Il metodo unicellulare di valutazione del DNA può individuare le anomalie genetiche fetali

Le prove prenatali non invadenti (NIPTs) sono utilizzate per la selezione fetale di malattia genetica in donne incinte. Al contrario, le prove dilaganti come l'amniocentesi portano il rischio di causare il danno fetale. Un rapporto nel giornale dei sistemi diagnostici molecolari, pubblicato da Elsevier, descrive l'elaborazione di un metodo unicellulare di valutazione del DNA con l'alte sensibilità e specificità. Questa prova non invadente permette all'estrazione diretta di informazioni genetiche dalle celle fetali in tensione per la valutazione simultanea, quindi miglioranti la probabilità di rilevazione dell'anomalia fetale.

NIPTs stabilito presenta le limitazioni importanti compreso i risultati noninformative. Di conseguenza, i metodi novelli per la diagnosi definitiva non invadente delle anomalie genetiche fetali sono necessari. Facendo uso di una PCR digitale modificata a gocciolina basata a unica (Sc-ddPCR) NIPT, i ricercatori hanno intrapreso gli studi del proof of concept che hanno valutato con successo le informazioni genetiche delle celle fetali estremamente rare nel sangue periferico materno. Questo sistema modificato Sc-ddPCR permette direttamente di valutare le informazioni unicellulari del DNA dalle celle in tensione senza cella-fissazione, cella-macchiare ed interi punti di amplificazione del genoma.

Poiché NIPTs corrente analizza le piccole sequenze di DNA, può essere provocatorio accertare di se l'origine di ogni sequenza di DNA è la madre o il suo feto. Abbiamo osservato che i risultati di NIPT sono in alcuni casi divergenti con le informazioni genetiche fetali che sono state riferite. Questo studio servisce da proof of concept per la diagnosi prenatale non invadente facendo uso del fare circolare le celle fetali senza alcuna depurazione rigorosa delle cellule.„

Kenichiro Hata, MD, PhD, principale inquirente, presidente di biologia Materno-Fetale all'istituto di ricerca nazionale per la salute dei bambini e sviluppo, Tokyo, Giappone

Con questa tecnica modificata, fino a 3.000 celle per pozzo possono essere incapsulate in ogni gocciolina ed essere analizzate simultaneamente. Il sistema originale Sc-ddPCR valuta simultaneamente le informazioni genetiche unicellulari con l'alte sensibilità e specificità. Tuttavia, il sistema originale è soltanto utile per le sospensioni delle cellule con un chiaro sfondo (cioè, linee cellulari lavate o celle chiaramente ordinate con la cella fluorescenza-attivata che ordina). I ricercatori hanno modificato questo sistema Sc-ddPCR per migliorare l'ambiente di PCR in ogni gocciolina con il più alte sensibilità e specificità, che permette ora di valutare le informazioni genetiche unicellulari dai campioni nucleati crudamente depurativi delle cellule con le impurità.

Per confermare la sensibilità di questo sistema modificato Sc-ddPCR, i ricercatori hanno individuato il DNA genomico delle celle fetali maschii di circolazione in una sospensione crudamente ordinata delle cellule al livello unicellulare derivato dai campioni di sangue periferici dalle madri con i feti maschii.

I ricercatori hanno cercato la presenza del gene dideterminazione di regione Y (SRY), che è responsabile dell'inizio della determinazione del sesso maschile. L'analisi di 13 campioni di sangue ha indicato che soltanto fare circolare le celle fetali dalle tre donne incinte che portano i feti maschii ha verificato il positivo a gene di SRY, a differenza delle celle dalle 10 donne incinte che portano i feti femminili. Ciò indica che il sistema modificato Sc-ddPCR non solo ha alta sensibilità, ma anche alta specificità.

“In futuro, ottimizzando l'ordinamento e l'incapsulamento delle cellule come pure generanti un ambiente più efficace di PCR in ogni gocciolina, questo sistema modificato Sc-ddPCR può essere un metodo di analisi dell'innovazione che può applicarsi ai vari regni della ricerca e possibilmente alla prova diagnostica clinica,„ il Dott. commentato Hata.

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