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Remise en question de la technique de Glo-Germe pour l'endiguement d'aérosol pendant trier de cellules

L'endiguement des flots à haute pression d'échantillon biologique produits par des trieuses de cellules de cytometer de flux est biologiquement impérieux ; le risque d'exposition (potentiellement) aux agents infectieux doit être atténué. Par la suite, les niveaux de évaluation de l'endiguement d'aérosol sont impérieux pour l'affirmation de sécurité biologique.

Une équipe de recherche du centre national d'analyse et de contre-mesures de Biodefense (NBACC) ont développé une analyse robuste pour déterminer l'endiguement d'aérosol de trieuse de cellules qui est rapide, abordable, et efficace. La méthode neuve conteste le statu quo d'industrie - la procédure de talon de germe de ‐ de Glo - qui, bien que très utilisée, a plusieurs inconvénients.

Stephen Perfetto et équipe a réussi à développer une méthode neuve utilisant les talons fluorescents verts de compacteur du ‐ d de Cyclex et de microsphère de dragon. Sa plus petites condition et sensibilité d'échantillonnage le positionne fortement comme analyse de remontage pour la procédure normale de talon de Glo-Germe.  

Cellule pour lDesign_Cells | Shutterstock

Les disparus de Glo-Germe sont-ils le repère comme test efficace d'endiguement ?

La cellule moderne triant des cytometers de flux sont équipées d'un dispositif important de sécurité biologique : systèmes d'endiguement d'aérosol. Les trieuses emploient une méthode de tri de flot-dans-air réalisée par la création des avions à réaction de microdroplet d'un gicleur. L'obstruction du gicleur triant tend à augmenter l'incidence de la formation d'aérosol, rendant nécessaire l'endiguement des échantillons aerosolized pour atténuer le risque d'exposition de conducteur aux agents infectieux.

La production des échantillons aerosolized se produit de cette façon pendant le mode de défaillir (FM), qui décrit le fonctionnement anormal de la trieuse de cellules due à l'obstruction partielle de gicleur et les écarts dans l'échantillon coulent. Selon la plus défunte société internationale pour l'avancement des normes de sécurité biologique de trieuse de cellules de la cytométrie (ISAC), l'endiguement d'aérosol doit être validé par des analyses exécutées à plusieurs intervalles.

La mesure la plus populaire pour le contrôle d'endiguement est la procédure de talon de Glo-Germe ; l'analyse mesure le desserrage des talons de résine de copolymère de mélamine qui sont hautement fluorescents. Tous les talons échappant à la chambre de tri sont rassemblés sur un guide de microscope pour l'énumération par l'intermédiaire de la microscopie fluorescente.

En dépit de sa popularité, la méthode souffre plusieurs inconvénients. Premièrement, le compacteur est inexactement utilisé - type il est conçu pour rassembler des bio-aérosols des plaques d'agar pour l'analyse d'accroissement. Ceci détermine un diamètre de coupure, ou d50, de 0,65. Une fois utilisée pour des fins du test d'endiguement, l'installation de lamelle de verre modifie le d50 entraînant par la suite une sous-estimation d'aérosol échappé. En conclusion, la plus grande limitation posée par le compacteur d'Aerotech est la nécessité d'être complètement nettoyée pour éviter les particules de vestige qui pourraient produire des faux positifs.

Y a-t-il une meilleure voie de contenir le pulvérisateur d'aérosol pendant l'échec de trieuse ?

Pour adresser ces inconvénients, l'équipe a développé une trieuse nouvelle de cellules aux révisions la procédure de Glo-Germe. L'article, publié dans la partie A De cytométrie : Le tourillon de la Science quantitative de cellules, contours une procédure de remontage utilisant un compacteur du ‐ d de Cyclex et les talons verts (DG) de dragon a conduit sur une trieuse modèle de cellules du BD FACSAria II, utilisant une particule Sizer d'aérosol équipée d'un laser d'UV.

Le compacteur de Cyclex-d a été mis près de la trieuse de cellules pour rassembler les échantillons aerosolized pendant le FM. L'équipe comparée cette procédure au sizer aérodynamique UV de particules du ‐ aps et à une teinture excitable de ‐ UV. Ce type de bilan d'endiguement est une méthode en temps réel qui fournit l'avantage de la détermination immédiate des comptages de particules mais souffre l'inconvénient des frais.

Les avantages du dragon de Cyclex-d perlent la procédure

L'équipe a déterminé que 1μm de microsphères de dg étaient préposé du service de la classe de grandeur relâchée. L'utilisation du compacteur de Cyclex-d et l'utilisation des magasins remplaçables et des microsphères fluorescentes ont assuré le bruit de fond inférieur ; de plus, le rendement de ramassage du compacteur approche 100% comme AD médiane (μm 1,6) > le d50 du ‐ d (1 μm) de Cyclex.

En mesurant l'aérosol rassemblé, la procédure a réfléchi une sensibilité élevée ; le plus à basse altitude du dépistage affichant 0,04 aerosols/cm3, un chiffre approchant les mesures d'aérosol de mouvement propre. La sensibilité élevée a été réalisée en dépit de la basse fréquence de gouttelettes microsphère-occupées - un cas attribué au volume d'échantillonnage plus élevé d'air capté par le ‐ d de Cyclex contre le ‐ UV aps au-dessus des périodes de temps identiques. Par la suite, la position de groupe que la sensibilité pourrait être augmentée en augmentant le temps de ramassage.

Le système de gestion d'aérosol (AMS) était de façon concluante robuste, comme jusqu'à 70% d'air peut être détruit avant que l'endiguement soit compromis.  Ceci qui trouve fournit une méthode efficace d'endiguement de surveillance pendant le fonctionnement de trieuse de cellules et sert de des moyens complémentaires du contrôle d'endiguement comme recommandé par les normes de sécurité biologique de trieuse de cellules de SAC.

La méthode de dg de Cyclex-d/s'applique aux trieuses de cellules autres que le modèle du BD FACSAria II. Pour faire tellement et autres, proposez que les conducteurs devraient considérer (1) la distance du ‐ d de Cyclex, à la chambre triante (recommandée pour être aussi court que possible) ; (2) optimisant la méthode pour produire FM qui est préposé du service de véritable obstruction partielle de gicleur ; (3) déterminant la meilleure forme du contrôle positif c.-à-d. quand l'AMS n'est pas en ligne et l'instrument est réglé à FM (4) signifie pour éviter des faux positifs ou des ouvrages généraux sur le sujet pour les trieuses jointes et non-ci-jointes de cellules afin d'assurer l'exactitude et la spécificité et (5) haute performance de ramassage d'aérosol, dans la marge d'AD de la trieuse de cellules.

Le travail de Perfetto et de collègues a fourni un dispositif amélioré de sécurité biologique pour les trieuses de cellules qui trient les échantillons innofensifs et infectieux. En dépit du recours recommandé à la procédure de germe de ‐ de Glo afin de la surveillance d'endiguement de cellules, son adoption par des laboratoires de trieuse de cellules est mauvaise.

Les inconvénients - nettoyage considérable et largement taille variable de talon - sont les coupables. La procédure de Cyclex-d/dg présente un test rapide, robuste et efficace d'endiguement pour des aérosols produits pendant trier de cellules et le ` d'équipe recommandé comme analyse de remontage méthode de ramassage pour de Glo de ‐ de germe/Aerotech compacteur précédemment publié'.


Accusés de réception/financement

Les vues et les conclusions contenues dans ce document sont ceux des auteurs et ne devraient pas être interprétées selon les besoins représenter les polices officielles, exprimées ou implicites, du CSAD ou de la S & T.

Ce travail a été financé sous contrat le ‐ 00064 du ‐ C du ‐ 15 non HSHQDC attribué par le service de la direction de la science et technologie de la garantie de patrie (CSAD) (S & T) pour l'exécution et le management du centre national d'analyse et de contre-mesures de Biodefense (NBACC), un centre fédéralement financé de recherche et développement.

Les bailleurs de fonds n'ont eu aucun rôle dans le modèle, la collecte des informations et l'analyse, la décision à publier, ou la préparation d'étude du manuscrit. Ce travail a été supporté par le programme de recherche intra-muros du programme de recherche vaccinique, NIH.

Journal reference:

Perfetto, S.F. et al. (2019) Novel Impactor and Microsphere‐Based Assay Used to Measure Containment of Aerosols Generated in a Flow Cytometer Cell Sorter. Cytometry Part A: Journal of Quantitative Cell Science. https://doi.org/10.1002/cyto.a.23680

Hidaya Aliouche

Written by

Hidaya Aliouche

Hidaya is a science communications enthusiast who has recently graduated and is embarking on a career in the science and medical copywriting. She has a B.Sc. in Biochemistry from The University of Manchester. She is passionate about writing and is particularly interested in microbiology, immunology, and biochemistry.

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