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Nueva herramienta para aumentar la accesibilidad para la prueba COVID-19

Un grupo de investigación de la Universidad de California Santa Barbara demostró recientemente un método de poco costo, simple, y mucho menos tóxico para aislar el ordenador principal y los ácidos nucléicos y las proteínas el patógeno para aerodinamizar la detección de los virus de la DNA y del ARN - incluyendo el coronavirus 2 (SARS-CoV-2) de la neumonía asiática. Sus conclusión están actualmente disponibles en el servidor de la prueba preliminar del bioRxiv*.

La crisis de salud que prensaba del pandémico en curso de la enfermedad del coronavirus (COVID-19), causado por SARS-CoV-2, ha dado lugar no sólo en morbosidad y mortalidad globales importantes pero también a consecuencias económicas y sociales severas.

El arma primaria en nuestro combate contra este pandémico es una aproximación dispersa y alcanzable de la prueba para vigilar la carga SARS-CoV-2 y la extensión, que es necesaria informar posteriormente a dimensiones adecuadas de la contención y de la mitigación.

Sin embargo, la prueba global escalada sigue siendo una necesidad ardiente, incumplida de la salud pública; además, muchas tentativas de satisfacer esta demanda han llevado a las escaseces de los abastecimientos y de los reactivos que son necesarios para la muestra que tramita, de extracción del ARN, y, a su vez, rápidamente de obtener resultados de la prueba.

Es decir los estuches de la extracción se convirtieron en un recurso limitador para la prueba SARS-CoV-2, que incitaron la subida de las técnicas y de los protocolos alternativos del aislamiento del ARN SARS-CoV-2 que evitan totalmente el paso de la extracción del ARN.

Para dirigirse más lejos a esta entrega, a los investigadores de la Universidad de California Santa Barbara recientemente desarrollado un método bastante simple para aislar los ácidos nucléicos y las proteínas de las células y de los virus conocidos como PERLA (es decir, siglas para la extracción aumentada precipitación del analito).

¿Cómo los trabajos de la PERLA y cómo fue evaluada?

En pocas palabras, la PERLA utiliza una solución detersorio-basada no iónica de la lisis para las membranas celulares que rompen y los envolventes virales, ofreciendo al mismo tiempo condicionan favorable para la precipitación a base de alcohol y la extracción de la DNA, del ARN, y de las proteínas.

Por lo tanto, la PERLA se puede ver como aproximación barata y olumna-libre para aislar los ácidos nucléicos y las proteínas usando solamente los reactivos de laboratorio comunes. Pero los métodos simplificados tienen que ofrecer confiabilidad similar para ser validado universal.

Para evaluar su método propuesto, los investigadores han extraído el ARN de las muestras de-determinadas positivas para SARS-CoV-2 usando ambos desarrollan nuevamente la aproximación de la PERLA y un estuche estándar usado, dedicado de la extracción del ARN.

Su paso siguiente era utilizar el ARN aislado para estudiar los niveles del gen de la nucleoproteína SARS-CoV-2, así como el material genético de la ribonucleasa P del ordenador principal en las muestras. La prueba transcripción-cuantitativa reversa de un solo paso de la referencia de la reacción en cadena de polimerasa para COVID-19 (recomendado por la CDC de los E.E.U.U.) entonces fue aplicada.

Después de probar diversas muestras a las índices de la Perla-lisis-solución, los investigadores han observado que la PERLA requirió un aumento bastante modesto en la entrada inicial de la muestra (1.25-fold) lograr la sensibilidad relacionada con el estuche comercial de la extracción del ARN usado en este estudio.

Reseña de la PERLA. B) Análisis comparativo RT-qPCR de los niveles del nucleocapsid SARS-CoV-2 y series del ARN de RNaseP en cuatro muestras positivas de-determinadas SARS-CoV-2 después de la extracción del ARN usando la PERLA o un estuche dedicado de la extracción del ARN (QIAamp mini enjuaga el estuche de la barrena del virus). Las muestras correspondientes son con código de color. Las líneas negras indican el punto medio. P = 0,72 (N1), P = 0,56 (RNaseP), t-prueba.
Reseña de la PERLA. B) Análisis comparativo RT-qPCR de los niveles del nucleocapsid SARS-CoV-2 (N1) y series del ARN de RNaseP en cuatro muestras positivas de-determinadas SARS-CoV-2 después de la extracción del ARN usando la PERLA o un estuche dedicado de la extracción del ARN (QIAamp mini enjuaga el estuche de la barrena del virus). Las muestras correspondientes son con código de color. Las líneas negras indican el punto medio. P = 0,72 (N1), P = 0,56 (RNaseP), t-prueba.

Una técnica escalable, rápida y segura

“Nuestros resultados indican que la PERLA facilita la detección de las transcripciones SARS-CoV-2 en muestras positivas del lampazo COVID-19 con la sensibilidad comparable a ésa permitida por los estuches disponibles en el comercio de la extracción del ARN”, dicen a autores del estudio en su papel del bioRxiv.

Este resultado determinado acentúa la plausibilidad de usar la PERLA como opción posible para facilitar y para avance la detección sensible de SARS-CoV-2 en muestras respiratorias de pacientes con COVID-19.

Una ventaja adicional de la PERLA con respecto a métodos disponibles en el comercio olumna-basados de la extracción del ARN es la posibilidad de recuperar las proteínas junto a los ácidos nucléicos. Naturalmente, esto ensancha la aplicabilidad potencial de esta herramienta potente para descubrir muchos virus diversos.

Por consiguiente, ni autorizan el equipo especializado ni al personal altamente entrenado, mientras que los requisitos de manejo mínimos hacen la PERLA muy escalable - que es de hecho deseable para las operaciones de prueba en grandes cantidades calamitoso necesarias en este pandémico.

Barricadas potenciales en la ruta a la puesta en vigor de la corriente principal

Aunque la investigación para retroceder estas reclamaciones sea macizo, ciertas advertencias tienen que ser tenidas en cuenta. Por ejemplo, hay una posibilidad que el ambiente de la colección usado para el almacenamiento de la muestra antes del tramitación puede substancialmente afectar el funcionamiento de la PERLA.

Además, la polarización negativa de la extracción introducida por la PERLA no puede ser excluida, pues RNAs - incluyendo transporte, pequeño RNAs del nucléolo, y micro - sea brevemente mucho más incómodo precipitarse con respecto a moléculas más largas de la DNA y del ARN.

Por lo tanto, las mejorías adicionales pueden ser necesarias ejecutar completo la PERLA como herramienta del aislamiento del ácido nucléico y de la proteína de la corriente principal para descubrir otros virus de otras fuentes (puesto que el tipo de la muestra puede influenciar importante el funcionamiento total).

Pero tomando en cuenta todo, está muy sin obstrucción que la PERLA puede ofrecer una opción accesible para aerodinamizar diagnóstico en las situaciones geográficas que faltan capacidad profesional del laboratorio e incluso llegan hasta a los reactivos especializados.

Esto significa que la alta barra de la “prueba de lujo” se puede finalmente bajar en muchas diversas partes del mundo. Y no se necesita nada más en los tiempos en que el pandémico COVID-19 todavía parece como una batalla ascendente.

Advertencia *Important

el bioRxiv publica los partes científicos preliminares que par-no se revisan y, por lo tanto, no se deben mirar como concluyentes, conduce práctica clínica/comportamiento relativo a la salud, o tratado como información establecida.

Journal reference:
Dr. Tomislav Meštrović

Written by

Dr. Tomislav Meštrović

Dr. Tomislav Meštrović is a medical doctor (MD) with a Ph.D. in biomedical and health sciences, specialist in the field of clinical microbiology, and an Assistant Professor at Croatia's youngest university - University North. In addition to his interest in clinical, research and lecturing activities, his immense passion for medical writing and scientific communication goes back to his student days. He enjoys contributing back to the community. In his spare time, Tomislav is a movie buff and an avid traveler.

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