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El nuevo análisis prueba rápidamente la neutralización SARS-CoV-2 y revisa los antivirals

Los investigadores en el brazo médico de la Universidad de Texas, Galveston, han desarrollado una nueva plataforma que puede probar rápidamente actividad de neutralización del anticuerpo contra el coronavirus 2 (SARS-CoV-2) de la neumonía asiática y realizar la investigación de la alto-producción de agentes antivirus potenciales.

SARS-CoV-2, diagrama 2019 del virus del nCoV. Haber de imagen: Orfeo FX/Shutterstock
SARS-CoV-2, diagrama 2019 del virus del nCoV. Haber de imagen: Orfeo FX/Shutterstock

El nuevo análisis, llamado el nanoluciferase SARS-CoV-2 (SARS-CoV-2-Nluc), genera resultados de neutralización del anticuerpo más rápidamente que la técnica oro-estándar actual, acortando el tiempo de vuelta a partir de tres días a cinco horas.

También realizó la investigación antivirus segura, de la alto-producción y determinó el rupintrivir humano de la droga del rinovirus, como inhibidor potencialmente efectivo de SARS-CoV-2.

Los autores dicen que el rupintrivir se puede ahora considerar para que la prueba adicional determine su potencial como tratamiento para la enfermedad 2019 (COVID-19) del coronavirus.

Una versión de la prueba preliminar del papel está disponible en el servidor del bioRxiv*, mientras que el artículo experimenta la revisión paritaria.

Técnicas de prueba actuales

Desde que el pandémico COVID-19 comenzó en Wuhan, China, tarde el año pasado, RT-PCR basado nucléico (reacción en cadena reversa de la transcriptase-polimerasa) la prueba se ha utilizado para diagnosticar a gente con la infección viral aguda y para trazar y para controlar la transmisión del contacto.

Sin embargo, dado el número de individuos infectados que sean asintomáticos, el serodiagnóstico rápido, y seguro se necesita urgente para ayudar a establecer la escala verdadera de la infección dentro de comunidades.

Además, el poder fijar el nivel de anticuerpos de neutralización ayudaría rápidamente a investigadores a entender la poste-infección de la inmunidad, a determinar a los donantes potenciales de anticuerpos protectores, y a fijar las vacunas que están actualmente en la tubería.

Se han desarrollado varios análisis serológicos, pero el patrón oro es hasta ahora la prueba de neutralización de la reducción de la placa (PRNT), puesto que determina directamente los niveles de anticuerpos de neutralización necesarios para inhibir el salvaje-tipo virus.

Sin embargo, la técnica es inferior-producción, con un tiempo de vuelta que haga inadecuado para la diagnosis en grande de COVID-19.

El nuevo análisis es alto-producción

“Una plataforma de la alto-producción facilitaría grandemente la prueba serológica COVID-19 e investigación antivirus,” diga a los investigadores.

Ahora, Pei-Yong Shi y los colegas han desarrollado la plataforma de SARS-CoV-2-Nluc, un análisis del virus del reportero que exhibe la réplica similar al salvaje-tipo SARS-CoV-2 in vitro.

Al usar el análisis para medir la neutralización del anticuerpo en los sueros de pacientes con COVID-19, los resultados generados eran comparables a los de PRNT convencional.

Además, el tiempo de vuelta logrado con el análisis de la alto-producción SARS-CoV-2-Nluc (3 horas) era importante más corto que se logra actualmente con la inferior-producción PRNT (tres días).

Aunque el análisis fuera realizado en un formato de 96 pozos para este estudio, Shi y los colegas dicen la magnitud y el rango dinámico del medio de la señal de Nluc que podría ser adaptado fácilmente a 384 - o formato de 1536 pozos para la prueba en grande.

“Así, el análisis se puede desplegar fácilmente para la evaluación vaccínea en grande y la prueba de neutralización del anticuerpo en seres humanos,” escribe a los investigadores.

Uso de SARS-CoV-2-Nluc en analizar hACE2 como receptor del asiento. (a) La cinética de la réplica de SARS-CoV-2-Nluc (IC Nluc) en las células de Vero E6. Las células fueron infectadas con IC Nluc en MOI 1,0. En los puntos dados del tiempo, las células fueron cosechadas para la medición de la señal del luciferase. Los medios y las desviaciones estándar a partir de tres experimentos independientes se presentan. (b) Diagram para analizar hACE2 para el asiento de IC Nluc. (c) El luciferase relativo hace señales la infección siguiente de las células que fueron preincubadas con los anticuerpos anti-hDPP4 o anti-hACE2. Las señales del luciferase de grupos anticuerpo-tratados fueron normalizadas a ésas de grupos no tratados. La desviación media y estándar de tres experimentos independientes se presenta. (d) Análisis de la inmunofluorescencia de la expresión hACE2 en las células A549-hACE2. En 24 h poste-que sembraban, las células eran fijas y manchadas con el anticuerpo policlonal anti-hACE2. (e) Luciferase hace señales de IC Nluc las células A549 y A549-hACE2 de infected561. Las células fueron infectadas con MOIs indicado y las señales del luciferase fueron medidas en 24 poste-infecciones de h.
Uso de SARS-CoV-2-Nluc en analizar hACE2 como receptor del asiento. (a) La cinética de la réplica de SARS-CoV-2-Nluc (IC Nluc) en las células de Vero E6. Las células fueron infectadas con IC Nluc en MOI 1,0. En los puntos dados del tiempo, las células fueron cosechadas para la medición de la señal del luciferase. Los medios y las desviaciones estándar a partir de tres experimentos independientes se presentan. (b) Diagram para analizar hACE2 para el asiento de IC Nluc. (c) El luciferase relativo hace señales la infección siguiente de las células que fueron preincubadas con los anticuerpos anti-hDPP4 o anti-hACE2. Las señales del luciferase de grupos anticuerpo-tratados fueron normalizadas a ésas de grupos no tratados. La desviación media y estándar de tres experimentos independientes se presenta. (d) Análisis de la inmunofluorescencia de la expresión hACE2 en las células A549-hACE2. En 24 h poste-que sembraban, las células eran fijas y manchadas con el anticuerpo policlonal anti-hACE2. (e) Luciferase hace señales de IC Nluc las células A549 y A549-hACE2 de infected561. Las células fueron infectadas con MOIs indicado y las señales del luciferase fueron medidas en 24 poste-infecciones de h.

Desarrollar el análisis para la investigación antivirus

Después, las personas desarrollaron una versión del análisis de la infección de SARS-CoV-2-Nluc para la investigación de la alto-producción de antivirals y validaron el método usando los inhibidores sabidos de SARS-CoV-2, incluyendo remdesivir y cloroquina.

Entonces utilizaron el análisis para probar las diversas drogas antivirus y antiinfectantes aprobadas y de investigación, incluyendo unas sabidas para trabajar contra el VIH, el virus de la hepatitis C, y el rinovirus humano.

De 40 composiciones probadas (remdesivir incluyendo y cloroquina usados para la validación), el análisis determinó el nelfinavir de las drogas del VIH y el cobicistat y el rupintrivir humano de la droga del rinovirus como los inhibidores más potentes y más selectivos de SARS-CoV-2-Nluc.

“Basado en sus potencias antivirus estableció in vitro, es inverosímil que el nelfinavir o el cobicistat ejercería efectos clínicos importantes en los pacientes COVID-19 en las dosis clínico aprobadas de la corriente,” dijo Shi y a las personas.

Rupintrivir puede inhibir efectivo SARS-CoV-2

Sin embargo, el rupintrivir es un inhibidor covalente selectivo de los 3 virales quimotripsina-como la enzima de la proteasa de la cisteína (3CLpro) que regula la réplica del coronavirus, dice a los investigadores.

Rupintrivir puede, por lo tanto, para inhibir SARS-CoV-2 cegando la actividad principal de la proteasa de la cisteína 3CLpro, sugieren.

“Los estudios serían requeridos más lejos entender mejor la manera de los rupintrivir de la acción, eficacia en los modelos animales, 268 y las ventajas clínicas potenciales en los pacientes COVID-19,” escriben Shi y a colegas.

Un rapid, alto-producción, herramienta segura

Los investigadores dicen que el análisis de SARS-CoV-2-Nluc representa un rapid, una alto-producción, una herramienta segura para la prueba de la neutralización y una investigación antivirus de la droga.

“Puesto que la neutralización de título es un parámetro dominante para predecir inmunidad, el análisis rápido de la neutralización de SARS-CoV-2-Nluc habilitará muchos aspectos de la investigación COVID-19, incluyendo vigilancia epidemiológica, revelado vaccíneo, y descubrimiento antivirus,” escriben.

Entre los agentes antivirus probados, el “rupintrivir fue determinado como inhibidor in vitro selectivo de SARS-CoV-2 que se pudo considerar para que otros estudios establezcan completo su potencial para el tratamiento de COVID-19,” concluye a las personas.

Advertencia *Important

el bioRxiv publica los partes científicos preliminares que par-no se revisan y, por lo tanto, no se deben mirar como concluyentes, conduce práctica clínica/comportamiento relativo a la salud, o tratado como información establecida.

Journal reference:

Shi PY, et al. A nanoluciferase SARS-CoV-2 for rapid neutralization testing and screening of anti-infective drugs for COVID-19. bioRxiv 2020. doi: https://doi.org/10.1101/2020.06.22.165712

Sally Robertson

Written by

Sally Robertson

Sally first developed an interest in medical communications when she took on the role of Journal Development Editor for BioMed Central (BMC), after having graduated with a degree in biomedical science from Greenwich University.

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