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La prueba de LC-MS/MS para la progesterona supera immunoensayos tradicionales

Los investigadores han ideado medios baratos, no invasores y del específico de vigilar la producción de la progesterona en mujeres. La nueva técnica utiliza la saliva y la espectrometría de masa cromatografía-en tándem líquida (LC-MS/MS). La investigación fue publicada en los anales de la bioquímica clínica.

La prueba de LC-MS/MS para la progesterona supera immunoensayos tradicionalesTimonina | Shutterstock

Los científicos evitaron la necesidad de immunoensayos de la limitado-especificidad empleando LC-MS/MS que ofrece la ventaja adicional de ser alto-producción. Este análisis nuevo habilita el perfilado de la progesterona, un indicador de la ovulación, en la menstruación; un contribuidor a los medios acertados de canales reproductivos ayudados y sin asistencia.

Los niveles de la progesterona son un indicador fuerte de la fertilidad máxima y son esenciales para el embarazo. Como tal, el vigilar de las concentraciones de la progesterona es una parte crucial de terapias reproductivas y los medios de reducir la incidencia de nacimientos prematuros.

Las técnicas actuales confían en la colección relanzada múltiplo de la muestra de sangre de mujeres bajo vigilancia de clínicos. Así, el uso de la saliva abroga la necesidad del personal clínico, que presenta un efectivo, reducción de los costes y los medios no invasores de uno mismo-administrado, adquisición de la multi-muestra.

Immunoensayos comparado con LC-MS/MS

Los métodos tradicionales, disponibles en el comercio de la cuantificación de progesterona confían en los immunoensayos que sufren de especificidad limitada. LC-MS/MS representa medios atractivos de prevenir esto, con todo su uso ha estado bloqueado por la preparación y los tiempos de procesamiento muy largos de la muestra requeridos. Así, la necesidad de una alto-producción y de un análisis seguro, según lo convertido por los investigadores de la universidad de Birmingham, presenta medios perfeccionados del perfilado futuro de la progesterona.

La investigación anterior ha indicado que la saliva, con respecto a sangre, ofrece una medición más exacta de la forma bioactiva de la progesterona, reflejando exacto la concentración libre de la hormona que se correlaciona fuertemente con la concentración total durante embarazo.

Los análisis salivales anteriores se han utilizado para diagnosticar defectos de nacimiento y por lo tanto para haber sido sugeridos como biomarker para el nacimiento prematuro.

Las personas, llevadas por el profesor Schiffner y colegas han desarrollado un único paso preparatorio, seguido por un análisis de alta velocidad de LC-MS/MS para la cuantificación de la progesterona en muestras enteras de la saliva. La validación del funcionamiento analítico demostró la conveniencia del método para el uso rutinario, midiendo la progesterona en el período de la menstruación.

Las muestras salivales son opción ventajosa del ` una'

El método fue desarrollado y probado en nueve muestras de la saliva de mujeres sanas con los ciclos menstruales regulares, no tomando ninguna contracepción oral. Pidieron los participantes evitar aplicar los dientes con brocha antes de la colección de la muestra para evitar la contaminación de la sangre (conocen a este último para elevar falso niveles esteroides salivales). Las muestras estaban conforme a un único paso que requería solamente la líquido-extracción para el aislamiento de la progesterona que fue reconstituida en etanol del 40%.

Los investigadores realizaron posteriormente la cromatografía líquida de la ultra-alto-presión (UPLC) que fue acoplada posteriormente con ms en tándem (MS/MS). El potencial para la concentración de la progesterona que bajaba abajo del límite de detección y de la ausencia de estandarización de muestras fue vencido por el análisis de LC-MS/MS que ofrece la especificidad y la selectividad necesarias para el uso rutinario.

La validación rigurosa del funcionamiento analítico del análisis ideado de LC-MS/MS fue realizada para asegurar exactitud y la precisión.

Ninguna interferencia de composiciones esteroide-relacionadas

El análisis demostró alta selectividad y estaba libre de la reacción empeorada del detector (conocida como supresión del ión) que indicó posteriormente la precisión intra y del inter-análisis. Por otra parte, las muestras seguían siendo estables después de la reconstitución.

La preparación de un solo paso de la muestra de la saliva entera habilitó el tramitación rápido, con un tiempo de ejecución de 5,5 minutos. El éxito del análisis de LC-MS/MS fue reflejado por el aumento observado en la concentración salival de progesterona en siete de las nueve muestras durante la fase luteal, simultáneo con el ciclo mediados de-menstrual de la ovulación máxima.

Las concentraciones máximas de la progesterona bajaron dentro de los límites impuestos por la concentración estándar. El análisis demostró con éxito su uso en la supervisión de la alto-producción de las concentraciones fisiológicas de la progesterona en varios puntos durante el ciclo menstrual de una manera no invasor. Crucial, a diferencia de immunoensayos, el análisis de LC-MS/MS no demuestra ninguna interferencia por las composiciones esteroide-relacionadas.

Además, algunas muestras alcanzaron una concentración de la progesterona abajo del límite más inferior de la cuantificación (LLOQ) (20 pmol/L) en ciertos puntos del tiempo del ciclo menstrual. Los investigadores indican, sin embargo, que el pequeño tamaño de muestra (n=9) impide posteriormente la definición de un alcance sano de la progesterona y de variaciones naturales.

El revelado del análisis salival de la progesterona de la alto-producción LC-MS/MS del profesor Schiffer y colegas pone la base para el revelado de los alcances de referencia robustos para las concentraciones de la progesterona en el ciclo menstrual de estudios población-anchos grandes.

Se espera que la técnica será ampliada para incluir el uso en terapia de la enfermedad - específicamente en hiperplasia suprarrenal congénita, donde está un biomarker la progesterona para la terapia esteroide inadecuada del repuesto.


Referencia del gorrón:

Un análisis nuevo de la alto-producción para la medición de la progesterona salival por espectrometría de masa del tándem de la cromatografía líquida. Los anales de la bioquímica clínica. 2018. DOI: 10.1177/0004563218780904

Este estudio tenía aprobación ética completa del comité ético de la revista de la ciencia, de la tecnología, de la ingeniería y de las matemáticas de la universidad de Birmingham.

Hidaya Aliouche

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Hidaya Aliouche

Hidaya is a science communications enthusiast who has recently graduated and is embarking on a career in the science and medical copywriting. She has a B.Sc. in Biochemistry from The University of Manchester. She is passionate about writing and is particularly interested in microbiology, immunology, and biochemistry.

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