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Immunohistochemistry multicolorido (IHC): Ir além de uma única cor

insights from industryDr. Will HowatHead of Imaging & Immunohistochemistry Abcam

Uma entrevista com Dr. Howat de Abcam em SfN 2018, discutindo as possibilidades e os desafios do immunohistochemistry (IHC) além de uma única cor!

De sua experiência, como predominante é o uso de IHC hoje? Que entrega em termos das introspecções biológicas?

IHC é apenas tão predominante agora como foi por muitos anos, se não mais assim. Usou-se em cada campo, e especialmente na neurociência - se é sob a forma de um material fixo, secções deflutuação do cérebro, ou em secções grossas de um FibroDerm de 50 mícrons - há tão muitas aplicações diferentes.

A amostra de tecido manchada usando o múltiplo etiquetou fluorescente anticorpos - imagem gerada por Carl Du Pont

Carl Du Pont | Shutterstock

Por exemplo, no campo da biologia do cancro, nós podemos usar IHC para identificar os tipos da pilha que estão interagindo um com o otro. Além disso, no campo da neurociência, nós podemos usar IHC para diferenciar os neurônios danificados que estão expressando marcadores particulares da superfície da pilha dos neurônios saudáveis em regiões específicas do cérebro.

Essencialmente, IHC fornece dados espaciais que você não pode conseguir dos ensaios tais como a análise do ADN ou a análise da proteína. É crítico para poder olhar através de uma amostra de tecido inteira e identificar a presença de marcadores da superfície da pilha.

Que você vê como as barreiras à adopção mais larga de IHC multicolorido?

A barreira principal a IHC multicolorido está sabendo que técnica a se usar e alinhar esta técnica com a tecnologia direita.

Realizar IHC que usa quatro cores é consideravelmente directa. Contudo, ir além deste exige o equipamento do especialista e uma compreensão detalhada de como você realizará a mancha. Por exemplo, você precisa de alinhar sua técnica com os anticorpos de alta qualidade e de dar certo um método de mancha.

Há tão muitas maneiras diferentes de fazer isto, tal como a de-mancha e a mancha de métodos. Mas, o you've dos meios da imagem lactente da repetição conseguiu costurar junto a imagem final, que exige a técnica trabalhar sem emenda para evitar produtos manufacturados.

Eis porque nós somos bastante entusiasmado por algumas das novas tecnologias que permitem que IHC multicolorido seja realizado usando uma única mancha, seguido pela imagem lactente. O problema é você equipamento do especialista da necessidade. Obter o acesso ao equipamento pode ser uma barreira principal a uma adopção mais larga.

Em Abcam, nós fornecemos os protocolos e os guias que permitirão que o usuário construa nos métodos que são já confortáveis com. Nós fornecemos o conselho no que trabalham bem e no que não faz e para sugerir outras opções para explorar, incluindo se poderiam conjugar seus próprios anticorpos, por exemplo. É sobre a doação povos de sugestões e de guias adicionais para ajudá-los ao longo do caminho.

Secção do tecido que se submeteu a IHC multicolorido para gerar uma imagem do rosa, a azul e a roxa - por Carl Du Pont

Carl Du Pont | Shutterstock

No campo da neurociência particularmente, como você vê IHC aumentar a compreensão de doenças e de circunstâncias complexas?

IHC é uma técnica bem conhecida no campo da neurociência. Pode ser aplicado às amostras inteiras do cérebro, secções deflutuação, tecidos parafina-encaixados, mesmo amostras cryopreserved. Usou-se em todas as áreas.

É particularmente útil para os pesquisadores que tentam compreender a conectividade dos neurônios na doença; aonde isso vai mal, e como poderiam aqueles anticorpos demonstrar a variabilidade entre o normal e os estados da doença tais como Alzheimer, por exemplo? Sem ter que a informação espacial, ele é muito difícil compreender a patofisiologia de tais doenças.

Se você poderia oferecer os leitores interessados em usar a parte de IHC um de conselho chave, que seria?

Finalmente, IHC multicolorido precisa a validação. Este é algo em que Abcam está trabalhando activamente. Nós precisamos para ter certeza que os anticorpos que nós fornecemos estão ligando ao alvo direito, e não têm nenhumas interacções do fora-alvo que criem o ruído de fundo. Para fazer este, nós pomos tantos como controles no processo porque possível de modo que nós possamos ser certos que os anticorpos estão na pilha direita, no compartimento direito e limitado à proteína direita.

Onde podem os leitores encontrar mais informação?

Sobre o Dr. Howat

Imagem do retrato da vontade HowatAbcam juntado Howat em agosto de 2018 e é responsável para conduzir a imagem lactente e a equipe do Immunohistochemistry.

Antes de juntar-se Abcam, trabalhado em AstraZeneca como o líder da equipa do grupo molecular da patologia, onde sua equipe desenvolveu ensaios do biomarker para pré-clínico, ensaios clínicos da fase 1 e da fase 2. Igualmente trabalhou no instituto bem-vindo de Sanger da confiança dentro do atlas da expressão da proteína, onde era responsável para o R&D para o grupo do Immunohistochemistry.

Estabelecerá e executou a facilidade do núcleo de Histopathology/ISH no instituto BRITÂNICO de Cambridge da investigação do cancro por 9 anos.

Tem um B.Sc. (Hons) na imunologia & na farmacologia da universidade de Strathclyde e um Ph.D. na patologia da universidade de Southampton.

Tem primeiras publicações do autor na lanceta, no jornal americano da patologia e no jornal da patologia assim como nas publicações do co-autor na natureza, na ciência, nas genéticas da natureza, e no jornal da medicina experimental.

Citations

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