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El estudio encuentra la neutralización/el aumentar del sintético de los anticuerpos a SARS-CoV-2

Los científicos han estado trabajando difícilmente en encontrar modos eficaces de prevenir o de tratar la infección viral que causa la enfermedad COVID-19. El virus, coronavirus 2 (SARS-CoV-2) de la neumonía asiática, es capaz de la extensión rápida y extensa y evoca una reacción inflamatoria potente en una minoría importante de pacientes.

En la reacción, un nuevo estudio de los científicos en las ciencia biológicas de la afinidad y publicados en el bioRxiv* del servidor de la prueba preliminar denuncia en julio de 2020 el descubrimiento de algunas moléculas del anticuerpo que tengan actividad de aumento o de neutralización potente contra el virus, en una biblioteca de anticuerpos sintetizados. Éstos mantienen la promesa de ser útiles para la prevención o el tratamiento de esta enfermedad.

Encontrar la protección pasiva

Las diversas aproximaciones están en curso subir con una vacuna efectiva contra el virus, incluyendo el uso de antígenos virales de sacar reacciones de neutralización del anticuerpo. A pesar de resultados tempranos, sigue habiendo las preguntas sobre cuánto tiempo este tipo de la protección de la vacuna dura.

Otra avenida es el revelado de los anticuerpos de neutralización recombinantes, que pueden ayudar a tratar infecciones existentes antes de que una vacuna esté convertida o disponible global. Estas moléculas se pueden elegir por su selectividad y pueden ser inestimables en más vieja gente de protección o ésas en el campo de la atención sanitaria también. Tales moléculas se están probando ya en las juicios clínicas, siendo mostrado para consultar inmunidad pasiva en los modelos animales.

Una tercera estrategia es el uso del plasma convaleciente de los pacientes recuperados COVID-19. Por otra parte, células de B específicas que atan al dominio receptor-obligatorio viral (RBD) que los attaches al receptor ACE2 de la célula huesped pueden ser aislados, y las series del anticuerpo reproducidas. Esto también ha dado lugar a varios anticuerpos anticipados que están experimentando juicios humanas.

Anticuerpos sintetizados: Una opción pasada por alto

Las bibliotecas sintetizadas del anticuerpo se emplean los andamios que se han adaptado para permitir la producción en grande de anticuerpos. Esto es una consideración importante cuando la extensión de la demanda es global, y especialmente cuando la terapia necesita ser efectiva y también asequible. Por otra parte, el uso de formatos infrecuentes tiene gusto de diabodies y los andamios que faltan la afinidad de Ig, tal como DARPins, pueden ser requeridos. A diferencia de los anticuerpos monoclonales (mAbs), que se pueden generar solamente dentro de las células mamíferas, los diabodies no tienen sitios naturales del glycosylation de IgG y se pueden expresar en células bacterianas o de levadura para permitir la producción en grande, de poco costo.

El estudio: Encontrar los anticuerpos inhibitorios

El estudio actual utiliza la plataforma (roja) conservada del despliegue de la proteína de TM del despliegue, que tiene un método único de expresión del andamio, a saber, expresándolo y doblando en el citoplasma bacteriano antes de que sea expuesto al ambiente extracelular por el fuga a través de la membrana. Esto significa que el andamio debe ser muy estable para experimentar doblar en un ambiente reductor, dentro de la célula bacteriana, mientras que resiste la tendencia de formar ligazones de disulfuro dentro de los dominios individuales que son esenciales para la mayoría de dominios de la inmunoglobulina.

Uno de estos andamios es la familia de la cadena liviana de la lambda (IGLV), que se ha encontrado para contener genes completo-humanos del anticuerpo del germline. Éstos producen un alto rendimiento con el dominio variable más de uso general IGHV-23 de la cadena pesada después de que expresen y doblen productivo. Los anticuerpos resultantes se seleccionan a las velocidades ultrarrápidas basadas en la selección FACS-mediada de parámetros obligatorios de objetivos múltiples cuando el rojo se conecta a un sistema del bacteriófago que tenga alta avidez - atascamiento fuerte entre el anticuerpo y el antígeno.

Estrategia de FACS de la pantalla RU167 para el scFv que inhibe la acción recíproca de SARS-CoV-2 RBD/ACE2 la estrategia de blindaje FACS-basada para la pantalla RU167 para aislar los anticuerpos que limitan SARS-CoV-2 RBD y co-atar específicamente inhibido de RBD a la proteína humana ACE2. Los RBD virales y la proteína ACE2 etiqueta con diversos fluorophores (a). El atar a las células que expresan las copias del scFv que limitan RBD y cegar el sitio de ACE2-binding (b) sería observado y bloqueado positivo para en el gráfico de FACS para las acciones que eran el ALTO del RBD-tinte y ACE2-dye (c) INFERIOR.
Estrategia de FACS de la pantalla RU167 para el scFv que inhibe la acción recíproca de SARS-CoV-2 RBD/ACE2 la estrategia de blindaje FACS-basada para la pantalla RU167 para aislar los anticuerpos que limitan SARS-CoV-2 RBD y co-atar específicamente inhibido de RBD a la proteína humana ACE2. Los RBD virales y la proteína ACE2 etiqueta con diversos fluorophores (a). El atar a las células que expresan las copias del scFv que limitan RBD y cegar el sitio de ACE2-binding (b) sería observado y bloqueado positivo para en el gráfico de FACS para las acciones que eran el ALTO del RBD-tinte y ACE2-dye (c) INFERIOR.

Esto genera los anticuerpos de cadena simple (scFvs), que se expresan en el alto rendimiento en la bacteria Escherichia Coli en formatos múltiples, incluyendo diabodies con bivalency, bispecifics, y los scFvs. No obstante, todos capaces de atar al antígeno específico de SARS-CoV-2 RBD con la alta afinidad convertida una vez al formato nativo del anticuerpo tienen gusto de IgG1. Esto muestra que estas moléculas del andamio son robustas.

La manipulación adicional del formato del anticuerpo es posible por ejemplo fundir los diabodies a la albúmina o a los dominios albúmina-obligatorios, que les da una semivida más larga en suero. Actualmente, la albúmina de suero humana se produce en una escala industrial dentro de los pastoris de Pichia de la levadura, que se pueden adaptar para generar los anticuerpos de neutralización para los pandémicos actuales o futuros.

Cuando son ines vitro los análisis obligatorios fueron hechos usando el ectodomain S1 y ACE2 el receptor humano, inhibición de atar ocurrida solamente cuando los anticuerpos y el objetivo S1 estaban presentes en las índices equimolares. Los anticuerpos requeridos para inhibir esto deben, por lo tanto, tener una afinidad extremadamente alta para el objetivo S1 puesto que el RBD en la subunidad S1 tiene una alta afinidad para ACE2.

Diversos formatos, protección completa

Durante un análisis de la neutralización del virus, los investigadores encontraron que los diabodies y los formatos del mAb produjeron la protección completa de células cultivadas de la infección con SARS-CoV-2 vivo durante 4 días. Esto fue juzgada por la inhibición completa de un efecto citopático sobre las células en dos de cuatro pozos.

La concentración del anticuerpo requerida para la inhibición completa durante este período por la copia más potente era 5,9 nanómetro. El estudio actual difiere de otros, que también han denunciado la actividad de neutralización de anticuerpos en que los pseudoviruses no-replicativos o los períodos cortos de la infección tales como una hora con el virus replicativo vivo fueron dados un plazo.

En la vida real, el período de la protección requerido antes de que ocurra la tolerancia viral puede variar a partir de horas a los días, haciendo el estudio actual más útil. Por otra parte, la alta afinidad y el período extendido de la asociación, con regímenes inferiores de la disociación, significa que la proteína S1 está ocupada y, por lo tanto, incapaz de atar al ACE2 para incorporar la célula huesped, a pesar de su alta afinidad para el receptor.

La alta estabilidad de los diversos formatos durante el período de cuatro días del análisis de la protección de la célula del conjunto es también significativa, indicando que toda tiene afinidades y actividad comparables de la neutralización. La copia más potente mostraron las concentraciones molares inhibitorias equivalentes para el mAb y el diabody, en 5,9 nanómetro y 14,3 nanómetro, respectivamente. Esto permite que la manufactura diabody sea una opción cuando la velocidad y el costo son consideraciones importantes.

En resumen, los investigadores dicen, “el virus vivo totalmente neutralizado más alto SARS-CoV-2 del mAb de la afinidad del cultivo celular por cuatro días en una concentración de 6,7 el nanómetro, sugiriendo uso terapéutico o profiláctico potencial.”

Anticuerpos que aumentan el atascamiento del virus

El estudio señala, “además, los scFvs fue determinado que aumentaron grandemente la acción recíproca del trímero viral S1 con el receptor ACE2.”

Las copias determinadas análisis obligatorio del scFv de la inhibición tal como las cuales limite el RBD, para aumentar el atascamiento S1-ACE2, y esto son el encontrar nuevo. Podría ser que las copias del anticuerpo limitadas el RBD en un sitio lejos del punto de enlace ACE2 pero estabilizadas el trímero tales que estaba en una configuración conveniente para atar al ACE2, tal como un ` bloqueado hacia arriba' colocan. Vale el observar de que estas copias fueron encontradas durante una pantalla para las copias únicas del anticuerpo que apuntaban el RBD, formando el 37% del número total de copias. Así, son probable emerger cuando la vacuna del antígeno del pico se utiliza también, dando por resultado el atascamiento viral creciente bastante que la inhibición.

Este fenómeno, llamado aumento con dependencia de los anticuerpos (ADE) se sabe para ocurrir con MERS, por ejemplo, usando el receptor de Fc en la superficie de la célula bastante que el receptor del asiento. En el caso actual, sin embargo, utiliza el receptor nativo ACE2 y puede empeorar así la infección. Los investigadores están continuando analizar el proceso estructural para entender cómo está suceso éste. Comentan, “posterior investigación se requieren para determinar si esta observación tiene implicaciones para la opción de epitopos al diseñar vacunas.”

Advertencia *Important

el medRxiv publica los partes científicos preliminares que par-no se revisan y, por lo tanto, no se deben mirar como concluyentes, conduce práctica clínica/comportamiento relativo a la salud, o tratado como información establecida.

Journal reference:
Dr. Liji Thomas

Written by

Dr. Liji Thomas

Dr. Liji Thomas is an OB-GYN, who graduated from the Government Medical College, University of Calicut, Kerala, in 2001. Liji practiced as a full-time consultant in obstetrics/gynecology in a private hospital for a few years following her graduation. She has counseled hundreds of patients facing issues from pregnancy-related problems and infertility, and has been in charge of over 2,000 deliveries, striving always to achieve a normal delivery rather than operative.

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