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L'approche neuve a pu activer une adoption plus large du contrôle COVID-19 pour le diagnostic dans les laboratoires de recherche

les Clinicien-scientifiques à l'université technique de Nanyang, École de Médecine Chian de Lee Kong de Singapour (NTU Singapour) (LKCMedicine) ont expliqué une voie d'améliorer la vitesse, traitant le temps et coût des essais en laboratoire COVID-19.

La méthode d'essai améliorée donne les résultats en 36 mn - un quart du temps requis par les tests existants d'étalon-or.

Leur approche neuve a pu activer l'adoption plus large du contrôle COVID-19 pour le diagnostic dans l'universitaire ou les laboratoires de recherche, et tient compte d'examiner et de recherche particulièrement dans les pays et les régions avec des capacités limitées de laboratoire.

Le test, qui peut être fait avec le matériel portatif, pourrait également être déployé dans la communauté comme outil de dépistage.

Actuel, la plupart de technique sensible pour déterminer COVID-19 est par une amplification en chaîne par polymérase appelée de technique de laboratoire (PCR), dans laquelle une machine amplifie le matériel génétique viral en le copiant maintes et maintes fois ainsi n'importe quelle trace du virus SARS-CoV-2 peut être trouvée.

Un grand goulot d'étranglement dans le contrôle d'échantillon est purification d'ARN - séparant l'ARN d'autres composantes dans l'échantillon patient - un procédé laborieux qui exige les produits chimiques qui sont maintenant dans l'alimentation courte mondiale. Ses opérations doivent être exécutées par le personnel technique fortement qualifié et peuvent prendre quelques heures.

Actuel, le matériel robotisé pour la préparation des échantillons coûte des centaines de milliers de dollars, et exige les installations spécialisées de laboratoire.

La méthode développée par NTU LKCMedicine combine plusieurs de ces opérations et permet le contrôle direct sur l'échantillon patient brut, réduisant le temps de basculement du l'échantillon-à-résultat, et enlevant le besoin de produits chimiques de purification d'ARN.

Les détails de l'approche neuve étaient publiés dans les gènes de tourillon scientifique en juin.

Tandis que l'amplification en chaîne par polymérase (PCR) est une technologie vénérable qui a prouvé à être cheval de labour pour la recherche biologique, elle a quelques inconvénients une fois utilisée en dehors de l'environnement de laboratoire. Le procédé est délicat et long. Notre test COVID-19 rapide concerne une réaction d'unique-tube qui réduit l'heure et le risque à commande manuelle de sécurité biologique pour le personnel de laboratoire, ainsi que la probabilité pour la contamination de transfert pendant le traitement des échantillons. »

Peu bientôt Keong, PhD., premier auteur d'étude, LKCMedicine, université technique de Nanyang

Hormis le contrôle pour COVID-19, la même méthode développée par l'équipe de NTU LKCMedicine peut également être employée pour trouver d'autres virus et bactéries, y compris le virus de dengue, qui est réglé pour infester Singapour pendant que le pays entretoisage pour une des plus mauvaises manifestations de dengue parmi la pandémie de coronavirus.

Le chef de l'équipe de recherche, le jappement d'Éric de professeur agrégé, qui dirige également le laboratoire génomique microbien, a dit : « Nous avons précédemment expliqué que cette méthode fonctionne pour le virus de dengue aussi bien. Une fois utilisé directement sur une prise de sang brute avec le virus de dengue, le test a donné des résultats en 28 mn. »

« Car Singapour lutte la double manifestation de dengue et de COVID-19, les deux avec les symptômes précoces assimilés, notre test pourraient aider dans la différenciation entre les deux maladies infectieuses. »

Professeur James Best, doyen de NTU LKCMedicine, a dit : « Car Singapour poursuit le contrôle proactif pour trouver, isoler, et contenir l'écart possible du coronavirus, les outils de dépistage portatifs rapides comme celui se sont développés par prof. Yap d'Assoc et son équipe pourrait venir dans l'action pratique aux sites de contrôle dans la communauté, tenant compte pour que les patients infectés soient recensés rapidement et et rapide à prendre pour éviter la boîte de vitesses. »

Du benchtop au contrôle portatif

Type, dans l'ACP vérifie, le matériel génétique sur un échantillon d'écouvillon rassemblé d'un patient doit être extrait pour retirer toutes les substances dans l'échantillon qui empêchent le test d'ACP de fonctionner. Un exemple d'un inhibiteur dans les échantillons respiratoires est la mucine (une composante principale de mucus).

Le test conçu par l'équipe de médicament de NTU LKC, qui comprend M. supérieur Sivalingam Paramalingam Suppiah de chargé de recherches, emploie la méthode « d'ACP direct », retirant le besoin de purification d'ARN, une opération longue et coûteuse.

Au lieu de cela, ils ont ajouté les enzymes inhibiteur-résistantes et les réactifs visant les composés qui masquent l'amplification d'ARN, telle que la mucine, une composante principale de mucus.

Ces enzymes et réactifs, qui sont disponibles dans le commerce, ont de haute résistance à de tels composés qui empêchent autrement l'ACP, rendant le test FAUX.

Le mélange biochimique de l'échantillon brut et les enzymes inhibiteur-résistantes et les réactifs est mis dans un tube unique, qui est inséré dans un thermocycler de laboratoire, une machine utilisée pour amplifier le matériel génétique dans l'ACP. Après 36 mn, les résultats indiquent s'il y a n'importe quelle trace de COVID-19 avec confiance.

« En sautant l'opération d'extraction d'ARN avec notre méthode direct-ACP, nous voyons des économies de coûts sur des nécessaires d'extraction d'acide nucléique, et évitons le problème des réactifs dans l'alimentation courte quand l'essai en laboratoire est construit et les augmentations de demande mondial, » avons dit M. Sivalingam.

L'équipe a également vérifié cette méthode sur un thermocycler portatif, qui peut être déployé dans des réglages d'inférieur-moyen et des endroits endémiques, indiquant la possibilité de faire faire ce test dans des réglages de santé de communauté par des membres du personnel soignant de ligne du front.

Prof. Yap d'Assoc a dit : « Nous essayons maintenant de déployer de telles méthodes direct-ACP, développées par nous-mêmes et d'autres, pour la diagnose courante. »

« Nous devons déterminer l'installation et les avantages réels dans un réglage du monde réel, et comprendre s'il y a des compromis. Quand un goulot d'étranglement est retiré, d'autres défis peuvent apparaître - comme assurer le contrôle qualité, ou réduire des erreurs manuelles. »

L'équipe regarde maintenant pour employer cette méthode pour le contrôle COVID-19 le laboratoire diagnostique clinique de NTU chez LKCMedicine ce des têtes de prof. Yap d'Assoc.

« Notre objectif est de développer les essais ultra-rapides et robotisés qui donnent des résultats en quelques minutes, et qui peuvent être réalisés par des membres du personnel soignant dans la clinique avec l'exactitude et la sensibilité assimilées comme dans les laboratoires spécialisés. »

« Ceci nous permettra plus presque de prendre le contrôle d'ACP hors des laboratoires conventionnels aux remarque-de-soins, et dans les réglages d'inférieur-moyen qui ont besoin de eux plus, » il a dit.

Source:
Journal reference:

Wee, S. K., et al. (2020) Rapid Direct Nucleic Acid Amplification Test Without RNA Extraction for SARS-CoV-2 Using a Portable PCR Thermocycler. Genes. doi.org/10.3390/genes11060664.