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Nova ferramenta para aumentar a acessibilidade para o teste COVID-19

Um grupo de investigação da Universidade da California Santa Barbara demonstrou recentemente um método eficaz na redução de custos, simples, e muito menos tóxico isolar o anfitrião e ácidos nucleicos e proteínas do micróbio patogénico a fim aerodinamizar a detecção de vírus do ADN e do RNA - incluir o coronavirus 2 da Síndrome Respiratória Aguda Grave (SARS-CoV-2). Seus resultados estão actualmente disponíveis no server da pré-impressão do bioRxiv*.

A crise de saúde de pressão da pandemia em curso da doença do coronavirus (COVID-19), causada por SARS-CoV-2, conduziu não somente na morbosidade e na mortalidade globais significativas mas igualmente às conseqüências econômicas e sociais severas.

A arma preliminar em nossa luta contra esta pandemia é uma aproximação difundida e atingível do teste para monitorar a carga SARS-CoV-2 e a propagação, que é necessário informar subseqüentemente medidas adequadas da retenção e da mitigação.

Contudo, o teste global escalado é ainda uma necessidade ardente, não satisfeita da saúde pública; além, muitas tentativas de satisfazer esta procura conduziram às faltas das fontes e dos reagentes que são necessários para a amostra que processa, da extracção do RNA, e, por sua vez, ràpida de obter resultados da análise.

Ou seja os jogos da extracção transformaram-se um recurso de limitação para o teste SARS-CoV-2, que alertaram a elevação das técnicas e dos protocolos alternativos do isolamento do RNA SARS-CoV-2 que contornam inteiramente a etapa da extracção do RNA.

Para endereçar mais esta edição, os pesquisadores da Universidade da California Santa Barbara desenvolveram recentemente um método um pouco simples para isolar ácidos nucleicos e proteínas das pilhas e dos vírus conhecidos como a PÉROLA (isto é, um acrônimo para a recuperação aumentada precipitação do Analyte).

Como trabalhos da PÉROLA e como foi avaliada?

Em resumo, a PÉROLA utiliza uma solução detergente-baseada não-iónica do lysis para as membranas de pilha de interrupção e os envelopes virais, fornecendo ao mesmo tempo condicionam favorável para a precipitação à base de álcool e a recuperação do ADN, do RNA, e das proteínas.

Conseqüentemente, a PÉROLA pode ser vista como uma aproximação barata e coluna-livre para isolar ácidos nucleicos e proteínas usando somente reagentes de laboratório comuns. Mas os métodos simplificados têm que fornecer a confiança similar a fim ser aceitado universal.

Para avaliar seu método propor, os pesquisadores extraíram o RNA das amostras de-identificadas positivas para SARS-CoV-2 usando ambos desenvolvem recentemente a aproximação da PÉROLA e um jogo padrão usado, dedicado da extracção do RNA.

Seu passo seguinte era utilizar o RNA isolado para estudar os níveis do gene do nucleoprotein SARS-CoV-2, assim como o material genético do ribonuclease P do anfitrião nas amostras. O teste transcrição-quantitativo reverso de uma etapa da referência da reacção em cadeia da polimerase para COVID-19 (recomendado pelo CDC dos E.U.) foi aplicado então.

Após ter testado amostras diferentes às relações da Pérola-lysis-solução, os pesquisadores observaram que a PÉROLA exigiu um aumento um pouco modesto na entrada inicial da amostra (1.25-fold) alcançar a sensibilidade aparentada ao jogo comercial da extracção do RNA usado neste estudo.

Vista geral da PÉROLA. B) Análise RT-qPCR comparativa dos níveis do nucleocapsid SARS-CoV-2 e seqüências do RNA de RNaseP em quatro amostras SARS-CoV-2 positivas de-identificadas após a extracção do RNA usando a PÉROLA ou um jogo dedicado da extracção do RNA (QIAamp mini Elute o jogo da rotação do vírus). As amostras correspondentes cor-são codificadas. As linhas pretas indicam o número médio. P = 0,72 (N1), P = 0,56 (RNaseP), t-teste.
Vista geral da PÉROLA. B) Análise RT-qPCR comparativa dos níveis do nucleocapsid SARS-CoV-2 (N1) e seqüências do RNA de RNaseP em quatro amostras SARS-CoV-2 positivas de-identificadas após a extracção do RNA usando a PÉROLA ou um jogo dedicado da extracção do RNA (QIAamp mini Elute o jogo da rotação do vírus). As amostras correspondentes cor-são codificadas. As linhas pretas indicam o número médio. P = 0,72 (N1), P = 0,56 (RNaseP), t-teste.

Uma técnica evolutiva, rápida e segura

“Nossos resultados indicam que a PÉROLA facilita a detecção dos transcritos SARS-CoV-2 em amostras positivas do cotonete COVID-19 com a sensibilidade comparável àquela tida recursos para por jogos disponíveis no comércio da extracção do RNA”, dizem autores do estudo em seu papel do bioRxiv.

Este resultado particular sublinha a plausibilidade de usar a PÉROLA como uma alternativa praticável para facilitar e avançar a detecção sensível de SARS-CoV-2 em amostras respiratórias de pacientes com COVID-19.

Uma vantagem adicional da PÉROLA em comparação com métodos disponíveis no comércio coluna-baseados da extracção do RNA é a possibilidade de recuperar proteínas ao lado dos ácidos nucleicos. Naturalmente, isto alarga a aplicabilidade potencial desta ferramenta poderosa para detectar muitos vírus diversos.

Consequentemente, nem o equipamento especializado nem o pessoal altamente treinado estão justificados, quando as exigências de manipulação mínimas fizerem a PÉROLA muito evolutiva - que é certamente desejável para as operações de teste do volume alto direly necessários nesta pandemia.

Cortes de estrada potenciais na rota à aplicação do grosso da população

Embora a pesquisa para suportar estas reivindicações seja sólido, determinadas advertências têm que ser levadas em consideração. Por exemplo, há uma possibilidade que o media da coleção usado para o armazenamento da amostra antes do processamento possa substancialmente impactar o desempenho da PÉROLA.

Além disso, a polarização da extracção introduzida pela PÉROLA não pode ser excluída, porque RNAs curto - incluindo o transporte, RNAs nucleolar, e micro pequeno - seja muito mais incómodo precipitar em comparação com umas moléculas mais longas do ADN e do RNA.

Daqui, as melhorias adicionais podem ser necessárias para executar inteiramente a PÉROLA como uma ferramenta do isolamento do ácido nucleico e da proteína do grosso da população para detectar outros vírus de outras fontes (desde que o tipo da amostra pode significativamente influenciar o desempenho total).

Mas levando em conta tudo, é bastante claro que a PÉROLA pode oferecer uma alternativa acessível para a aerodinamização diagnóstica nos lugar geográficos que faltam a capacidade profissional do laboratório e a alcançam mesmo aos reagentes especializados.

Isto significa que a barra alta “do teste luxuoso” pode finalmente ser abaixada em muitas partes diferentes do mundo. E nada é necessário mais nos tempos em que a pandemia COVID-19 ainda parece como uma batalha subida.

Observação *Important

o bioRxiv publica os relatórios científicos preliminares que par-não são revistos e, não devem conseqüentemente ser considerados como conclusivos, guia a prática clínica/comportamento saúde-relacionado, ou tratado como a informação estabelecida.

Journal reference:
Dr. Tomislav Meštrović

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Dr. Tomislav Meštrović

Dr. Tomislav Meštrović is a medical doctor (MD) with a Ph.D. in biomedical and health sciences, specialist in the field of clinical microbiology, and an Assistant Professor at Croatia's youngest university - University North. In addition to his interest in clinical, research and lecturing activities, his immense passion for medical writing and scientific communication goes back to his student days. He enjoys contributing back to the community. In his spare time, Tomislav is a movie buff and an avid traveler.

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