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Método novo para monitorar a doença residual após o tratamento em pacientes de alto risco do neuroblastoma

Um grupo de investigação conduzido pelo professor NISHIMURA Noriyuki (escola de ciências da saúde, de universidade de Kobe) desenvolveu um método novo para monitorar a doença residual após o tratamento em pacientes de alto risco do neuroblastoma. O método poderia ser utilizado para avaliar a resposta do tratamento e para facilitar o diagnóstico adiantado do tumor ter uma recaída/rebrota.

Este método da monitoração foi desenvolvido por um professor adjunto YAMAMOTO Nobuyuki consistir do grupo e pelo professor adjunto UEMURA Suguru do projecto (ambos a escola da medicina, da universidade de Kobe), e do hospital de crianças prefeitural de Hyogo Kobe; Director vice Dr. KOSAKA Yoshiyuki, Dr. HASEGAWA Daiichiro do chefe de departamento e Dr. ISHIDA Toshiaki do médico do chefe. A colaboração e o apoio da pesquisa foram fornecidos igualmente por SYSMEX.

Estes resultados foram publicados primeiramente no jornal de diagnósticos moleculars o 11 de dezembro de 2019.

Questões básicas

  • Desaparecimento/inactivação da doença residual após o tratamento (doença residual mínima: O MRD) é essencial para a eficácia de sustentação do tratamento e assegurar a sobrevivência a longo prazo de pacientes de alto risco do neuroblastoma. Contudo, foi difícil monitorar estas mudanças no MRD usando métodos precedentes.
  • Este grupo de investigação desenvolveu um método para monitorar o MRD detectando os níveis de 7 marcadores neuroblastoma-associados usando PCR digital da gota (reacção em cadeia da polimerase).
  • Este método da monitoração permitiu uma monitoração precisa do MRD e um diagnóstico adiantado do tumor tem uma recaída/rebrota em pacientes de alto risco do neuroblastoma.
  • Este método novo permitirá a estratificação de pacientes de alto risco do neuroblastoma e é esperado conduzir à revelação de métodos de tratamento novos e de prognósticos pacientes melhorados.

Fundo da pesquisa

Neuroblastoma é um tipo de cancro que afecta crianças. É caracterizado pelos tumores contínuos que se tornam das pilhas de nervo imaturas no sistema nervoso simpático, geralmente em e à volta das glândulas ad-renais. Sobre 50% dos pacientes com o tumor de alto risco da experiência do neuroblastoma ter uma recaída ou a rebrota e sua taxa de sobrevivência a longo prazo são tão baixas quanto 40%. Eliminar o MRD é vital sustentar a eficácia do tratamento e melhorar o prognóstico paciente, e os vários métodos da monitoração foram utilizados.

Os métodos da monitoração têm avaliado até aqui o MRD usando PCR do tempo real (qPCR). Esta monitoração envolveu medir os níveis de vários marcadores neuroblastoma-associados, níveis elevados de que indique a revelação de pilhas do neuroblastoma através das células estaminais cancerígenos e não-cancerígenos.

O estudo actual procurado a avalia mais exactamente estas mudanças patológicas. Fora dos marcadores neuroblastoma-associados que são expressados altamente em pilhas do neuroblastoma, o grupo de investigação seleccionou sete marcadores que são particularmente abundantes nas células estaminais de cancro que causam o tumor têm uma recaída/rebrotas. Para detectar os níveis destes sete marcadores, o grupo de investigação usou o PCR digital da gota (ddPCR), que fornece uma maneira mais sensível e mais reprodutível de medir estes marcadores em uma amostra do que o qPCR.

Metodologia da pesquisa

Esta equipa de investigação desenvolveu previamente um sistema qPCR-baseado que fosse usado para detectar níveis de onze marcadores associados com as células estaminais do cancro que causam o reoccurrence do neuroblastoma. Este método permitiu-os de monitorar o MRD em pacientes de alto risco do neuroblastoma. Contudo, era difícil seguir exactamente as mudanças que ocorrem usando o qPCR. Para o estudo actual, o grupo de investigação decidiu usar o ddPCR mais sensível e mais reprodutível para avaliar o MRD.

Antes de mais nada, 208 amostras da medula e 67 amostras de sangue periféricas foram tomadas dos pacientes de alto risco do neuroblastoma, e 103 amostras da medula e 107 amostras de sangue periféricas foram obtidas dos indivíduos saudáveis (controle). Sete marcadores foram seleccionados entre dos onze marcadores que são expressados altamente nas células estaminais do cancro que causam a rebrota do neuroblastoma/têm uma recaída. Usando o ddPCR, calcularam os níveis destes sete marcadores na medula e nas amostras de sangue periféricas.

O grupo de investigação descobriu que poderia mais exactamente diagnosticar pacientes de alto risco do neuroblastoma ao calcular os níveis agregados da expressão de todos os 7 marcadores usando o ddPCR, ao contrário de olhar o nível da expressão de cada marcador individualmente. As mudanças nos níveis da expressão destes sete marcadores reflectiram a quantidade de tumores, a fase da doença (remissão, estábulo, ou progressão) e o período de coleção da amostra (o diagnóstico, tratamento, cargo-tratamento, ou tem uma recaída).

Os níveis da expressão dos 7 marcadores foram calculados para 73 amostras da medula obtidas dos pacientes de alto risco do neuroblastoma do cargo-tratamento. Os níveis da expressão dos marcadores nas amostras da medula dos 17 pacientes que tinham sofrido o tumor têm uma recaída/rebrotas eram significativamente mais altos comparados aos níveis nos 56 pacientes que não tiveram. Comparando os dois métodos do PCR usando as mesmas 73 amostras, previu-se que os níveis da expressão dos sete marcadores calculados pelo ddPCR poderiam a prevêem mais exactamente que o tumor tem uma recaída/rebrota do que o qPCR.

Baseado nestes resultados, espera-se que o método da monitoração do ddPCR desenvolvido por este estudo melhorará a monitoração do MRD em pacientes de alto risco do neuroblastoma, permitindo a possibilidade de tumor ter uma recaída ou rebrota a ser prevista mais exactamente.

Revelações mais adicionais

Os resultados desta pesquisa sugerem que seja possível monitore exactamente o MRD em pacientes de alto risco do neuroblastoma do cargo-tratamento. Em seguida, esta metodologia precisa de ser avaliada com os estudos clínicos em perspectiva em um número maior de pacientes através dos hospitais múltiplos. Espera-se que este método da monitoração pode ser usado como base para os prognósticos e os tratamentos novos se tornando dos pacientes de predição para pacientes de alto risco do neuroblastoma.

Source:
Journal reference:

Thwin, K.K.M., et al. (2020) Level of Seven Neuroblastoma-Associated mRNAs Detected by Droplet Digital PCR Is Associated with Tumor Relapse/Regrowth of High-Risk Neuroblastoma Patients. Journal of Molecular Diagnostics. doi.org/10.1016/j.jmoldx.2019.10.012.