Aviso: Esta página é uma tradução automática da página original em inglês. Por favor note uma vez que as traduções são geradas por máquinas, não tradução tudo será perfeita. Este site e suas páginas da Web destinam-se a ler em inglês. Qualquer tradução deste site e suas páginas da Web pode ser imprecisas e imprecisos no todo ou em parte. Esta tradução é fornecida como uma conveniência.

Produção de aceleração de Nanobody usando Anti-VHH anticorpos Polyclonal

insights from industryDr. Dave FancyChief Operating OfficerJackson ImmunoResearch (JIR)

O Dr. Dave Fantasia discute os desafios comuns que os cientistas enfrentam quando desenvolvendo nanobodies e como os anticorpos secundários da anti-alpaca podem ser usados para produzir nanobodies da alto-afinidade e bibliotecas de VHH.

Em que campos os nanobodies estão sendo adotados?

Nanobodies foi descoberto nos anos 90, mas foi pegarado somente pesadamente pela comunidade de pesquisa nos últimos 10 anos. A elevação dramática do interesse nos nanobodies é perceptível em 2010, quando havia um ponto da inflexão para “nanobodies” entre batidas do Search Engine. Antes de 2010, havia uma média de 200 a 300 citações novas pelo ano para nanobodies. 2019, isto aumentou sobre a 2.000 citações novas pelo ano.

Imagem fluorescente de alta resolução do microscópio dos conjuntos de pilhas do tumor no vermelho cercado por pilhas normais e pela pele normal no verde.Carl Du Pont | Shutterstock

Quando houver diversas razões pelas quais os nanobodies estão aumentando na popularidade, um grande factor de contribuição é que sua fabricação veio recentemente fora da patente. Devido a isto, a muitas empresas dos pesquisadores, as farmacêuticas e as diagnósticas começaram abraçá-los e estão incorporando-os em sua caixa de ferramentas do encanamento ou do reagente da pesquisa.

Que são as características principais dos nanobodies que lhes fazem tão úteis?

Há diversas vantagens chaves que conduziram à adopção dos nanobodies:

Em primeiro lugar, os camelids, tais como a alpaca ou o lama, produzem duas subclasses dos anticorpos, IgG2 e 3. Estas subclasses interessantes são compreendidas de somente duas correntes pesadas, cada um com um domínio variável monomeric (VHH) de que um nanobody é gerado.

Em segundo lugar, os nanobodies têm um ó CDR longo. Isto fá-los bons - serido para o resumo entrando “bolsos.” Ao contrário dos anticorpos convencionais que compreendem da luz e de correntes pesadas, e tenda a ser alisador ou aceitar superfícies do corpo convexo, nanobodies pode alcançar nas superfícies côncavas que ligam 2 aquelas áreas que os anticorpos típicos são deficientes em. As consequências desta são que os resumos nos micróbios patogénicos ou na droga visam normalmente inacessível aos anticorpos completos do comprimento estão agora abertos para visar por um anticorpo do domínio de VHH.

O advanatge final dos nanobodies é seu tamanho pequeno. Esta propriedade farmacocinético muito atraente permite que passem rapidamente através dos rins e de outras barreiras de outra maneira inacessíveis. Combinado com sua especificidade, isto permite cargas úteis, tais como drogas ou moléculas fluorescentes, de ser anexado in vivo para a entrega visada, fazendo os muito atractivos às companhias farmacéuticas.

Como os nanobodies são produzidos?

Tradicional, se você quer um anticorpo da qualidade consistente e na grande fonte, você tem que remover as B-pilhas de um roedor imunizado e fazer um anticorpo monoclonal do hybridoma. Para nanobodies contudo, há um par aproximações alternativas que são atractivas.

A primeira aproximação é isolar simplesmente para fora B-pilhas de um camelid unimmunized, PCR o segmento do gene de VHH e criar uma biblioteca do naïve que expressa biliões de domínios de VHH no fago. Esta biblioteca contem apenas o fundo VHH e não foi inclinada a qualquer coisa, porém algumas estratégias da selecção alta elaborada da produção e da genética precisam de ser empregadas se um nanobody obrigatório apertado é desejado.

A segunda aproximação é isolar B-pilhas de um lama ou de uma alpaca imunizada. O desafio com este está conhecendo o momento óptimo de colher as B-pilhas. O animal atravessa o processo natural de maturação da afinidade, que conduz aos anticorpos que foram seleccionados para ligar aos resumos com afinidade e especificidade mais altas.

É imperativo monitorar a resposta imune de IgG2 e de 3 subclasses (onde VHH está encontrado) antes que você colha as B-pilhas. Porque IgG1 é tipicamente a subclasse predominante, a resposta imune total medida pode enganar em pesquisadores em pensar um titer óptimo foi alcançada e puderam faltar o ponto doce para a coleção da B-pilha de IgG2 e de subclasse 3 que expressam pilhas.

Caminho à revelação de recombinação do anticorpo de VHH.Caminho à revelação de recombinação do anticorpo de VHH. (Imagem fornecida por Jackson ImmunoResearch).

Como podem os anticorpos secundários novos desenvolvidos por JIR ajudar cientistas a identificar, desenvolver e produzir nanobodies?

Para ajudar os cientistas que trabalham com nanobodies, Jackson ImmunoResearch criou uma carteira dos produtos para a descoberta de VHH:

Para compreender a resposta imune, nós desenvolvemos os anticorpos secundários que reconhecem especificamente as subclasses IgG2 e IgG3, com reactividade cruzada mínima a IgG1. Este reagente permitir clientes de começar com um animal imunizado, sangue da amostra, observar os titers IgG2 e IgG3, e quando soro ou B-pilhas desejadas da colheita.

Para resolver as edições que ocorrem tipicamente ao usar os anticorpos monoclonais da anti-etiqueta, onde o resultado pode ser sinal fraco ou fundo alto, nós desenvolvemos um anti-VHH anticorpo secundário polyclonal que reconhecesse resumos múltiplos. Muitos anti-VHH secondaries conjugados podem ligar um nanobody simultaneamente e gerar um sinal mais alto.

Para multi-rotulagem complicada experimenta usando diversos anticorpos das espécies diferentes, nós desenvolvemos um anti-VHH anticorpo secundário que cruz-fosse fixado altamente que reage mìnima a bovino, a humano, rato, coelho, e rato IgGs e proteínas de soro.

Monitore o titer da subclasse de IgG 2+3 para cronometrar idealmente a colheita de PBMCRepresente graficamente mostrar o titer de IgG 2+3 ao longo do tempo. (Imagem fornecida por Jackson ImmunoResearch).

Como podem os anticorpos secundários de JIR para a descoberta de VHH ser usados para seleccionar e validar nanobodies?

Nós compreendemos que nossos clientes utilizam muitos ensaios diferentes da selecção, como o cytometry de fluxo e o ELISA. Conseqüentemente, nós empacotamos nossos anticorpos secundários específicos à descoberta de VHH em grandes bastante quantidades a preço razoável para fazê-las favoráveis para a selecção alta da produção. Igualmente vêm em uma variedade de conjugado que incluem, mas não são limitados: Peroxidase do armorácio, tinturas de Alexa Fluors®, de Cy™, R-Phycoerythrin (R-PE), e biotina.

Que vantagens os anticorpos secundários de JIR para a descoberta de VHH oferecem sobre métodos existentes?

Tipicamente, quando os pesquisadores começam expressar domínios de VHH, puseram imediatamente uma etiqueta do resumo sobre eles para ajudar na purificação e na monitoração. Quando estas etiquetas puderem ser úteis, podem interferir com o emperramento nanobody ou limitar a detecção nanobody. As etiquetas pequenas do resumo são limitadas geralmente por um anticorpo conjugado assim que o sinal tende a ser deficiente. Segundo a qualidade do anticorpo da anti-etiqueta, pode igualmente haver muito fundo, que pode confundir algumas experiências.

As vantagens de anticorpos secundários de Jackson ImmunoResearch para a descoberta de VHH são simples. Estes reagentes são polyclonal e altamente específicos, permitindo interacções múltiplas com o domínio de VHH. Desde que cada anticorpo secundário contem fluorophores ou enzimas múltiplas, o sinal: a relação do ruído é muito melhor.

Que é seguinte para a empresa?

Jackson ImmunoResearch continua a explorar projectos dentro do espaço nanobody. Nós validamos os anti-VHH anticorpos em uma variedade de ensaios e publicamos recentemente um whitepaper que documentamos seu desempenho para ajudar povos a compreender os benefícios que fundamentais oferecem. Nós igualmente estamos trabalhando constantemente para melhorar nossa especificidade do anticorpo e para inovar produtos novos.

Enquanto a tecnologia continua a avançar, os instrumentos tornam-se mais sensíveis, e os ensaios tornam-se mais complicados, nós estão determinados encontrar necessidades dos nossos clientes' enquanto aumentam a barra. Os pesquisadores precisam grandes ferramentas de fazer grandes descobertas e Jackson ImmunoResearch vê-se como um sócio a todos os cientistas neste esforço.

Sobre o Dr. Dave Fantasia

Imagem do Headshot do Dr. Dave FantasiaA fantasia de Dave é ARRULHAR de Jackson ImmunoResearch (JIR), uma posição que guardarou pelos 5 anos passados. Antes de seu papel em JIR, Dave trabalhou como um cientista superior em SDIX, onde se centrou sobre a revelação de anticorpos polyclonal e monoclonais para immunoassays.

Dave recebeu um Ph.D. na química orgânica da Universidade do Texas em Austin em 1997. Transformou-se então um research fellow pos-doctoral na biologia estrutural no centro médico do sudoeste da Universidade do Texas, e após dois anos tornou-se um professor adjunto.

Em seu papel actual, Dave conduz a revelação e a comercialização de produtos e serviço anticorpo-baseados para os pesquisadores que trabalham nas ciências da vida.

Citations

Please use one of the following formats to cite this article in your essay, paper or report:

  • APA

    Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc.. (2019, October 14). Produção de aceleração de Nanobody usando Anti-VHH anticorpos Polyclonal. News-Medical. Retrieved on January 17, 2021 from https://www.news-medical.net/news/20190912/Accelerating-Nanobody-Production-using-Polyclonal-Anti-VHH-Antibodies.aspx.

  • MLA

    Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc.. "Produção de aceleração de Nanobody usando Anti-VHH anticorpos Polyclonal". News-Medical. 17 January 2021. <https://www.news-medical.net/news/20190912/Accelerating-Nanobody-Production-using-Polyclonal-Anti-VHH-Antibodies.aspx>.

  • Chicago

    Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc.. "Produção de aceleração de Nanobody usando Anti-VHH anticorpos Polyclonal". News-Medical. https://www.news-medical.net/news/20190912/Accelerating-Nanobody-Production-using-Polyclonal-Anti-VHH-Antibodies.aspx. (accessed January 17, 2021).

  • Harvard

    Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc.. 2019. Produção de aceleração de Nanobody usando Anti-VHH anticorpos Polyclonal. News-Medical, viewed 17 January 2021, https://www.news-medical.net/news/20190912/Accelerating-Nanobody-Production-using-Polyclonal-Anti-VHH-Antibodies.aspx.