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Immunohistochemistry multicolore (IHC): Andare oltre un singolo colore

insights from industryDr. Will HowatHead of Imaging & Immunohistochemistry Abcam

Un'intervista con Dott. Howat da Abcam a SfN 2018, discutendo le possibilità e le sfide del immunohistochemistry (IHC) oltre un singolo colore!

Dalla vostra esperienza, quanto prevalente è oggi l'uso di IHC? Che cosa consegna in termini di comprensioni biologiche?

IHC ora è altrettanto prevalente come è stato per molti anni, se non più così. Ha utilizzato in ogni campo e particolarmente in neuroscienza - se è sotto forma di materiale fisso, sezioni di fluttuazione del cervello, o nelle sezioni spesse di FibroDerm di 50 micron - ci sono tante applicazioni differenti.

Il campione di tessuto macchiato facendo uso del multiplo fluorescente ha contrassegnato gli anticorpi - immagine generata da Carl Du Pont

Carl Du Pont | Shutterstock

Per esempio, nel campo di biologia del cancro, possiamo utilizzare IHC per identificare i tipi delle cellule che stanno interagendo a vicenda. Ancora, nel campo della neuroscienza, possiamo utilizzare IHC per differenziare i neuroni nocivi che stanno esprimendo gli indicatori particolari della superficie delle cellule dai neuroni sani nelle regioni specifiche del cervello.

Essenzialmente, IHC fornisce i dati spaziali che non potete raggiungere dalle analisi quali l'analisi del DNA o l'analisi della proteina. È critico per potere da guardare attraverso un intero campione di tessuto e da identificare la presenza di indicatori della superficie delle cellule.

Che cosa vedete come le barriere all'più ampia approvazione di IHC multicolore?

La barriera principale a IHC multicolore sta conoscendo quale tecnica per usare ed allineare questa tecnica con la giusta tecnologia.

L'avanzamento del IHC facendo uso di quattro colori è abbastanza diretto. Tuttavia, andare oltre questo richiede la strumentazione dello specialista e una comprensione approfondita di come effettuerete la macchiatura. Per esempio, dovete allineare la vostra tecnica con gli anticorpi di alta qualità e risolvere un metodo di macchiatura.

Ci sono tanti modi diversi di fare questo, come la de-macchiatura e macchiatura dei metodi. Ma, mezzi della rappresentazione di ripetizione dovete cucire insieme l'immagine definitiva, che richiede la tecnica di lavorare senza cuciture per evitare i artefatti.

Ecco perché siamo abbastanza emozionanti da alcune delle nuove tecnologie che permettono che IHC multicolore sia effettuato facendo uso di singola macchia, seguito dalla rappresentazione. Il problema è voi strumentazione dello specialista di bisogno. Ottenere l'accesso alla strumentazione può essere una barriera importante ad più ampia approvazione.

A Abcam, forniamo i protocolli e le guide che permetteranno che l'utente costruisca sui metodi stanno già bene con. Formuliamo il consiglio su che cosa funziona bene e su che cosa non fa e suggerire altre opzioni per esplorare, che includendo se potrebbero coniugare i loro propri anticorpi, per esempio. È circa dare alla gente i suggerimenti e le guide supplementari per aiutarli lungo la strada.

Sezione del tessuto che ha subito IHC multicolore per generare un

Carl Du Pont | Shutterstock

Nel campo della neuroscienza specialmente, come vedete IHC migliorare la comprensione delle malattie e delle circostanze complesse?

IHC è una tecnica affermata nel campo della neuroscienza. Può applicarsi agli interi campioni del cervello, sezioni di fluttuazione, tessuti paraffina-incassati, anche campioni cryopreserved. Ha utilizzato in tutte le aree.

È particolarmente utile per i ricercatori che provano a capire la connettività dei neuroni nella malattia; dove quello va male e come potrebbero quegli anticorpi dimostrare la variabilità fra il normale e gli stati di malattia quale Alzheimer, per esempio? Senza avere che le informazioni spaziali, sono molto difficili da capire la patofisiologia di tali malattie.

Se poteste offrire i lettori interessati a usando il pezzo di IHC uno di consiglio chiave, che cosa sarebbe?

Infine, IHC multicolore ha bisogno della convalida. Ciò è qualcosa a cui Abcam attivamente stia lavorando. Dobbiamo essere sicuri che gli anticorpi che forniamo stanno legando al giusto obiettivo e non hanno alcune interazioni dell'fuori obiettivo che abbiano creato il rumore di fondo. Per fare questo, mettiamo altrettanti comandi nel trattamento poichè possibile in moda da poterci essere noi sicuri che gli anticorpi sono nella giusta cella, nel compartimento giusto e limitato alla proteina giusta.

Dove possono i lettori trovare più informazioni?

Circa Dott. Howat

Immagine del ritratto della volontà HowatAbcam unito Howat nell'agosto 2018 e stato responsabile del piombo la rappresentazione e del gruppo del Immunohistochemistry.

Prima dell'aggiunta del Abcam, lavorato a AstraZeneca come il leader della squadra del gruppo molecolare di patologia, in cui il suo gruppo ha sviluppato le analisi di biomarcatore per preclinico, test clinici di fase 1 e di fase 2. Egualmente ha lavorato all'istituto benvenuto di Sanger della fiducia all'interno dell'atlante dell'espressione della proteina, dove era responsabile della R & S per il gruppo del Immunohistochemistry.

Installerà ed eseguito la funzione di memoria di Histopathology/ISH all'istituto BRITANNICO di Cambridge di ricerca sul cancro per 9 anni.

Ha un B.Sc. (Hons) in immunologia & farmacologia dall'università di Strathclyde e un Ph.D. in patologia dall'università di Southampton.

Ha prime pubblicazioni dell'autore nella lancetta, nel giornale americano di patologia e nel giornale di patologia come pure nelle pubblicazioni del co-author nella natura, nella scienza, nella genetica della natura e nel giornale di medicina sperimentale.

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