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Producción acelerante de Nanobody usando los anticuerpos Antis-VHH policlonales

insights from industryDr. Dave FancyChief Operating OfficerJackson ImmunoResearch (JIR)

El Dr. Dave Fancy discute los retos comunes que los científicos hacen frente a cuando desarrollan nanobodies y a cómo los anticuerpos secundarios de la anti-alpaca se pueden utilizar para producir nanobodies de la alto-afinidad y bibliotecas de VHH.

¿En qué campos se están adoptando los nanobodies?

Nanobodies fue descubierto en los años 90, pero ha sido tomado solamente pesado por la comunidad de investigación en los 10 años pasados. La subida dramática de interés en nanobodies es observable en 2010, cuando había un punto de la inflexión para los “nanobodies” entre golpes del Search Engine. Antes de 2010, había un promedio de 200 a 300 nuevas citaciones por el año para los nanobodies. 2019, esto ha aumentado sobre a 2.000 nuevas citaciones por año.

Imagen fluorescente de alta resolución del microscopio de atados de las células del tumor en el rojo rodeado por las células normales y la piel normal en verde.Carl Du Pont | Shutterstock

Mientras que hay varias razones por las que los nanobodies están subiendo en renombre, un factor que contribuye grande es que su manufactura ha salido recientemente de patente. Debido a esto, a muchas compañías de los investigadores, farmacéuticas y diagnósticas han comenzado a abrazarlas y las están incorporando en su caja de herramientas de la tubería o del reactivo de la investigación.

¿Cuáles son las características principales de los nanobodies que les hacen tan útiles?

Hay varias ventajas dominantes que han llevado a la adopción de nanobodies:

En primer lugar, los camelids, tales como alpaca o llama, producen dos subclases de los anticuerpos, IgG2 y 3. Estas subclases interesantes se comprenden de solamente dos cadenas pesadas, cada uno con un dominio variable monomérico (VHH) del cual se genere un nanobody.

En segundo lugar, los nanobodies tienen un 3ro CDR largo. Esto los hace bien adaptados para el epitopo que entra “cavidades.” A diferencia de los anticuerpos convencionales que comprenden de luz y de cadenas pesadas, y tienda a ser aplanador o validar las superficies convexas, nanobodies puede alcanzar en las superficies cóncavas que atan a esas áreas que los anticuerpos típicos son pobres en. El resultado de esto es que los epitopos en patógeno o la droga apuntan normalmente inaccesible a los anticuerpos integrales están abiertos ahora para apuntar por un anticuerpo del dominio de VHH.

El advanatge final de nanobodies es su tamaño pequeño. Esta propiedad farmacocinética muy atractiva permite que pasen rápidamente a través de los riñones y de otras barreras de otra manera inaccesibles. Combinado con su especificidad, esto permite a las cargas útiles, tales como drogas o moléculas fluorescentes, ser sujetada para el lanzamiento apuntado in vivo, haciéndolas muy atractivas a las compañías farmacéuticas.

¿Cómo se producen los nanobodies?

Tradicionalmente, si usted quiere un anticuerpo de la calidad constante y en abastecimiento grande, usted tiene que quitar las B-células de un roedor inmunizado y hacer un anticuerpo monoclonal del hibridoma. Para los nanobodies sin embargo, hay un par de aproximaciones alternas que son atractivas.

La primera aproximación es aislar simple las B-células de un camelid sin inmunizar, polimerización en cadena fuera el segmento del gen de VHH y crear una biblioteca del naïve que expresa los mil millones de dominios de VHH en fago. Esta biblioteca contiene apenas el fondo VHH y no se ha orientado cualquier cosa, no obstante algunas alta estrategias de la investigación elaborada de la producción y de la ingeniería genética necesitan ser empleadas si se desea un nanobody obligatorio apretado.

La segunda aproximación es aislar las B-células de una llama o de una alpaca inmunizada. El reto con esto está conociendo la época óptima de cosechar las B-células. El animal pasa con el proceso natural de la maduración de la afinidad, que da lugar a los anticuerpos que se han seleccionado para atar a los epitopos con una afinidad y una especificidad más altas.

Es imprescindible vigilar la inmunorespuesta de IgG2 y de 3 subclases (donde se encuentra VHH) antes de que usted coseche las B-células. Pues IgG1 es típicamente la subclase predominante, se ha alcanzado la inmunorespuesta total medida puede engañar a investigadores en el pensamiento de un título óptimo y puede ser que falten el sweet spot para la colección del linfocito B de IgG2 y de la subclase 3 que expresaban las células.

Camino al revelado recombinante del anticuerpo de VHH.Camino al revelado recombinante del anticuerpo de VHH. (Imagen ofrecida por Jackson ImmunoResearch).

¿Cómo pueden los nuevos anticuerpos secundarios desarrollados por JIR ayudar a científicos a determinar, a desarrollar y a producir nanobodies?

Para ayudar a los científicos que trabajaban con los nanobodies, Jackson ImmunoResearch ha creado una cartera de los productos para el descubrimiento de VHH:

Para entender la inmunorespuesta, desarrollamos los anticuerpos secundarios que reconocen específicamente las subclases IgG2 e IgG3, con reactividad cruzada mínima a IgG1. Este reactivo permite a clientes comenzar con un animal inmunizado, sangre de la muestra, observa los títulos IgG2 e IgG3, y cuando suero o las B-células deseado de la cosecha.

Para resolver las entregas que ocurren típicamente al usar los anticuerpos monoclonales de la anti-etiqueta, donde el resultado puede ser señal débil o alto fondo, desarrollamos un anticuerpo secundario anti-VHH policlonal que reconoce epitopos múltiples. Muchos secondaries conjugados antis-VHH pueden atar un nanobody simultáneamente y generar una señal más alta.

Para la multi-etiqueta complicada experimenta usando varios anticuerpos de diversas especies, desarrollamos un anticuerpo secundario anti-VHH que cruz-se ha adsorbido altamente que reacciona como mínimo a bovino, a humano, ratón, conejo, y rata IgGs y las proteínas de suero.

Vigile el título de la subclase de IgG 2+3 para cronometrar idealmente la cosecha de PBMCRepresente mostrar gráficamente el título de IgG 2+3 en un cierto plazo. (Imagen ofrecida por Jackson ImmunoResearch).

¿Cómo se pueden los anticuerpos secundarios de JIR para el descubrimiento de VHH utilizar para revisar y para validar nanobodies?

Entendemos que nuestros clientes utilizan muchos diversos análisis de la investigación, como cytometry de flujo y ELISA. Por lo tanto, empaquetamos nuestros anticuerpos secundarios específicos al descubrimiento de VHH en bastante grandes cantidades en un precio razonable para hacerlas favorables para la alta investigación de la producción. También vienen en una variedad de conjugaciones que incluyan, pero no se limitan: Peroxidasa del rábano picante, tintes de Alexa Fluors®, de Cy™, R-Ficoeritrina (R-PE), y biotina.

¿Qué ventajas los anticuerpos secundarios de JIR para el descubrimiento de VHH ofrecen sobre métodos existentes?

Típicamente, cuando los investigadores comienzan a expresar dominios de VHH, pusieron inmediatamente una etiqueta del epitopo en ellos para ayudar en la purificación y vigilar. Mientras que estas etiquetas pueden ser útiles, pueden interferir con el atascamiento nanobody o limitar la detección nanobody. Las pequeñas etiquetas del epitopo son limitadas generalmente por un anticuerpo conjugado así que la señal tiende a ser pobre. Dependiendo de la calidad del anticuerpo de la anti-etiqueta, puede también haber mucho fondo, que puede confundir algunos experimentos.

Las ventajas de los anticuerpos secundarios de Jackson ImmunoResearch para el descubrimiento de VHH son simples. Estos reactivos son policlonales y altamente específicos, teniendo en cuenta acciones recíprocas múltiples con el dominio de VHH. Puesto que cada anticuerpo secundario contiene fluorophores o las enzimas múltiples, la señal: la índice del ruido está mucho mejor.

¿Cuál es siguiente para la compañía?

Jackson ImmunoResearch continúa explorar proyectos dentro del espacio nanobody. Hemos validado los anticuerpos antis-VHH en una variedad de análisis y hemos publicado recientemente un whitepaper que documentaban su funcionamiento para ayudar a gente a entender las ventajas fundamentales que ofrecen. También estamos trabajando constante para perfeccionar nuestra especificidad del anticuerpo y para innovar los nuevos productos.

A medida que la tecnología continúa avance, los instrumentos llegan a ser más sensibles, y los análisis llegan a ser más complicados, nosotros se determinan encontrar necesidades a nuestros clientes las' mientras que aumentan la barra. Los investigadores necesitan las grandes herramientas hacer grandes descubrimientos y Jackson ImmunoResearch se ve como socio a todos los científicos en este esfuerzo.

Sobre el Dr. Dave Fancy

Imagen del Headshot del Dr. Dave FancyLa suposición de Dave es el ARRULLAR de Jackson ImmunoResearch (JIR), una posición que él ha llevado a cabo por los últimos 5 años. Antes de su papel en JIR, Dave trabajó como científico mayor en SDIX, donde él se centró en el revelado de los anticuerpos policlonales y monoclonales para los immunoensayos.

Dave recibió un Ph.D. en química orgánica de la Universidad de Texas en Austin en 1997. Él entonces hizo un profesor investigador postdoctoral en biología estructural en el centro médico al sudoeste de la Universidad de Texas, y después de dos años se convirtió un profesor adjunto.

En su papel actual, Dave lleva el revelado y la comercialización de productos anticuerpo-basados y de servicios para los investigadores que trabajan en las ciencias de la vida.

Citations

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    Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc.. (2019, October 14). Producción acelerante de Nanobody usando los anticuerpos Antis-VHH policlonales. News-Medical. Retrieved on January 17, 2021 from https://www.news-medical.net/news/20190912/Accelerating-Nanobody-Production-using-Polyclonal-Anti-VHH-Antibodies.aspx.

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