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El método unicelular de la evaluación de la DNA puede descubrir anormalidades genéticas fetales

Las pruebas prenatales no invasores (NIPTs) se utilizan para la investigación fetal de la enfermedad genética en mujeres embarazadas. En cambio, las pruebas invasores como amniocentesis llevan el riesgo de causar daño fetal. Un parte en el gorrón de diagnósticos moleculares, publicado por Elsevier, describe el revelado de un método unicelular de la evaluación de la DNA con altas sensibilidad y especificidad. Esta prueba no invasor habilita la extracción directa de la información genética de las células fetales vivas para la evaluación simultánea, de tal modo perfeccionando la probabilidad de descubrir una anomalía fetal.

NIPTs establecido tiene limitaciones importantes incluyendo resultados noninformative. Por lo tanto, los métodos nuevos para la diagnosis definitiva no invasor de anormalidades genéticas fetales son necesarios. Usando una polimerización en cadena digital único-célula-basada modificada de la gotita (sc-ddPCR) NIPT, los investigadores conducto una prueba del estudio del concepto que fijó con éxito la información genética de células fetales extremadamente raras en sangre periférica maternal. Este sistema modificado sc-ddPCR permite fijar directamente la información unicelular de la DNA de las células vivas sin la célula-fijación, la célula-coloración, y pasos enteros de la amplificación del genoma.

Porque NIPTs analiza actualmente pequeños fragmentos de la DNA, puede ser desafiador comprobar si el origen de cada fragmento de la DNA es el molde-madre o su feto. Hemos observado que los resultados de NIPT están en algunos casos discordes con la información genética fetal se ha denunciado que. Este estudio sirve como prueba del concepto para la diagnosis prenatal no invasor usando la circulación de las células fetales sin ninguna purificación estricta de la célula.”

Kenichiro Hata, Doctor en Medicina, doctorado, principal investigador, presidente de la biología Maternal-Fetal en el instituto de investigación nacional para las saludes infantiles y revelado, Tokio, Japón

Con esta técnica modificada, hasta 3.000 células por pozo pueden ser encapsuladas en cada gotita y ser analizadas simultáneamente. El sistema original sc-ddPCR fija simultáneamente la información genética unicelular con altas sensibilidad y especificidad. Sin embargo, el sistema original es solamente útil para las suspensiones de la célula con un fondo sin obstrucción (es decir, las variedades de células lavadas o las células sin obstrucción clasificación con la célula fluorescencia-activada clasificación). Los investigadores modificaron este sistema sc-ddPCR para perfeccionar el ambiente de la polimerización en cadena en cada gotita con una sensibilidad y una especificidad más altas, que permite ahora fijar la información genética unicelular de muestras nucleated crudamente purificadas de la célula con las impurezas.

Para confirmar la sensibilidad de este sistema modificado sc-ddPCR, los investigadores descubrieron la DNA genomic de células fetales masculinas de circulación en una suspensión crudamente clasificación de la célula en el nivel unicelular derivado de muestras de sangre periféricas de moldes-madre con los fetos masculinos.

Los investigadores exploraron para la presencia del gen de sexo-determinación de la región Y (SRY), que es responsable del lanzamiento de la determinación de sexo masculina. El análisis de 13 muestras de sangre indicó que solamente la circulación de las células fetales de las tres mujeres embarazadas que llevaban los fetos masculinos probó el positivo para el gen de SRY, a diferencia de las células de las 10 mujeres embarazadas que llevaban fetos femeninos. Esto indica que el sistema modificado sc-ddPCR no sólo tiene alta sensibilidad, pero también alta especificidad.

“En el futuro, optimizando la clasificación y la encapsulación de la célula, así como generando un ambiente más efectivo de la polimerización en cadena en cada gotita, este sistema modificado sc-ddPCR puede ser un método de análisis de la ruptura que se puede aplicar a los diversos reinos de la investigación y posiblemente a la prueba diagnóstica clínica,” el Dr. comentado Hata.

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