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Desafiar la técnica del Glo-Germen para la contención del aerosol durante la clasificación de la célula

La contención de las corrientes biológicas alto-ejercidas presión sobre de la muestra generadas por los compaginadores de la célula del cytometer del flujo es biológico imprescindible; el riesgo de exposición (potencialmente) a los agentes infecciosos debe ser atenuado. Posteriormente, los niveles de evaluación de contención del aerosol son imprescindible para la garantía de la seguridad biológica.

Las personas de investigadores del centro nacional del análisis y de las contramedidas del Biodefense (NBACC) han desarrollado un análisis robusto para determinar la contención del aerosol del compaginador de la célula que es rápida, asequible, y eficiente. El nuevo método desafía el status quo de la industria - el procedimiento de la moldura del germen del ‐ de Glo - que, aunque sea ampliamente utilizado, tiene varias desventajas.

Stephen Perfetto y personas tuvo éxito en desarrollar un nuevo método que utilizaba molduras fluorescentes verdes del impactador del ‐ d de Cyclex y de la microesfera del dragón. Su requisito y sensibilidad más pequeños del muestreo lo coloca fuertemente como análisis del repuesto para el procedimiento estándar de la moldura del Glo-Germen.  

Célula para el uso en la clasificación de la célulaDesign_Cells | Shutterstock

¿Son los desaparecidos del Glo-Germen la marca como prueba efectiva de la contención?

La célula moderna clasificación cytometers del flujo se ajusta con un dispositivo importante de la seguridad biológica: sistemas de contención del aerosol. Los compaginadores utilizan un método de clasificación del corriente-en-aire logrado por la creación de las toberas del microdroplet de una boquilla. El bloqueo de la boquilla de clasificación tiende a aumentar la incidencia de la formación del aerosol, necesitando la contención de muestras aerosolized para atenuar el riesgo de exposición del operador a los agentes infecciosos.

La producción de muestras aerosolized de esta manera ocurre durante la manera del fall (FM), que describe la operación aberrante del compaginador de la célula debido a la obstrucción parcial de la boquilla y las desviaciones en la muestra fluyen. Según la última sociedad internacional para el adelanto de los patrones de la seguridad biológica del compaginador de la célula del Cytometry (ISAC), la contención del aerosol se debe validar por los análisis realizados en varios intervalos.

La dimensión más popular para la prueba de la contención es el procedimiento de la moldura del Glo-Germen; el análisis mide la baja de las molduras de la resina del copolímero de la melamina que son altamente fluorescentes. Cualquier moldura escape la cámara de la clase cerco en una diapositiva del microscopio para la enumeración vía microscopia fluorescente.

A pesar de su renombre, el método sufre varias desventajas. En primer lugar, el impactador se utiliza incorrectamente - se diseña típicamente para cerco los bio-aerosoles en las placas de agar para el análisis del incremento. Esto establece un diámetro del atajo, o d50, de 0,65. Cuando está utilizado para los propósitos de prueba de la contención, el montaje de la diapositiva de cristal altera la d50 que causa posteriormente una subestimación del aerosol escape. Finalmente, la limitación más grande planteada por el impactador de Aerotech es la necesidad de ser limpiado a conciencia para evitar las partículas de la adherencia al cilindro que podrían generar positivos falsos.

¿Hay una mejor manera de contener el aerosol de aerosol durante falla del compaginador?

Para dirigir estas desventajas, las personas desarrollaron un compaginador nuevo de la célula a los reacondicionamientos el procedimiento del Glo-Germen. El artículo, publicado en la parte A del Cytometry: El gorrón de la ciencia cuantitativa de la célula, contornos un procedimiento del repuesto que utilizaba un impactador del ‐ d de Cyclex y las molduras verdes (DG) del dragón conducto en un compaginador modelo de la célula de BD FACSAria II, usando una partícula Sizer del aerosol equipado de un laser ULTRAVIOLETA.

El impactador de Cyclex-d fue colocado cerca del compaginador de la célula para cerco muestras aerosolized durante FM. Las personas compararon este procedimiento al sizer aerodinámico de la partícula de los APS del ‐ ULTRAVIOLETA y a un tinte excitable del ‐ ULTRAVIOLETA. Este tipo de evaluación de la contención es un método en tiempo real que ofrece la ventaja de la determinación inmediata de las cuentas de partícula pero sufre la desventaja del costo.

Las ventajas del dragón de Cyclex-d rebordean procedimiento

Las personas determinaron que los 1μm de las microesferas de DG eran representante de la gama de tallas liberada. El uso del impactador de Cyclex-d y el uso de magazines disponibles y de microesferas fluorescentes aseguraron ruido de fondo inferior; además, la eficiencia de la colección del impactador se acerca al 100% como el ANUNCIO mediano (μm 1,6) > la d50 del ‐ d (1 μm) de Cyclex.

Al medir el aerosol cerco, el procedimiento reflejó una alta sensibilidad; el más bajo de la detección que lee 0,04 aerosols/cm3, una figura que se acerca a las mediciones del aerosol del fondo. La alta sensibilidad fue lograda a pesar del de baja fricción de gotitas microesfera-ocupadas - un acontecimiento atribuido al volumen de muestreo más alto de aire capturado por el ‐ d de Cyclex comparado con el ‐ ULTRAVIOLETA APS durante plazos idénticos. Posteriormente, la postura del grupo que la sensibilidad podría ser aumentada aumentando el tiempo de la colección.

El sistema de gestión del aerosol (AMS) era demostrable robusto, como el hasta 70% de aire pueden ser perdidos antes de que se comprometa la contención.  Esto que encuentra ofrece un método efectivo de contención de la supervisión durante la operación del compaginador de la célula y sirve como medios suplementarios de la prueba de la contención según lo recomendado por los patrones de la seguridad biológica del compaginador de la célula del SACO.

El método de Cyclex-d/DG es aplicable a los compaginadores de la célula con excepción del modelo de BD FACSAria II. Para hacer tan y otros, sugiera que los operadores consideren (1) distancia del ‐ d de Cyclex, a la cámara de clasificación (recomendada para ser tan corto como sea posible); (2) optimizando el método para crear FM que es representante de la obstrucción parcial verdadera de la boquilla; (3) determinando la mejor forma del mando positivo es decir cuando el AMS está apagado y el instrumento se fija a FM (4) significa prevenir positivos falsos o las lecturas de fondo para los compaginadores incluidos y no-cubiertos de la célula para asegurar exactitud y especificidad y (5) eficacia alta de la colección del aerosol, dentro del alcance del ANUNCIO del compaginador de la célula.

El trabajo de Perfetto y de colegas ha ofrecido un dispositivo perfeccionado de la seguridad biológica para los compaginadores de la célula que clasificación muestras inofensivas e infecciosas. A pesar del uso recomendado del procedimiento del germen del ‐ de Glo con el fin de la supervisión de la contención de la célula, su adopción por los laboratorios del compaginador de la célula es pobre.

Las desventajas - limpieza extensa y extensamente talla variable de la moldura - son los culpables. El procedimiento de Cyclex-d/de DG presenta una prueba rápida, robusta y eficiente de la contención para los aerosoles producidos durante la clasificación de la célula y el ` de las personas recomendado como análisis del repuesto para método de colección de Glo del ‐ del impactador previamente publicado del germen/de Aerotech'.


Acuses de recibo/financiamiento

Las visiónes y las conclusiones contenidas en este documento son las de los autores y no se deben interpretar como necesariamente representación de los planes de acción oficiales, expresados o implicados, del ADO o del S&t.

Este trabajo fue financiado bajo ‐ 00064 del ‐ C del ‐ 15 del contrato no HSHQDC concedido por el departamento de la ciencia de la seguridad de patria (ADO) y de la dirección de la tecnología (S&T) para la operación y la administración del análisis y de las contramedidas nacionales del Biodefense centran (NBACC), un centro federal financiado de la investigación y desarrollo.

Los proveedores de fondos no tenían ningún papel en diseño del estudio, colección y análisis de datos, decisión a publicar, o preparación del manuscrito. Este trabajo fue soportado por el programa de investigación intramuros del programa de investigación vaccíneo, NIH.

Journal reference:

Perfetto, S.F. et al. (2019) Novel Impactor and Microsphere‐Based Assay Used to Measure Containment of Aerosols Generated in a Flow Cytometer Cell Sorter. Cytometry Part A: Journal of Quantitative Cell Science. https://doi.org/10.1002/cyto.a.23680

Hidaya Aliouche

Written by

Hidaya Aliouche

Hidaya is a science communications enthusiast who has recently graduated and is embarking on a career in the science and medical copywriting. She has a B.Sc. in Biochemistry from The University of Manchester. She is passionate about writing and is particularly interested in microbiology, immunology, and biochemistry.

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