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Production de accélération de Nanobody utilisant d'Anti-VHH anticorps polyclonaux

insights from industryDr. Dave FancyChief Operating OfficerJackson ImmunoResearch (JIR)

M. Dave Fancy discute les défis courants que les scientifiques font face à quand développant des nanobodies et à comment des anticorps secondaires d'anti-alpaga peuvent être employés pour produire des nanobodies de haut-affinité et des bibliothèques de VHH.

Dans quels inducteurs est-ce que des nanobodies sont adoptés ?

Nanobodies ont été découverts pendant les années 1990, mais seulement ont été captés fortement par la communauté de la recherche pendant les 10 dernières années. L'augmentation spectaculaire d'intérêt pour les nanobodies est observable en 2010, quand il y avait une remarque d'inflexion pour des « nanobodies » parmi des coups de moteur de recherche. Avant 2010, il y avait une moyenne de 200 à 300 citations neuves par an pour des nanobodies. À partir de 2019, ceci a grimpé jusqu'à plus de 2.000 citations neuves par an.

Image fluorescente de haute résolution de microscope des boîtiers des cellules tumorales en rouge entouré par les cellules normales et la peau normale en vert.Karl Dupont | Shutterstock

Tandis qu'il y a plusieurs raisons pour lesquelles les nanobodies montent dans la popularité, un grand facteur de contribution est que leur fabrication s'est récent dégagée du brevet. En raison de ceci, de beaucoup de compagnies de chercheurs, pharmaceutiques et diagnostiques ont commencé à les embrasser et les comportent à leur coffre à outils de pipeline ou de réactif de recherches.

Quel est les principales caractéristiques des nanobodies que leur effectuent si utile ?

Il y a plusieurs avantages clé qui ont mené à l'adoption des nanobodies :

Premièrement, les camelids, tels que l'alpaga ou le lama, produisent deux sous-classes des anticorps, IgG2 et 3. Ces sous-classes intéressantes sont composées de seulement deux réseaux lourds, chacun avec un domaine variable monomérique (VHH) duquel un nanobody est produit.

Deuxièmement, les nanobodies ont un long 3ème CDR. Ceci les rend bien adaptés pour l'épitope entrant « poches. » À la différence des anticorps conventionnels qui comportent de la lumière et des réseaux lourds, et tendez à être paroir ou recevoir les surfaces convexes, nanobodies peut atteindre dans les surfaces concaves grippant à endroits que les anticorps particuliers sont mauvais à. Le résultat de ceci est que les épitopes sur les agents pathogènes ou le médicament vise normalement inaccessible aux anticorps intégraux sont maintenant ouverts pour viser par un anticorps de domaine de VHH.

L'advanatge final des nanobodies est leur petite taille. Cette propriété pharmacocinétique très attrayante leur permet de réussir rapidement par les reins et d'autres barrages autrement inaccessibles. Combiné avec leur spécificité, ceci permet à des charges utiles, telles que des médicaments ou les molécules fluorescentes, d'être fixées pour la distribution visée in vivo, les rendant très attrayants aux sociétés pharmaceutiques.

Comment est-ce que des nanobodies sont produits ?

Traditionnellement, si vous voulez un anticorps de qualité cohérente et dans la grande alimentation, vous devez retirer les lymphocytes B d'un rongeur immunisé et préparer un anticorps monoclonal à partir de l'hybridome. Pour des nanobodies cependant, il y a quelques approches alternes qui sont attrayantes.

La première approche est d'isoler simplement des lymphocytes B d'un camelid non immunisé, ACP à l'extérieur le segment de gène de VHH et de produire une bibliothèque de naïve exprimant les milliards de domaines de VHH sur le bactériophage. Cette bibliothèque contient juste le mouvement propre VHH et n'a pas été polarisée à n'importe quoi, toutefois quelques stratégies élevées élaborées d'examen critique et de génie génétique de débit doivent être utilisées si un nanobody obligatoire serré est désiré.

La deuxième approche est d'isoler des lymphocytes B d'un lama ou d'un alpaga immunisé. Le défi avec ceci connaît l'heure optimale de moissonner les lymphocytes B. L'animal passe par le procédé naturel de la maturation d'affinité, qui a comme conséquence les anticorps qui ont été sélectés pour gripper aux épitopes avec une affinité et une spécificité plus élevées.

Il est impérieux de surveiller la réaction immunitaire d'IgG2 et de 3 sous-classes (où VHH est trouvé) avant que vous moissonniez les lymphocytes B. Car IgG1 est type la sous-classe prédominante, toute la réaction immunitaire mesurée peut tromper des chercheurs dans penser un titre optimal a été atteinte et ils pourraient manquer l'endroit doux pour le ramassage de cellules d'IgG2 et de sous-classe 3 exprimant des cellules.

Voie au développement recombiné dVoie au développement recombiné d'anticorps de VHH. (Image fournie par Jackson ImmunoResearch).

Comment les anticorps secondaires neufs développés par JIR peuvent-ils aider des scientifiques à recenser, développer et produire des nanobodies ?

Pour aider des scientifiques travaillant avec des nanobodies, Jackson ImmunoResearch a produit un portefeuille des produits pour la découverte de VHH :

Pour comprendre la réaction immunitaire, nous avons développé les anticorps secondaires qui identifient particulièrement les sous-classes IgG2 et IgG3, avec l'activité hétérospécifique minimale à IgG1. Ce réactif permet à des propriétaires de commencer par un animal immunisé, sang d'échantillon, observe les titres IgG2 et IgG3, et quand sérum ou lymphocytes B désirés de récolte.

Pour résoudre les problèmes qui se produisent type en utilisant les anticorps monoclonaux d'anti-balise, où le résultat peut être faible signe ou fond élevé, nous avons développé un anti-VHH anticorps secondaire polyclonal qui identifie des épitopes multiples. Beaucoup d'anti-VHH secondaries conjugués peuvent gripper un nanobody simultanément et produire d'un signe plus élevé.

Pour le multi-marquage compliqué expérimente utilisant plusieurs anticorps des espèces différentes, nous avons développé un anti-VHH anticorps secondaire qui a été hautement croix-adsorbé qui réagit d'une façon minimum à bovin, à humain, souris, lapin, et rat IgG et protéines sériques.

Surveillez le titre de sous-classe dReprésentez graphiquement montrer le titre d'IgG 2+3 au fil du temps. (Image fournie par Jackson ImmunoResearch).

Comment les anticorps secondaires de JIR pour la découverte de VHH peuvent-ils être employés pour examiner et valider des nanobodies ?

Nous comprenons que nos propriétaires utilisent beaucoup de différentes analyses d'examen critique, comme la cytométrie de flux et l'ELISA. Par conséquent, nous avons empaqueté nos anticorps secondaires spécifiques à la découverte de VHH en assez grande quantité à un prix raisonnable pour les rendre favorables pour l'examen critique élevé de débit. Elle vient également en un grand choix de conjugués qui comprennent, mais n'est pas limitée : Peroxydase de raifort sauvage, teintures d'Alexa Fluors®, de Cy™, R-Phycoérythrine (R-PE), et biotine.

Quels avantages les anticorps secondaires de JIR pour la découverte de VHH offrent-ils au-dessus des méthodes existantes ?

Type, quand les chercheurs commencent à exprimer des domaines de VHH, ils ont immédiatement mis une balise d'épitope sur eux pour faciliter la purification et la surveillance. Tandis que ces balises peuvent être utiles, elles peuvent nuire le grippement nanobody ou limiter le dépistage nanobody. De petites balises d'épitope sont généralement liées par un anticorps conjugué ainsi le signe tend à être mauvais. Selon la qualité de l'anticorps d'anti-balise, il peut également y avoir beaucoup de mouvement propre, qui peut confondre quelques expériences.

Les avantages des anticorps secondaires de Jackson ImmunoResearch pour la découverte de VHH sont simples. Ces réactifs sont polyclonaux et hautement spécifiques, tenant compte des interactions multiples avec le domaine de VHH. Puisque chaque anticorps secondaire contient les fluorophores ou les enzymes multiples, le signe : le rapport de bruit est bien mieux.

Quel est prochain pour la compagnie ?

Jackson ImmunoResearch continue à explorer des projets dans l'espace nanobody. Nous avons validé les anti-VHH anticorps dans un grand choix d'analyses et récent publié un whitepaper documentant leur rendement pour aider des gens à comprendre les avantages principaux qu'ils offrent. Nous travaillons également continuellement pour améliorer notre spécificité d'anticorps et pour innover des produits nouveaux.

Pendant que la technologie continue à avancer, les instruments deviennent plus sensibles, et les analyses deviennent plus compliquées, nous sont déterminées besoins à contacter nos propriétaires les' pendant qu'elles soulèvent la barre. Les chercheurs ont besoin d'outils grands pour effectuer des découvertes grandes et Jackson ImmunoResearch se voit en tant qu'associé à tous les scientifiques dans cet effort.

Au sujet de M. Dave Fancy

Image de Headshot de M. Dave FancyLa fantaisie de Dave est le COO de Jackson ImmunoResearch (JIR), une position qu'il s'est retenue pendant les 5 dernières années. Avant son rôle à JIR, Dave a travaillé en tant que scientifique supérieur à SDIX, où il s'est concentré sur le développement de polyclonal et des anticorps monoclonaux pour des immunoessais.

Dave a reçu un Ph.D. en chimie organique de l'Université du Texas chez Austin en 1997. Il est alors devenu un chargé de recherches post-doctoral dans la biologie structurelle au centre médical du sud-ouest d'Université du Texas, et après deux ans était un professeur adjoint.

Dans son rôle actuel, Dave aboutit le développement et la commercialisation des produits et services basés sur anticorps pour des chercheurs travaillant en sciences de la vie.

Citations

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    Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc.. (2019, October 14). Production de accélération de Nanobody utilisant d'Anti-VHH anticorps polyclonaux. News-Medical. Retrieved on January 26, 2021 from https://www.news-medical.net/news/20190912/Accelerating-Nanobody-Production-using-Polyclonal-Anti-VHH-Antibodies.aspx.

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