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Um candidato vacinal vectored contra SARS-CoV-2

A pandemia actual de COVID-19 é causada pela síndrome-coronavirus respiratória aguda severa 2 (SARS-CoV-2), um betacoronavirus similar àquele que causou os SARS-CoV e o MERS-CoV mais cedo. Os cientistas estão levando a cabo drogas e vacinas terapêuticas para opr a propagação implacável do vírus, mas até agora, nenhum foi estabelecido ser eficaz. Contudo, diversos estão nos ensaios clínicos em várias partes do mundo.

Um estudo novo publicado no bioRxiv* em linha do server da pré-impressão descreve em maio de 2020 um candidato vacinal novo.

O SARS-CoV-2 é um vírus do RNA com um genoma que se refira a 4 proteínas estruturais: a proteína do envelope (e), a proteína do ponto (s), a membrana (M) proteína, e o nucleocapsid (N) proteína. Há igualmente 16 proteínas não-estruturais e diversas proteínas acessórias. A proteína de S é o antígeno protector principal contra que o anfitrião produz anticorpos de neutralização, e foi o alvo preliminar da maioria de reveladores vacinais.

Tentativas prévias da vacina

Por exemplo, uma vacina viral neutralizada foi encontrada para produzir anticorpos de neutralização contra as tensões múltiplas do vírus, protegendo macaques contra esta infecção. Uma vacina adeno-vectored chimpanzé (de Chade) que contem o gene completo de S do vírus produziu reacções celulares e humoral nos macaques. Ainda, não poderia completamente abrandar as características clínicas, embora produziu uma diminuição significativa na severidade da pneumonia.

Uma falha similar foi considerada com a vacina de ChADOx1 nCoV-19, que permitiu que o vírus actual replicate no nariz, com suas implicações sinistras dos povos vacinados ainda que espalham o vírus com os espirros.

Vantagens inerentes de AOaV-1

Contudo, o orthoavulavirus aviário 1 (AOaV-1) apresenta diversas vantagens como um vector vacinal. Para um, é um vírus citoplasmática, que signifique que o genoma viral não estará incorporado no genoma do anfitrião - uns meios enorme mais seguros da vacinação. Em segundo lugar, a falta da recombinação natural permite a expressão genetically estável dos transgenes. Tem uma escala restrita do anfitrião, e induz uma expressão forte da interferona em pilhas mamíferas, assim impedindo sua réplica.

Em terceiro lugar, o AOaV-1 pode contaminar a espécie animal múltipla, assim que significa que pode ser crescido em linha celular múltiplas. Com todas estas características, as tensões inofensivas de AOaV-1 foram usadas como vacinas atenuadas vivas contra muitas infecções virais como a gripe, a doença de Nipah, o Ebola, e a gripe aviária.

O anfitrião natural de AOaV-1 é aviário, e o vector tem antígenos diferentes dos micróbios patogénicos que contaminam geralmente seres humanos, que significa que há uma imunidade humana não pre-existente. Isto faz apropriado para o transfection humano.

O ORF completo para o gene de S de SARS-CoV-2 era over596 pendurado com sinais transcricionais exigidos (GE, GS, IG) e introduzido entre genes de P 597 e de M. O tamanho áspero do gene é mencionado abaixo cada gene, a divisão do genoma 598 através do comprimento e o número de nucleotides na região intergênica é indicado 599 na parte superior do esquema do genoma AOaV-1.
O ORF completo para o gene de S de SARS-CoV-2 era over596 pendurado com sinais transcricionais exigidos (GE, GS, IG) e introduzido entre genes de P 597 e de M. O tamanho áspero do gene é mencionado abaixo cada gene, a divisão do genoma 598 através do comprimento e o número de nucleotides na região intergênica é indicado 599 na parte superior do esquema do genoma AOaV-1.

Tensão AOaV-1 de recombinação

Para o estudo actual, os pesquisadores projectaram um vector AOaV-1 de uma tensão avirulent do vírus, contendo a seqüência antigenomic completa do AOaV-1 derivado dos pássaros selvagens com infecção assintomática. Dentro deste vector viral, o gene inteiro da proteína do ponto foi expressado em uma junção aperfeiçoada do gene. Os estudos foram realizados in vitro para caracterizar inteiramente esta vacina, sua sensibilidade aos anticorpos, sua réplica e estabilidade dentro dos ovos embryonated da galinha.

O passo seguinte era testar a vacina para a segurança e a imunogenicidade usando um modelo animal. A construção foi denominada rAOaV-1-SARS-CoV-2, e a tensão do wildtype sem a inserção do gene de S foi chamada AoaV-1-wt. Ambos foram propagados em ovos embryonated da galinha em 8 dias da idade. Estes ovos foram seleccionados então para identificar os vírus com sucesso propagados.

(b) As pilhas de Vero foram contaminadas com os 600 AOaV-1-wt ou rAOaV-1-SARS-CoV-2 e sainted para a expressão do HN 601 (vermelhos) ou proteínas (verdes) de S. A co-expressão de ambos surge proteínas é colorida amarelo em 602 imagens combinadas. (c) O perfil quantitativo da co-expressão é identificado por meio da seta e os 603 mostrados na linha carta.
As pilhas de Vero foram contaminadas com os 600 AOaV-1-wt ou rAOaV-1-SARS-CoV-2 e sainted para a expressão do HN 601 (vermelhos) ou proteínas (verdes) de S. A co-expressão de ambos surge proteínas é colorida amarelo em 602 imagens combinadas e o perfil quantitativo da co-expressão é identificado por meio da seta e os 603 mostrados na linha carta.

Os resultados da propagação vacinal de recombinação

A proteína de S e a proteína do HN foram identificadas nas pilhas contaminada com a tensão rAOaV-1-SARS-CoV-2, que mostrou que a vacina de recombinação poderia expressar a proteína transgénica de S e suas próprias proteínas do crescimento.

A réplica de AOaV-1 pode ocorrer somente depois a segmentação de sua proteína de F por proteases celulares. Para encontrar se o trypsin exógeno ou os proteases similares eram necessário para a infectividade deste vírus, os pesquisadores usaram a tensão de recombinação e a tensão do wildtype para contaminar culturas celulares na ausência do trypsin.

O vírus de recombinação replicated e propagação às pilhas uninfected vizinhas dentro de 12 horas, com as até 90% das pilhas sendo contaminado no prazo de 2 dias da infecção. A maioria das pilhas expressaram o HN e a proteína de S. A propagação lenta da infecção foi confirmada pela dinâmica cumulativa da fluorescência, que identificou o HN ou a proteína de S e indicou assim a presença de ambos na superfície das pilhas contaminadas.

Assim, a vacina de recombinação, assim como o vírus do wildtype replicated activamente e propagação a uma extensão comparável sem trypsin exógeno, expressando genes nativos e estrangeiros nas pilhas de anfitrião.

A incorporação da proteína de S no vírus de recombinação conduziu a sua neutralização pelo anti-soro anti-SARS-CoV-2 e mais fortemente anti-AOaV-1 pelo anti-soro, aproximadamente 40% e 90% respectivamente.

Finalmente, o estudo mostrou que a proteína de S estêve expressada estàvel na vacina de recombinação mesmo depois que as passagens múltiplas na galinha embryonated ovos, mas as características do crescimento foram mantidas in vitro em grande parte.

Conformidade do vector viral para a revelação vacinal

Total, conseqüentemente, o candidato vacinal é atenuado altamente no primata que a espécie am é pretested. Pode expressar a proteína antigénica de S, pode propagar estàvel e replicate no curso de diversas passagens sucessivas em ovos embryonated da galinha, e ainda mantem características normais do crescimento in vitro. Isto dá-lhe “o potencial para a revelação vacinal acelerada contra CoVID-19 para estudos clínicos.”.

Observação *Important

o bioRxiv publica os relatórios científicos preliminares que par-não são revistos e, não devem conseqüentemente ser considerados como conclusivos, guia a prática clínica/comportamento saúde-relacionado, ou tratado como a informação estabelecida.

Journal reference:
Dr. Liji Thomas

Written by

Dr. Liji Thomas

Dr. Liji Thomas is an OB-GYN, who graduated from the Government Medical College, University of Calicut, Kerala, in 2001. Liji practiced as a full-time consultant in obstetrics/gynecology in a private hospital for a few years following her graduation. She has counseled hundreds of patients facing issues from pregnancy-related problems and infertility, and has been in charge of over 2,000 deliveries, striving always to achieve a normal delivery rather than operative.

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