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O estudo encontra a neutralização do synthetic/aumentar anticorpos a SARS-CoV-2

Os cientistas têm trabalhado duramente em encontrar modos eficazes impedir ou tratar a infecção viral que causa a doença COVID-19. O vírus, coronavirus 2 da Síndrome Respiratória Aguda Grave (SARS-CoV-2), é capaz da propagação rápida e extensiva e evoca uma reacção inflamatório poderosa em uma minoria significativa dos pacientes.

Na resposta, um estudo novo pelos cientistas em ciências biológicas da afinidade e publicados no bioRxiv* do server da pré-impressão relata em julho de 2020 a descoberta de algumas moléculas do anticorpo que têm a actividade de aumentação ou de neutralização poderosa contra o vírus, em uma biblioteca de anticorpos sintéticos. Estes mantêm a promessa de ser úteis para a prevenção ou o tratamento desta doença.

Encontrando a protecção passiva

As várias aproximações são correntes vir acima com uma vacina eficaz contra o vírus, incluindo o uso de antígenos virais induzir respostas de neutralização do anticorpo. Apesar dos resultados adiantados, as perguntas permanecem sobre quanto tempo este tipo da protecção da vacina dura.

Uma outra avenida é a revelação dos anticorpos de neutralização de recombinação, que podem ajudar a tratar infecções existentes antes que uma vacina esteja tornada ou disponível global. Estas moléculas podem ser escolhidas por sua selectividade e podem ser inestimáveis em povos mais idosos de protecção ou naqueles no campo dos cuidados médicos também. Tais moléculas estão sendo testadas já nos ensaios clínicos, sendo mostrado à imunidade confer passiva nos modelos animais.

Uma terceira estratégia é o uso do plasma convalescente dos pacientes COVID-19 recuperados. Além disso, pilhas de B específicas que ligam ao domínio receptor-obrigatório viral (RBD) que os diplomatas ao receptor ACE2 da pilha de anfitrião podem ser isolados, e as seqüências do anticorpo clonadas. Isto igualmente causou um número de anticorpos em perspectiva que se estão submetendo a experimentações humanas.

Anticorpos sintéticos: Uma opção negligenciada

As bibliotecas sintéticas do anticorpo são construídas nos andaimes que foram adaptados para permitir a produção em grande escala de anticorpos. Esta é uma consideração importante quando o espaço da procura é global, e especialmente quando a terapia precisar de ser eficaz e também disponível. Além disso, o uso de formatos raros gosta de diabodies e os andaimes que faltam a afinidade de Ig, tal como DARPins, podem ser exigidos. Ao contrário dos anticorpos monoclonais (mAbs), que podem ser gerados somente dentro das pilhas mamíferas, os diabodies não têm locais naturais do glycosylation de IgG e podem ser expressados em pilhas bacterianas ou de fermento para permitir a produção em grande escala, eficaz na redução de custos.

O estudo: Encontrando anticorpos inibitórios

O estudo actual usa a plataforma (vermelha) retida do indicador da proteína do TM do indicador, que tem um método original da expressão do andaime, a saber, expressando e dobrando o no citoplasma bacteriano antes que esteja expor ao ambiente extracelular pelo escapamento através da membrana. Isto significa que o andaime deve ser muito estável a fim se submeter ao dobramento em um ambiente de diminuição, dentro da pilha bacteriana, ao resistir a tendência formar ligações de bissulfeto dentro dos domínios individuais que são essenciais para a maioria de domínios da imunoglobulina.

Um destes andaimes é a família da corrente clara do lambda (IGLV), que foi encontrada para conter genes completo-humanos do anticorpo do germline. Estes produzem um rendimento alto com o domínio variável o mais de uso geral IGHV-23 da corrente pesada depois que expressam e se dobram produtiva. Os anticorpos resultantes estão seleccionados nas velocidades ultrafast baseadas na selecção FACS-negociada de parâmetros obrigatórios do alvo múltiplo quando o vermelho é ligado a um sistema do bacteriófago que tenha a avidez alta - emperramento forte entre o anticorpo e o antígeno.

Estratégia de FACS da tela RU167 para o scFv que inibe a interacção de SARS-CoV-2 RBD/ACE2 a estratégia de exame FACS-baseada para a tela RU167 para isolar os anticorpos que limitam SARS-CoV-2 RBD e a co-ligação especificamente inibida de RBD à proteína ACE2 humana. Os RBD virais e a proteína ACE2 foram etiquetados com fluorophores diferentes (a). Ligar às pilhas que expressam os clone do scFv que limitam RBD e obstrução do local de ACE2-binding (b) seria observada e bloqueada positivamente para no lote de FACS para os eventos que eram a ELEVAÇÃO da RBD-tintura e os ACE2-dye BAIXO (c).
Estratégia de FACS da tela RU167 para o scFv que inibe a interacção de SARS-CoV-2 RBD/ACE2 a estratégia de exame FACS-baseada para a tela RU167 para isolar os anticorpos que limitam SARS-CoV-2 RBD e a co-ligação especificamente inibida de RBD à proteína ACE2 humana. Os RBD virais e a proteína ACE2 foram etiquetados com fluorophores diferentes (a). Ligar às pilhas que expressam os clone do scFv que limitam RBD e obstrução do local de ACE2-binding (b) seria observada e bloqueada positivamente para no lote de FACS para os eventos que eram a ELEVAÇÃO da RBD-tintura e os ACE2-dye BAIXO (c).

Isto gera os anticorpos da único-corrente (scFvs), que são expressados no rendimento alto na bactéria Escherichia Coli nos formatos múltiplos, incluindo diabodies com bivalency, bispecifics, e scFvs. Ainda, todos capazes da ligação ao antígeno específico de SARS-CoV-2 RBD com a afinidade alta convertida uma vez ao formato nativo do anticorpo gostam de IgG1. Isto mostra que estas moléculas do andaime são robustas.

Uma manipulação mais adicional do formato do anticorpo é possível como a fusão dos diabodies à albumina ou aos domínios albumina-obrigatórios, que lhes dá uma meia-vida mais longa no soro. Presentemente, a albumina de soro humana é produzida em uma escala industrial dentro dos pastoris de Pichia do fermento, que podem ser adaptados para gerar anticorpos de neutralização para as pandemias actuais ou futuras.

Ao ligar os ensaios foram feitos in vitro usando o ectodomain S1 e ACE2 o receptor humano, inibição de ligação ocorrida somente quando os anticorpos e o alvo S1 estaram presente em relações equimolar. Os anticorpos exigidos para inibir isto devem, conseqüentemente, ter uma afinidade extremamente alta para o alvo S1 desde que o RBD na subunidade S1 tem uma afinidade alta para ACE2.

Formatos diferentes, protecção completa

Durante um ensaio da neutralização do vírus, os pesquisadores encontraram que os diabodies e os formatos do mAb produziram a protecção completa de pilhas cultivadas da infecção com o SARS-CoV-2 vivo sobre 4 dias. Isto foi julgado pela inibição completa de um efeito cytopathic nas pilhas em dois de quatro poços.

A concentração do anticorpo exigida para a inibição completa durante este período pelo clone o mais poderoso era 5,9 nanômetro. O estudo actual difere de outro, que igualmente relataram a actividade de neutralização dos anticorpos que os pseudoviruses não-replicative ou os curtos períodos de infecção tais como uma hora com o vírus replicative vivo estiveram reservados.

Na vida real, o período de protecção exigido antes que o afastamento viral ocorra pode variar das horas aos dias, fazendo o estudo actual mais útil. Além disso, a afinidade alta e o período prolongado de associação, com baixas taxas da dissociação, significam que a proteína S1 está ocupada e, conseqüentemente, incapaz de ligar ao ACE2 para incorporar a pilha de anfitrião, apesar de sua afinidade alta para o receptor.

A estabilidade alta dos vários formatos durante o período de 4 dias do ensaio da protecção da pilha do todo é igualmente notável, indicando que todos têm afinidaoes e a actividade comparáveis da neutralização. O clone o mais poderoso mostraram concentrações de molar inibitórios equivalentes para o mAb e o diabody, em 5,9 nanômetro e em 14,3 nanômetro, respectivamente. Isto permite que a fabricação diabody seja uma opção quando a velocidade e o custo são considerações importantes.

Em resumo, os pesquisadores dizem, “o vírus SARS-CoV-2 vivo completamente neutralizado o mais alto do mAb da afinidade na cultura celular por quatro dias em uma concentração de 6,7 o nanômetro, sugerindo o uso terapêutico ou profiláctico potencial.”

Anticorpos que aumentam o emperramento do vírus

O estudo indica, “além disso, os scFvs foi identificado que aumentaram extremamente a interacção do trimer S1 viral com o receptor ACE2.”

Os clone identificados do scFv da inibição ensaio obrigatório que limite o RBD, tal como para aumentar o emperramento S1-ACE2, e isto são encontrar novo. Poder-se-ia ser que os clone do anticorpo limitados o RBD em um local longe do local ACE2 obrigatório mas estabilizados o trimer tais que estava em uma configuração apropriada para ligar ao ACE2, tal como um ` fechado acima' posicionam. Vale notando que estes clone estiveram encontrados durante uma tela para os clone originais do anticorpo que visam o RBD, formando 37% do número total de clone. Assim, são prováveis emergir quando a vacina do antígeno do ponto é usada também, tendo por resultado o emperramento viral aumentado um pouco do que a inibição.

Este fenômeno, chamado realce dependendo dos anticorpos (ADE) é sabido para ocorrer com MERS, por exemplo, usando o receptor de Fc na superfície da pilha um pouco do que o receptor da entrada. No caso actual, contudo, usa o receptor ACE2 nativo e pode assim agravar a infecção. Os pesquisadores estão continuando a analisar estrutural o processo para compreender como este está acontecendo. Comentam, “posterior investigação estão exigidos para determinar se esta observação tem implicações para a escolha dos resumos ao projetar vacinas.”

Observação *Important

o medRxiv publica os relatórios científicos preliminares que par-não são revistos e, não devem conseqüentemente ser considerados como conclusivos, guia a prática clínica/comportamento saúde-relacionado, ou tratado como a informação estabelecida.

Journal reference:
Dr. Liji Thomas

Written by

Dr. Liji Thomas

Dr. Liji Thomas is an OB-GYN, who graduated from the Government Medical College, University of Calicut, Kerala, in 2001. Liji practiced as a full-time consultant in obstetrics/gynecology in a private hospital for a few years following her graduation. She has counseled hundreds of patients facing issues from pregnancy-related problems and infertility, and has been in charge of over 2,000 deliveries, striving always to achieve a normal delivery rather than operative.

Citations

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    Thomas, Liji. (2020, July 30). O estudo encontra a neutralização do synthetic/aumentar anticorpos a SARS-CoV-2. News-Medical. Retrieved on September 29, 2020 from https://www.news-medical.net/news/20200730/Study-finds-synthetic-neutralizingenhancing-antibodies-to-SARS-CoV-2.aspx.

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