Um grupo de investigação da Universidade da California Santa Barbara demonstrou recentemente um método eficaz na redução de custos, simples, e muito menos tóxico isolar o anfitrião e ácidos nucleicos e proteínas do micróbio patogénico a fim aerodinamizar a detecção de vírus do ADN e do RNA - incluir o coronavirus 2 da Síndrome Respiratória Aguda Grave (SARS-CoV-2). Seus resultados estão actualmente disponíveis no server da pré-impressão do bioRxiv*.
A crise de saúde de pressão da pandemia em curso da doença do coronavirus (COVID-19), causada por SARS-CoV-2, conduziu não somente na morbosidade e na mortalidade globais significativas mas igualmente às conseqüências econômicas e sociais severas.
A arma preliminar em nossa luta contra esta pandemia é uma aproximação difundida e atingível do teste para monitorar a carga SARS-CoV-2 e a propagação, que é necessário informar subseqüentemente medidas adequadas da retenção e da mitigação.
Contudo, o teste global escalado é ainda uma necessidade ardente, não satisfeita da saúde pública; além, muitas tentativas de satisfazer esta procura conduziram às faltas das fontes e dos reagentes que são necessários para a amostra que processa, da extracção do RNA, e, por sua vez, ràpida de obter resultados da análise.
Ou seja os jogos da extracção transformaram-se um recurso de limitação para o teste SARS-CoV-2, que alertaram a elevação das técnicas e dos protocolos alternativos do isolamento do RNA SARS-CoV-2 que contornam inteiramente a etapa da extracção do RNA.
Para endereçar mais esta edição, os pesquisadores da Universidade da California Santa Barbara desenvolveram recentemente um método um pouco simples para isolar ácidos nucleicos e proteínas das pilhas e dos vírus conhecidos como a PÉROLA (isto é, um acrônimo para a recuperação aumentada precipitação do Analyte).
Como trabalhos da PÉROLA e como foi avaliada?
Em resumo, a PÉROLA utiliza uma solução detergente-baseada não-iónica do lysis para as membranas de pilha de interrupção e os envelopes virais, fornecendo ao mesmo tempo condicionam favorável para a precipitação à base de álcool e a recuperação do ADN, do RNA, e das proteínas.
Conseqüentemente, a PÉROLA pode ser vista como uma aproximação barata e coluna-livre para isolar ácidos nucleicos e proteínas usando somente reagentes de laboratório comuns. Mas os métodos simplificados têm que fornecer a confiança similar a fim ser aceitado universal.
Para avaliar seu método propor, os pesquisadores extraíram o RNA das amostras de-identificadas positivas para SARS-CoV-2 usando ambos desenvolvem recentemente a aproximação da PÉROLA e um jogo padrão usado, dedicado da extracção do RNA.
Seu passo seguinte era utilizar o RNA isolado para estudar os níveis do gene do nucleoprotein SARS-CoV-2, assim como o material genético do ribonuclease P do anfitrião nas amostras. O teste transcrição-quantitativo reverso de uma etapa da referência da reacção em cadeia da polimerase para COVID-19 (recomendado pelo CDC dos E.U.) foi aplicado então.
Após ter testado amostras diferentes às relações da Pérola-lysis-solução, os pesquisadores observaram que a PÉROLA exigiu um aumento um pouco modesto na entrada inicial da amostra (1.25-fold) alcançar a sensibilidade aparentada ao jogo comercial da extracção do RNA usado neste estudo.
Vista geral da PÉROLA. B) Análise RT-qPCR comparativa dos níveis do nucleocapsid SARS-CoV-2 (N1) e seqüências do RNA de RNaseP em quatro amostras SARS-CoV-2 positivas de-identificadas após a extracção do RNA usando a PÉROLA ou um jogo dedicado da extracção do RNA (QIAamp mini Elute o jogo da rotação do vírus). As amostras correspondentes cor-são codificadas. As linhas pretas indicam o número médio. P = 0,72 (N1), P = 0,56 (RNaseP), t-teste.
Uma técnica evolutiva, rápida e segura
“Nossos resultados indicam que a PÉROLA facilita a detecção dos transcritos SARS-CoV-2 em amostras positivas do cotonete COVID-19 com a sensibilidade comparável àquela tida recursos para por jogos disponíveis no comércio da extracção do RNA”, dizem autores do estudo em seu papel do bioRxiv.
Este resultado particular sublinha a plausibilidade de usar a PÉROLA como uma alternativa praticável para facilitar e avançar a detecção sensível de SARS-CoV-2 em amostras respiratórias de pacientes com COVID-19.
Uma vantagem adicional da PÉROLA em comparação com métodos disponíveis no comércio coluna-baseados da extracção do RNA é a possibilidade de recuperar proteínas ao lado dos ácidos nucleicos. Naturalmente, isto alarga a aplicabilidade potencial desta ferramenta poderosa para detectar muitos vírus diversos.
Consequentemente, nem o equipamento especializado nem o pessoal altamente treinado estão justificados, quando as exigências de manipulação mínimas fizerem a PÉROLA muito evolutiva - que é certamente desejável para as operações de teste do volume alto direly necessários nesta pandemia.
Cortes de estrada potenciais na rota à aplicação do grosso da população
Embora a pesquisa para suportar estas reivindicações seja sólido, determinadas advertências têm que ser levadas em consideração. Por exemplo, há uma possibilidade que o media da coleção usado para o armazenamento da amostra antes do processamento possa substancialmente impactar o desempenho da PÉROLA.
Além disso, a polarização da extracção introduzida pela PÉROLA não pode ser excluída, porque RNAs curto - incluindo o transporte, RNAs nucleolar, e micro pequeno - seja muito mais incómodo precipitar em comparação com umas moléculas mais longas do ADN e do RNA.
Daqui, as melhorias adicionais podem ser necessárias para executar inteiramente a PÉROLA como uma ferramenta do isolamento do ácido nucleico e da proteína do grosso da população para detectar outros vírus de outras fontes (desde que o tipo da amostra pode significativamente influenciar o desempenho total).
Mas levando em conta tudo, é bastante claro que a PÉROLA pode oferecer uma alternativa acessível para a aerodinamização diagnóstica nos lugar geográficos que faltam a capacidade profissional do laboratório e a alcançam mesmo aos reagentes especializados.
Isto significa que a barra alta “do teste luxuoso” pode finalmente ser abaixada em muitas partes diferentes do mundo. E nada é necessário mais nos tempos em que a pandemia COVID-19 ainda parece como uma batalha subida.
Observação *Important
o bioRxiv publica os relatórios científicos preliminares que par-não são revistos e, não devem conseqüentemente ser considerados como conclusivos, guia a prática clínica/comportamento saúde-relacionado, ou tratado como a informação estabelecida.