exactement la concentration libre de l'hormone qui est fortement marquée avec la concentration totale pendant la grossesse.

Des analyses salivaires précédentes ont été employées pour diagnostiquer des anomalies congénitales et pour avoir été pour cette raison proposées comme biomarqueur pour la naissance avant terme.

L'équipe, aboutie par le professeur Schiffner et collègues ont développé une opération préparatoire unique, suivie d'une analyse de la haute vitesse LC-MS/MS pour la quantification de la progestérone dans les échantillons entiers de salive. La validation du rendement analytique a expliqué l'aptitude de la méthode pour l'usage courant, mesurant la progestérone tout au long de la période de règles.

Les échantillons salivaires sont alternative avantageuse de ` une'

La méthode a été développée et vérifiée sur neuf échantillons de salive provenant des femmes en bonne santé avec les cycles menstruels réguliers, ne prenant aucune contraception orale. Des participants ont été invités à éviter de brosser des dents avant le ramassage témoin pour éviter la contamination de sang (ce dernier est connu pour élever de manière trompeuse les niveaux stéroïdes salivaires). Les échantillons étaient sujets à un pas à pas exigeant seulement la liquide-extraction pour l'isolement de la progestérone qui a été reconstituée en éthanol de 40%.

Les chercheurs ont par la suite effectué la chromatographie liquide d'ultra-haut-pression (UPLC) qui a été par la suite ajoutée à la milliseconde tandem (MS/MS). Le potentiel pour la concentration en progestérone tombant en dessous de la limite du dépistage et de l'absence de la standardisation des échantillons a été surmonté par l'analyse de LC-MS/MS qui fournit la spécificité et la sélectivité nécessaires pour l'application courante.

La validation rigoureuse du rendement analytique de l'analyse conçue de LC-MS/MS a été effectuée pour assurer l'exactitude et la précision.

Aucune interférence des composés liés au stéroïde

L'analyse a expliqué la sélectivité élevée et était exempte de réaction nuie de détecteur (connue sous le nom d'élimination d'ion) qui a par la suite indiqué précision l'intra- et d'inter-analyse. D'ailleurs, les échantillons sont restés stables après reconstitution.

La préparation des échantillons en une étape de la salive entière a activé le traitement rapide, avec un temps d'exécution de 5,5 mn. La réussite de l'analyse de LC-MS/MS a été réfléchie par l'augmentation observée de la concentration salivaire de la progestérone dans sept des neuf échantillons pendant la phase luteal, en simultané avec le cycle mi-menstruel d'ovulation maximale.

Les concentrations maximales en progestérone ont fait partie des limites imposées par la concentration normale. L'analyse a avec succès expliqué son application dans la surveillance de haut-débit des concentrations physiologiques en progestérone à plusieurs remarques pendant le cycle menstruel d'une façon non envahissante. Crucialement, à la différence des immunoessais, l'analyse de LC-MS/MS n'explique aucune interférence par les composés liés au stéroïde.

De plus, quelques échantillons ont atteint une concentration en progestérone en dessous de la limite inférieure de la quantification (LLOQ) (20 pmol/L) à certaines remarques de temps du cycle menstruel. Les chercheurs indiquent, cependant, que la petite taille de l'échantillon (n=9) exclut par la suite la définition d'une gamme saine de progestérone et des variations naturelles.

Le développement de l'analyse salivaire de progestérone du haut-débit LC-MS/MS par le professeur Schiffer et collègues étend le travail préparatoire pour le développement des gammes de référence robustes pour des concentrations en progestérone dans tout le cycle menstruel de grandes études de la taille de la population.

On l'espère que la technique sera étendue pour comprendre l'application dans le traitement de la maladie - particulièrement dans l'hyperplasie surrénale congénitale, où la progestérone est un biomarqueur pour le traitement stéroïde insuffisant de remontage.


Référence de tourillon :

Une analyse nouvelle de haut-débit pour la mesure de la progestérone salivaire par spectrométrie de masse de tandem de chromatographie liquide. Annales des biochimies cliniques. 2018. DOI : 10.1177/0004563218780904

Cette étude a eu la pleine approbation éthique du Comité éthique de révision de la Science, de technologie, de bureau d'études et de mathématiques de l'université de Birmingham.

Hidaya Aliouche

Written by

Hidaya Aliouche

Hidaya is a science communications enthusiast who has recently graduated and is embarking on a career in the science and medical copywriting. She has a B.Sc. in Biochemistry from The University of Manchester. She is passionate about writing and is particularly interested in microbiology, immunology, and biochemistry.

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