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Desafiando a técnica do Glo-Germe para a retenção do aerossol durante a classificação da pilha

A retenção dos córregos biológicos alto-exercidos pressão sobre da amostra gerados por classificadores da pilha do cytometer do fluxo é biològica imperativa; o risco de exposição (potencial) aos agentes infecciosos deve ser abrandado. Subseqüentemente, os níveis de avaliação de retenção do aerossol são imperativos para a segurança da seguridade biológica.

Uma equipe dos pesquisadores do centro nacional da análise e das medidas defensivas do Biodefense (NBACC) desenvolveu um ensaio robusto para determinar a retenção do aerossol do classificador da pilha que é rápida, disponível, e eficiente. O método novo desafia o status quo da indústria - o procedimento do grânulo do germe do ‐ de Glo - que, embora amplamente utilizado, tem diversos inconvenientes.

Stephen Perfetto e equipe sucedeu em desenvolver um método novo que utiliza grânulos fluorescentes verdes do elemento de impacte do ‐ d de Cyclex e da microsfera do dragão. Suas exigência e sensibilidade menores da amostra posicionam-no fortemente como o ensaio da substituição para o procedimento padrão do grânulo do Glo-Germe.  

Pilha para o uso na classificação da pilhaDesign_Cells | Shutterstock

São os desaparecidos do Glo-Germe a marca como um teste eficaz da retenção?

A pilha moderna que classifica cytometers do fluxo é cabida com um dispositivo importante da seguridade biológica: sistemas de retenção do aerossol. Os classificadores usam um método de classificação do córrego-em-ar conseguido pela criação de jatos do microdroplet de um bocal. O bloqueio do bocal de classificação tende a aumentar a incidência da formação do aerossol, necessitando a retenção de amostras aerosolized para abrandar o risco de exposição do operador aos agentes infecciosos.

A produção de amostras aerosolized ocorre desta maneira durante o modo da falha (FM), que descreve o funcionamento aberrante do classificador da pilha devido à obstrução parcial do bocal e os desvios na amostra fluem. De acordo com a sociedade internacional a mais atrasada para o avanço de padrões da seguridade biológica do classificador da pilha do Cytometry (ISAC), a retenção do aerossol deve ser validada pelos ensaios executados em diversos intervalos.

A medida a mais popular para o teste da retenção é o procedimento do grânulo do Glo-Germe; o ensaio mede a liberação dos grânulos da resina do copolímero da melamina que são altamente fluorescentes. Todos os grânulos que escapam a câmara do tipo são recolhidos em uma corrediça do microscópio para a enumeração através da microscopia fluorescente.

Apesar de sua popularidade, o método sofre diversos inconvenientes. Em primeiro lugar, o elemento de impacte é usado incorrectamente - é projectado tipicamente recolher bio-aerossóis em placas de ágar para a análise do crescimento. Isto estabelece um diâmetro da interrupção, ou d50, de 0,65. Quando usada para finalidades de teste da retenção, a instalação da placa de vidro altera o d50 que causa subseqüentemente um underestimation do aerossol escapado. Finalmente, a limitação a mais grande levantada pelo elemento de impacte de Aerotech é a necessidade de ser limpado completamente para evitar as partículas do transporte que poderiam gerar falsos positivos.

Há uma maneira melhor de conter o pulverizador de aerossol durante a falha do classificador?

Para endereçar estes inconvenientes, a equipe desenvolveu um classificador novo da pilha às revisões o procedimento do Glo-Germe. O artigo, publicado na parte A do Cytometry: O jornal da ciência quantitativa da pilha, esboços um procedimento da substituição que utilizam um elemento de impacte do ‐ d de Cyclex e grânulos verdes (DG) do dragão conduziu em um classificador modelo da pilha do BD FACSAria II, usando uma partícula Sizer do aerossol equipado com um laser UV.

O elemento de impacte de Cyclex-d foi colocado perto do classificador da pilha para recolher amostras aerosolized durante FM. A equipe comparou este procedimento ao sizer aerodinâmico da partícula dos APS do ‐ UV e a uma tintura excitável do ‐ UV. Este tipo de avaliação da retenção é um método do tempo real que forneça a vantagem da determinação imediata de contagens de partícula mas sofre o inconveniente da despesa.

As vantagens do dragão de Cyclex-d perlam o procedimento

A equipe determinou que 1μm de microsfera do DG eram representante da escala do tamanho liberada. O uso do elemento de impacte de Cyclex-d e o uso de gavetas descartáveis e de microsfera fluorescentes asseguraram o baixo ruído de fundo; mais, a eficiência da coleção do elemento de impacte aproxima 100% como o ANÚNCIO mediano (μm 1,6) > o d50 do ‐ d de Cyclex (1 μm).

Ao medir o aerossol recolhido, o procedimento reflectiu uma sensibilidade alta; o mais de baixo nível da detecção que lê 0,04 aerosols/cm3, uma figura que aproxima as medidas do aerossol do fundo. A sensibilidade alta foi conseguida apesar do de baixa frequência de gotas microsfera-ocupadas - uma ocorrência atribuída ao volume de amostra mais alto de ar capturado pelo ‐ d de Cyclex contra o ‐ UV APS durante períodos de tempo idênticos. Subseqüentemente, a postura do grupo que a sensibilidade poderia ser aumentada aumentando o tempo da coleção.

O sistema de gestão do aerossol (AMS) era demonstrably robusto, como até 70% do ar pode ser perdido antes que a retenção esteja comprometida.  Isto que encontra fornece um método eficaz da retenção da monitoração durante a operação do classificador da pilha e serve como meios suplementares do teste da retenção como recomendado pelos padrões da seguridade biológica do classificador da pilha do SACO.

O método do DG de Cyclex-d/é aplicável aos classificadores da pilha diferentes do modelo do BD FACSAria II. Para fazer tão e outros, sugira que os operadores considerem (1) a distância do ‐ d de Cyclex, à câmara de classificação (recomendada ser tão curto quanto possível); (2) aperfeiçoando o método para criar FM que é representante da obstrução parcial verdadeira do bocal; (3) determinando o melhor formulário do controle positivo isto é quando o AMS estiver e o instrumento estiver ajustado a FM (4) significa impedir falsos positivos ou leituras de fundo para classificadores fechados e não-incluidos da pilha a fim assegurar a precisão e a especificidade e a eficiência elevada (de 5) da coleção do aerossol, dentro da escala do ANÚNCIO do classificador da pilha.

O trabalho de Perfetto e de colegas forneceu um dispositivo melhorado da seguridade biológica para os classificadores da pilha que classificam amostras inócuos e infecciosas. Apesar do uso recomendado do procedimento do germe do ‐ de Glo com a finalidade da monitoração da retenção da pilha, sua adopção por laboratórios do classificador da pilha é deficiente.

Os inconvenientes - limpeza extensiva e extensamente tamanho variável do grânulo - são os culpados. O procedimento de Cyclex-d/DG apresenta um teste rápido, robusto e eficiente da retenção para os aerossóis produzidos durante a classificação da pilha e o ` da equipe recomendado como um ensaio da substituição para método de coleção do elemento de impacte previamente publicado do germe/Aerotech do ‐ de Glo'.


Reconhecimentos/financiamento

As vistas e as conclusões contidas neste original são aquelas dos autores e não devem ser interpretadas como necessariamente a representação das políticas oficiais, expressadas ou implicadas, do sistema de alimentação de originais ou do W&T.

Este trabalho foi financiado sob o ‐ 00064 do ‐ C do ‐ 15 do contrato não HSHQDC concedido pelo departamento da ciência da segurança interna (sistema de alimentação de originais) e da direcção da tecnologia (W&T) para a operação e a gestão do centro nacional da análise e das medidas defensivas do Biodefense (NBACC), um centro federal financiado da investigação e desenvolvimento.

Os investidores não tiveram nenhum papel no projecto do estudo, o levantamento de dados e a análise, a decisão a publicar, ou a preparação do manuscrito. Este trabalho foi apoiado pelo programa de investigação interno do programa de investigação vacinal, NIH.

Journal reference:

Perfetto, S.F. et al. (2019) Novel Impactor and Microsphere‐Based Assay Used to Measure Containment of Aerosols Generated in a Flow Cytometer Cell Sorter. Cytometry Part A: Journal of Quantitative Cell Science. https://doi.org/10.1002/cyto.a.23680

Hidaya Aliouche

Written by

Hidaya Aliouche

Hidaya is a science communications enthusiast who has recently graduated and is embarking on a career in the science and medical copywriting. She has a B.Sc. in Biochemistry from The University of Manchester. She is passionate about writing and is particularly interested in microbiology, immunology, and biochemistry.

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    Aliouche, Hidaya. (2019, July 25). Desafiando a técnica do Glo-Germe para a retenção do aerossol durante a classificação da pilha. News-Medical. Retrieved on July 30, 2021 from https://www.news-medical.net/news/20190725/Challenging-the-Glo-Germ-Technique-for-Aerosol-Containment-During-Cell-Sorting.aspx.

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