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o método da avaliação do ADN da Único-pilha pode detectar anomalias genéticas fetal

Os testes pré-natais não invasores (NIPTs) são usados para a selecção fetal da doença genética nas mulheres gravidas. Ao contrário, os testes invasores como a amniocentese levam o risco de causar o dano fetal. Um relatório no jornal de diagnósticos moleculars, publicado por Elsevier, descreve a revelação de um método da avaliação do ADN da único-pilha com sensibilidade e especificidade altas. Este teste não invasor permite a extracção directa da informação genética das pilhas fetal vivas para a avaliação simultânea, melhorando desse modo a probabilidade de detectar uma anomalia fetal.

NIPTs estabelecido tem limitações importantes incluir resultados noninformative. Conseqüentemente, os métodos novos para o diagnóstico definitivo não invasor de anomalias genéticas fetal são necessários. Usando um PCR digital único-pilha-baseado alterado da gota (sc-ddPCR) NIPT, os pesquisadores conduziram uma prova do estudo do conceito que avaliasse com sucesso a informação genética de pilhas fetal extremamente raras no sangue periférico materno. Este sistema sc-ddPCR alterado torna possível avaliar directamente a informação do ADN da único-pilha das pilhas vivas sem pilha-fixação, pilha-mancha, e etapas inteiras da amplificação do genoma.

Porque NIPTs analisa actualmente fragmentos pequenos do ADN, pode ser desafiante verificar se a origem de cada fragmento do ADN é a matriz ou seu feto. Nós observamos que em alguns casos os resultados de NIPT são discordantes com a informação genética fetal que foi relatada. Este estudo serve como uma prova de conceito para o diagnóstico pré-natal não invasor usando pilhas fetal de circulação sem nenhuma purificação restrita da pilha.”

Kenichiro Hata, DM, PhD, investigador principal, presidente da biologia Materno-Fetal no instituto de investigação nacional para saúdes infanteis e revelação, Tóquio, Japão

Com esta técnica alterada, até 3.000 pilhas pelo poço podem ser encapsuladas em cada gota e simultaneamente ser analisadas. O sistema sc-ddPCR original avalia simultaneamente a informação genética da único-pilha com sensibilidade e especificidade altas. Contudo, o sistema original é somente útil para suspensões da pilha com um fundo claro (isto é, linha celular lavadas ou pilhas claramente classificadas com a pilha fluorescência-ativada que classifica). Os pesquisadores alteraram este sistema sc-ddPCR para melhorar o ambiente do PCR em cada gota com sensibilidade e especificidade mais altas, que torna possível avaliar agora a informação genética da único-pilha das amostras nucleated bruta refinadas da pilha com impurezas.

Para confirmar a sensibilidade deste sistema sc-ddPCR alterado, os investigador detectaram o ADN genomic de pilhas fetal masculinas de circulação em uma suspensão bruta classificada da pilha a nível da único-pilha derivado das amostras de sangue periféricas das matrizes com feto masculinos.

Os investigador procurararam pela presença do gene dedeterminação da região Y (SRY), que é responsável para a iniciação da determinação de sexo masculina. A análise de 13 amostras de sangue indicou que somente circular pilhas fetal das três mulheres gravidas que levam os feto masculinos testou o positivo para o gene de SRY, ao contrário das pilhas das 10 mulheres gravidas que levam feto fêmeas. Isto indica que o sistema sc-ddPCR alterado tem não somente a sensibilidade alta, mas igualmente especificidade alta.

“No futuro, aperfeiçoando a classificação e a capsulagem da pilha, assim como gerando um ambiente mais eficaz do PCR em cada gota, este sistema sc-ddPCR alterado pode ser um método de análise da descoberta que possa ser aplicado aos vários reinos da pesquisa e possivelmente ao teste diagnóstico clínico,” Dr. comentado Hata.

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