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O teste de LC-MS/MS para a progesterona outperforms immunoassays tradicionais

Os pesquisadores planejaram uns meios baratos, não invasores e do específico monitorar a produção da progesterona nas mulheres. A técnica nova usa a saliva e a espectrometria em massa cromatografia-em tandem líquida (LC-MS/MS). A pesquisa foi publicada nos anais da bioquímica clínica.

O teste de LC-MS/MS para a progesterona outperforms immunoassays tradicionaisTimonina | Shutterstock

Os cientistas contornaram a necessidade para immunoassays da limitado-especificidade empregando LC-MS/MS que fornece a vantagem adicionada de ser alto-produção. Este ensaio novo permite o perfilamento da progesterona, um indicador da ovulação, durante todo a menstruação; um contribuinte aos meios bem sucedidos dos canais reprodutivos ajudados e não-ajudados.

Os níveis da progesterona são um indicador forte da fertilidade máxima e são essenciais para a gravidez. Como tal, a monitoração de concentrações da progesterona é uma parte crucial de terapias reprodutivas e meios reduzir a incidência de nascimentos prematuros.

As técnicas actuais confiam na coleção repetida múltiplo da amostra de sangue das mulheres sob a fiscalização dos clínicos. Assim, o uso da saliva revoga a necessidade para o pessoal clínico, que apresentam um eficaz, redução de gastos e os meios não invasores do auto-administrado, aquisição da multi-amostra.

Immunoassays contra LC-MS/MS

Os métodos tradicionais, disponíveis no comércio da quantificação da progesterona confiam nos immunoassays que sofrem de especificidade limitada. LC-MS/MS representa meios atractivos de impedir isto, contudo sua aplicação foi entravada nos tempos longos da preparação e de processamento da amostra exigidos. Assim, a necessidade para uma alto-produção e um ensaio seguro, como tornado por pesquisadores da universidade de Birmingham, apresenta meios melhorados do perfilamento futuro da progesterona.

A pesquisa prévia indicou que a saliva, em comparação com o sangue, fornece uma medida mais exacta do formulário bioactive da progesterona, refletindo exactamente a concentração livre da hormona que é correlacionada fortemente com a concentração total durante a gravidez.

Os ensaios salivares precedentes foram usados para diagnosticar defeitos congénitos e conseqüentemente para ter sido sugeridos como um biomarker para o nascimento prematuro.

A equipe, conduzida pelo professor Schiffner e colegas desenvolveu uma única etapa preparatória, seguida por um ensaio de alta velocidade de LC-MS/MS para a quantificação da progesterona em amostras inteiras da saliva. A validação do desempenho analítico demonstrou a conformidade do método para o uso corrente, medindo a progesterona ao longo do período da menstruação.

As amostras salivares são uma alternativa vantajosa do `'

O método foi desenvolvido e testado em nove amostras da saliva das mulheres saudáveis com os ciclos menstruais regulares, não tomando nenhuma contracepção oral. Os participantes foram pedidos para evitar escovar os dentes antes da coleção da amostra para evitar a contaminação do sangue (o último é conhecido para elevar falsa níveis esteróides salivares). As amostras eram sujeitas a uma única etapa que exige somente a líquido-extracção para o isolamento da progesterona que foi reconstituída no álcool etílico de 40%.

Os pesquisadores executaram subseqüentemente a cromatografia líquida da ultra-alto-pressão (UPLC) que foi acoplada subseqüentemente com MS em tandem (MS/MS). O potencial para a concentração da progesterona que cai abaixo do limite de detecção e da ausência de normalização das amostras foi superado pelo ensaio de LC-MS/MS que fornece a especificidade e a selectividade necessárias para a aplicação rotineira.

A validação estrita do desempenho analítico do ensaio planejado de LC-MS/MS foi realizada para assegurar a precisão e a precisão.

Nenhuma interferência dos compostos esteróide-relacionados

O ensaio demonstrou a selectividade alta e estêve livre da resposta danificada do detector (conhecida como a supressão do íon) que indicou subseqüentemente a precisão intra e do inter-ensaio. Além disso, as amostras permaneceram estáveis depois da reconstituição.

A preparação de uma etapa da amostra da saliva inteira permitiu o processamento rápido, com um tempo de execução de 5,5 minutos. O sucesso do ensaio de LC-MS/MS foi reflectido pelo aumento observado na concentração salivar de progesterona em sete das nove amostras durante a fase luteal, simultâneo com o ciclo meados de-menstrual da ovulação máxima.

As concentrações máximas da progesterona caíram dentro dos limites impor pela concentração padrão. O ensaio demonstrou com sucesso sua aplicação na monitoração da alto-produção de concentrações fisiológicos da progesterona em diversos pontos durante o ciclo menstrual em uma maneira não invasora. Crucial, ao contrário dos immunoassays, o ensaio de LC-MS/MS não demonstra nenhuma interferência por compostos esteróide-relacionados.

Além, algumas amostras alcançaram uma concentração da progesterona abaixo do limite mais baixo da quantificação (LLOQ) (20 pmol/L) em determinados pontos do tempo do ciclo menstrual. Os pesquisadores indicam, contudo, que o tamanho da amostra pequeno (n=9) impossibilita subseqüentemente a definição de uma escala saudável da progesterona e de umas variações naturais.

A revelação do ensaio salivar da progesterona da alto-produção LC-MS/MS pelo professor Schiffer e colegas coloca o fundamento para a revelação de escalas de referência robustas para concentrações da progesterona durante todo o ciclo menstrual dos grandes estudos população-largos.

Espera-se que a técnica estará estendida para incluir a aplicação na terapia da doença - especificamente na hiperplasia ad-renal congenital, onde a progesterona é um biomarker para a terapia esteróide inadequada da substituição.


Referência do jornal:

Um ensaio novo da alto-produção para a medida da progesterona salivar pela espectrometria em massa em tandem de cromatografia líquida. Anais da bioquímica clínica. 2018. DOI: 10.1177/0004563218780904

Este estudo teve a aprovação ética completa do comitê ético da revisão da ciência, da tecnologia, da engenharia e da matemática da universidade de Birmingham.

Hidaya Aliouche

Written by

Hidaya Aliouche

Hidaya is a science communications enthusiast who has recently graduated and is embarking on a career in the science and medical copywriting. She has a B.Sc. in Biochemistry from The University of Manchester. She is passionate about writing and is particularly interested in microbiology, immunology, and biochemistry.

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