Contaggio di cellule senza diapositive per diminuire spreco e costo

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Un'intervista con Daniel Schieffer, Direttore di tecnologia, DeNovix

Perché le celle corrente sono contate con le diapositive? Quante volte sono le diapositive utilizzate tipicamente e che cosa accade loro dopo che sono usate?

Fino ad oggi, le celle sono state contate tipicamente su un emocitometro riutilizzabile del quarzo. Con l'arrivo dei contatori di cellule automatizzati 12-15 anni fa, le diapositive a perdere sono stato diffuse. Ciò era soprattutto un modo affinchè questi contatori di cellule carichi e contare le diapositive. Mentre sono convenienti per i sistemi automatizzati, introducono un costo in corso supplementare per i laboratori e la plastica monouso egualmente ha un'orma ambientale significativa.

Shutterstock | Watiporn Yenchum

Ogni diapositiva è destinata per essere utilizzata soltanto una volta. Ci potrebbero essere due conteggi per diapositiva, ma sono tutti monouso e sono ordinariamente post-utilizzazione eliminata. Abbiamo sentito le storie della gente che prova a riutilizzare le diapositive monouso; tuttavia, per accuratezza questo non è raccomandato dai produttori della diapositiva. Egualmente aggiunge significativamente al tempo richiesto pratico per contare le celle.

Come il CellDrop elimina le diapositive a perdere? Dove le celle sono tenute e come la pulizia completa è raggiunta fra le esecuzioni?

Per migliorare questo sistema DeNovix ha combinato il meglio del vecchio e nuovo, sostituente le diapositive di plastica con due permanenti, superfici ottiche dello zaffiro del grado. Le superfici sono parallelo posizionato ad una un altro da una vite di alta precisione per formare una camera analoga ad un emocitometro tradizionale. La tecnologia di base si adatta dalla nostra serie DS-11 di spettrofotometri del microvolume e gli utenti hanno una conoscenza di immediatamente con il caricamento, la misura e puliscono il flusso di lavoro pulito.

I ricercatori dispensano le celle nella camera, conteggio della stampa e l'analisi è eseguita automaticamente. In seguito, il campione è pulito semplicemente via con una strofinata asciutta del laboratorio e il CellDrop è pronto per il campione seguente. Una di grandi funzionalità del CellDrop è un grande, alto schermo della definizione con una previsione in tensione della camera di misura. Ciò permette che l'utente immediatamente confermi che le superfici siano pulite.

Come la prestazione confronta ai contatori di cellule basati a diapositiva?

Ai i contatori basati a diapositiva utilizzano le diapositive di plastica che introducono le contraddizioni fra i conteggi. Per esempio, se un ricercatore ha 10 diapositive di plastica, ci saranno 10 leggere differenze fra ciascuna delle diapositive. Il sistema di CellDrop usa una superficie solida dello zaffiro che è coerente ogni volta è usata e le altezze della camera sono calibrate automaticamente ogni volta che lo strumento è acceso.

È esecuzione molto riproducibile da funzionare. Inoltre, i conteggi delle cellule su CellDrop sono molto veloce confrontati ad altri contatori automatizzati, così là è un aggiornamento reale della prestazione nell'esperienza utente.

Le che applicazioni il CellDrop funziona con?

Le nostre applicazioni principali sono corrente nell'attuabilità delle cellule, cioè conteggi in tensione/morti per la coltura cellulare mammifera, del lievito e dell'insetto. C'è due modelli della fluorescenza e del brightfield disponibile-doppi di CellDrop, o brightfield soltanto.

Per le misure di attuabilità del brightfield, gli scienziati usano una tintura quale il blu di trypan per macchiare le celle. Il blu di trypan presenta le sue limitazioni, in modo da per i laboratori che richiedono la maggior specificità ed accuratezza come pure un maggior intervallo delle applicazioni, raccomandiamo l'uso della fluorescenza. Il CellDrop può usare i fluorophores comuni quali l'arancia dell'acridina e lo ioduro di Propidium (AO/PI), dove le macchie fluorescenti di AO vivono verde delle cellule e celle morte delle macchie di pi rosse.

Facendo uso di questo completamente cattura la congettura dal conteggio in tensione/completamente celle o dal conteggio delle pile in campioni che potenzialmente sono contaminati. Per esempio, evita contare i globuli rossi o altri bit e detriti che un conteggio Trypan tipico del manuale o di algoritmo potrebbe confondere per una cella, che piombo ad un conteggio inesatto.

Potete anche analizzare le celle tranfected GFP con CellDrop, fornendo il risparmio di temi di attuabilità e di transfezione delle percentuali. La piattaforma è destinata per essere aperta a una vasta gamma di applicazioni attraverso biologia cellulare ma anche ambientale, alimento e le industrie fare.

Può il CellDrop essere usato con i campioni pericolosi e contagiosi?

Ci sono due modi trattare i campioni pericolosi o contagiosi con il CellDrop. In primo luogo, lo abbiamo progettato per sederci in un gabinetto di sicurezza biologica. I ricercatori con il Livello 2 di sicurezza biologica o il laboratorio del Livello 3 di sicurezza biologica possono mettere il loro CellDrop direttamente nella cappa in cui stanno trattando con le celle pericolose.

La ricerca continua come normale, facendo uso di un protocollo tipico di pulizia sul CellDrop dopo che i campioni delle cellule sono stati contati. Per esempio, se il candeggiante di 10% è usato per sterilizzare la strumentazione e l'area usate, questo può essere polverizzato su un asciugamano di carta per pulire giù la post-utilizzazione di CellDrop.

Egualmente teniamo conto l'uso delle diapositive a perdere all'interno del CellDrop ai fini di contagioso o di materiale pericoloso. Se c'è un campione cui per qualsiasi ragione un laboratorio realmente non vuole per toccare direttamente il CellDrop, un intervallo delle diapositive dai produttori differenti può essere usato.

In questo caso, il ricercatore metterebbe la diapositiva sopra la superficie riutilizzabile e poi metterebbe a fuoco sulle celle sulla diapositiva, la conta e poi la getta nei rifiuti pericolosi senza il campione che tocca mai il CellDrop.

Che software e algorithms/AI vengono con il contatore di cellule di CellDrop? Come fanno questi scienziati di guida?

Il software di DeNovix è progettato dagli scienziati di vita per gli scienziati di vita. Lavoriamo duro per rendere il software non solo intuitivo per usare, ma anche molto potente. I ricercatori possono contare ed analizzare rapidamente immediatamente i risultati a bordo dello strumento. Le applicazioni di conteggio e tutti algoritmi inclusi sono preinstallati sui contatori di CellDrop, così là non è esigenza delle compresse supplementari, dei computer o al del software basato a nuvola.

All'interno di ogni applicazione di conteggio, abbiamo compreso un protocollo di standard che funziona bene per la maggior parte delle linee cellulari comuni. I clienti possono ottimizzare facilmente le impostazioni per i tipi differenti delle cellule e poi salvare quelli nei protocolli per i conteggi supplementari. I risultati sono a bordo salvato per recupero facile per gli scopi di verifica o di rianalisi.

Che limitazioni sono ci per il sistema di CellDrop?

Il sistema è stato costruito come contatore di cellule. Così come tutto lo strumento otticamente progettato, ci sono vincoli di risoluzione dovuto la fisica del sistema. Possiamo contare attendibilmente le celle giù 4 micron e non ci realmente sono limitazioni confrontate a cui potete fare con un conteggio manuale o un contatore di cellule automatizzato differente.

Lo abbiamo progettato per fornire il meglio di sia la velocità dei mondi- di automazione ma senza il costo supplementare che l'inconveniente delle diapositive a perdere. Se avete bisogno delle diapositive a perdere monouso per qualunque ragione il CellDrop può accomodare quello, ma egualmente dà a ricercatori la flessibilità usare un sistema riutilizzabile per la maggior parte della ricerca che funzionano.

Che cosa il futuro tiene per i contatori di cellule di DeNovix?

Continueremo a ampliare le applicazioni e la funzionalità del CellDrop con i nostri aggiornamenti di software libero. Lavoriamo molto attentamente con i nostri clienti e già abbiamo alcune grandi idee che pianificazione applicare.

Più largamente, DeNovix sta andando continuare a cercare i posti in cui possiamo innovare per salvare i clienti' tempo e moneta e per diminuire i punti di dolore in laboratorio. Gradiamo semplificare la strumentazione e fornire agli scienziati degli strumenti vorrebbe avere ma quello non è redditizio dato la tecnologia corrente o non deve comprare in un nuovo flusso di consumo.

Dove possono i lettori trovare più informazioni?

https://www.denovix.com/celldrop/

Circa Daniel Schieffer

Dan ha unito NanoDrop Technologies Inc. nel 2006 mentre completava le sue BS in biotecnologia all'università di Delaware. Dopo il contributo allo sviluppo del NanoDrop 8000 e di NanoDrop Dan 2000 accettato un assistenato di ricerca e di insegnamento all'università di Villanova.

A Villanova ha contribuito a mettere a punto un sistema cytometry basato del CERCHIO di flusso novello per delucidare il ruolo dell'organizzazione della membrana cellulare nell'attivazione di cellula T di CD4+.

Dan poi è entrato in un ruolo di assistenato della ricerca all'università della Pennsylvania in cui ha eseguito gli schermi genetici di alta capacità di lavorazione per scoprire le vie novelle del sistema immunitario che regolamentano la patogenesi in virus sopportati insetto prima dell'aggiunta del DeNovix nel 2013. Ha un ms in immunologia dall'università di Villanova.

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