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Sfidare la tecnica del Glo-Germe per contenimento dell'aerosol durante l'ordinamento delle cellule

Il contenimento dei flussi biologici alto-fatti pressione su del campione generati dai visori inclinati per diapositive delle cellule di cytometer di flusso è biologicamente di importanza fondamentale; il rischio di esposizione (potenzialmente) agli agenti infettante deve attenuarsi. Successivamente, i livelli di valutazione di contenimento dell'aerosol sono di importanza fondamentale per assicurazione di sicurezza biologica.

Un gruppo dei ricercatori dal centro nazionale dell'analisi e di contromisure di biodifesa (NBACC) ha sviluppato un'analisi robusta per determinare il contenimento dell'aerosol del visore inclinato per diapositive delle cellule che è rapido, accessibile ed efficiente. Il nuovo metodo sfida lo status quo dell'industria - la procedura della perla del germe del ‐ di Glo - che, sebbene ampiamente usata, abbia parecchi svantaggi.

Stephen Perfetto e gruppo è riuscito a mettere a punto un nuovo metodo che utilizza le perle fluorescenti verdi del conimetro a urto del ‐ d di Cyclex e di microsfera del drago. Il sui più piccoli requisito e sensibilità di campionatura lo posiziona forte come analisi della sostituzione per la procedura standard della perla del Glo-Germe.  

Cella per uso nellDesign_Cells | Shutterstock

È la mancanza del Glo-Germe il voto come efficace prova di contenimento?

La cella moderna che ordina i cytometers di flusso misura con un'unità importante di sicurezza biologica: sistemi di contenimento dell'aerosol. I visori inclinati per diapositive usano un metodo di cernita dell'flusso-in-aria raggiunto tramite la creazione dei jei di microdroplet da un ugello. Il bloccaggio dell'ugello d'ordinamento tende ad aumentare l'incidenza di formazione dell'aerosol, necessitante il contenimento dei campioni aerosolizzati per attenuare il rischio di esposizione dell'operatore agli agenti infettante.

La produzione dei campioni aerosolizzati in questo modo si presenta durante il modo di venire a mancare (FM), che descrive il funzionamento aberrante del visore inclinato per diapositive delle cellule dovuto l'ostruzione parziale dell'ugello e le deviazioni nel campione scorrono. Secondo l'ultima società internazionale per l'avanzamento degli standard di sicurezza biologica del visore inclinato per diapositive delle cellule di Cytometry (ISAC), il contenimento dell'aerosol deve essere convalidato dalle analisi eseguite a parecchi intervalli.

La misura più popolare per la prova di contenimento è la procedura della perla del Glo-Germe; l'analisi misura la versione delle perle della resina del copolimero della melammina che sono altamente fluorescenti. Tutte le perle che sfuggono alla camera di ordinamento sono raccolte su una diapositiva del microscopio per enumerazione via microscopia fluorescente.

Malgrado la sua popolarità, il metodo soffre parecchi svantaggi. In primo luogo, il conimetro a urto è utilizzato in modo errato - è destinato tipicamente per raccogliere gli bio--aerosol sulle piastre di agar per l'analisi della crescita. Ciò stabilisce un diametro di taglio, o la d50, di 0,65. Una volta usata per gli scopi di prova di contenimento, l'impostazione della lastra di vetro altera la d50 successivamente che causa una sottovalutazione di aerosol sfuggito a. Per concludere, la più grande limitazione posata dal conimetro a urto di Aerotech è la necessità di essere pulito completamente per evitare le particelle di contratto di riporto che potrebbero generare i falsi positivi.

C'è un migliore modo contenere lo spruzzo di aerosol durante l'errore del visore inclinato per diapositive?

Per indirizzare questi svantaggi, il gruppo ha sviluppato un visore inclinato per diapositive novello delle cellule alle revisioni la procedura del Glo-Germe. L'articolo, pubblicato nella parte A Di Cytometry: Il giornale di scienza quantitativa delle cellule, profili una procedura della sostituzione che utilizzano un conimetro a urto del ‐ d di Cyclex e perle verdi (DG) del drago ha condotto su un visore inclinato per diapositive di modello delle cellule del BD FACSAria II, facendo uso di una particella Sizer dell'aerosol fornito di laser UV.

Il conimetro a urto di Cyclex-d è stato collocato vicino al visore inclinato per diapositive delle cellule per raccogliere i campioni aerosolizzati durante il FM. Il gruppo ha confrontato questa procedura al sizer aerodinamico della particella di APS del ‐ UV e ad una tintura eccitabile del ‐ UV. Questo tipo di valutazione di contenimento è un metodo in tempo reale che fornisce il vantaggio della determinazione immediata dei conteggi di particella ma soffre lo svantaggio di spesa.

I vantaggi del drago di Cyclex-d bordano la procedura

Il gruppo ha determinato che 1μm delle microsfere della DG erano rappresentante dell'intervallo di grandezza rilasciato. L'uso del conimetro a urto di Cyclex-d e l'uso dei caricatore 35mm a perdere e delle microsfere fluorescenti hanno assicurato il rumore di fondo basso; più ulteriormente, il risparmio di temi della raccolta del conimetro a urto si avvicina a 100% come l'ANNUNCIO mediano (μm 1,6) > la d50 del ‐ la d (1 μm) di Cyclex.

Nel misurare l'aerosol raccolto, la procedura ha riflesso un'alta sensibilità; il più a basso livello di rilevazione che legge 0,04 aerosols/cm3, una figura che si avvicina alle misure dell'aerosol di sfondo. L'alta sensibilità è stata raggiunta malgrado la bassa frequenza delle goccioline microsfera-occupate - un avvenimento attribuito all'più alto volume di campionatura di aria catturato dal ‐ d di Cyclex contro il ‐ UV APS per i periodi di tempo identici. Successivamente, la posizione del gruppo che la sensibilità potrebbe essere aumentata aumentando il tempo della raccolta.

Il sistema di gestione dell'aerosol (AMS) era in modo dimostrabile robusto, come fino a 70% di aria può essere perso prima che il contenimento fosse compromesso.  Ciò che trova fornisce un efficace metodo di contenimento di video durante l'operazione del visore inclinato per diapositive delle cellule e servisce dai mezzi supplementari di prova di contenimento come raccomandato dagli standard di sicurezza biologica del visore inclinato per diapositive delle cellule del SACCO.

Il metodo della DG di Cyclex-d/è applicabile ai visori inclinati per diapositive delle cellule all'infuori del modello del BD FACSAria II. Per agire in tal modo et al., suggerisca che gli operatori dovrebbero considerare (1) distanza dal ‐ d di Cyclex, alla camera d'ordinamento (raccomandata per essere breve quanto possibile); (2) ottimizzando il metodo per la creazione del FM che è rappresentante di vera ostruzione parziale dell'ugello; (3) determinare il migliore modulo di controllo positivo cioè quando l'AMS è disinserito e dello strumento è collocata a FM (4) significa impedire i falsi positivi o le letture del contesto per sia i visori inclinati per diapositive uniti che non qui acclusi delle cellule per assicurare l'accuratezza e la specificità e (5) alta efficienza della raccolta dell'aerosol, all'interno dell'intervallo dell'ANNUNCIO del visore inclinato per diapositive delle cellule.

Il lavoro di Perfetto e dei colleghi ha fornito un'unità migliore di sicurezza biologica per i visori inclinati per diapositive delle cellule che ordinano sia i campioni innocui che contagiosi. Malgrado l'uso raccomandato della procedura del germe del ‐ di Glo ai fini del video di contenimento delle cellule, la sua approvazione dai laboratori del visore inclinato per diapositive delle cellule è povera.

Gli svantaggi - estesa pulizia ed ampiamente dimensione variabile della perla - sono i colpevoli. La procedura di Cyclex-d/DG presenta una prova rapida, robusta ed efficiente di contenimento per gli aerosol prodotti durante l'ordinamento delle cellule e il ` del gruppo raccomandato come analisi della sostituzione per metodo di raccolta di Glo del ‐ del conimetro a urto precedentemente pubblicato del germe/Aerotech'.


Ringraziamenti/finanziamento

Le visualizzazioni e le conclusioni contenute in questo documento sono quelle degli autori e non dovrebbero essere interpretate se del caso la rappresentazione delle polizze ufficiali, espresse o implicite, del DHS o dello S&t.

Questo lavoro è stato costituito un fondo per sotto contratto il ‐ 00064 del ‐ C del ‐ 15 no HSHQDC ricevuto dal dipartimento della direzione di scienza e tecnologia di obbligazione di patria (DHS) (S&T) per l'organizzazione e gestione dell'analisi e delle contromisure nazionali di biodifesa concentrano (NBACC), un centro federalmente costituito un fondo per di ricerca e sviluppo.

I finanziatori non hanno avuti ruolo nella progettazione di studio, raccolta di dati e l'analisi, decisione da pubblicare, o preparato del manoscritto. Questo lavoro è stato supportato dal programma di ricerca interno del programma di ricerca vaccino, NIH.

Journal reference:

Perfetto, S.F. et al. (2019) Novel Impactor and Microsphere‐Based Assay Used to Measure Containment of Aerosols Generated in a Flow Cytometer Cell Sorter. Cytometry Part A: Journal of Quantitative Cell Science. https://doi.org/10.1002/cyto.a.23680

Hidaya Aliouche

Written by

Hidaya Aliouche

Hidaya is a science communications enthusiast who has recently graduated and is embarking on a career in the science and medical copywriting. She has a B.Sc. in Biochemistry from The University of Manchester. She is passionate about writing and is particularly interested in microbiology, immunology, and biochemistry.

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