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Une analyse SARS-CoV-2 utilisant les protéines végétales

Les chercheurs en Afrique du Sud ont développé une analyse sérologique qui trouve promptement des anticorps contre les coronavirus 2 (SARS-CoV-2) de syndrôme respiratoire aigu sévère utilisant les protéines virales recombinées produites aux centrales.

L'analyse a activé le dépistage des anticorps dirigés aux antigènes de la protéine de la pointe SARS-CoV-2 qui ont été exprimés dedans et dérivés de la centrale de benthamiana de nicotiana - familièrement connue sous le nom de benth ou benthi et d'un parent proche de tabac et de la substance de la nicotiana indigène en Australie. Le benthamiana de N. est également une centrale courante utilisée pour « pharming » des anticorps monoclonaux et d'autres protéines recombinées.

Benthamiana de nicotiana. Crédit d
Benthamiana de nicotiana. Crédit d'image : Hanjo Hellmann/Shutterstock

La protéine de pointe est les utilisations de la structure SARS-CoV-2 de membrane de gripper l'enzyme de conversion de l'angiotensine humaine 2 (ACE2) de récepteur de cellule hôte et de gagner l'entrée virale.

Le dépistage robuste ici activé développé indirect de la méthode ELISA (ELISA) des anticorps contre des parties de cette protéine de pointe dans les échantillons prélevés des patients qui avaient précédemment été infectés avec SARS-CoV-2.

Les analyses sérologiques utilisant de tels systèmes centrale centrale d'expression pourraient représenter les outils pratiques et rentables pour la mesure de la séroprévalence et l'immunité protectrice contre SARS-CoV-2 dans les réglages less-resourced, indiquent les hamburgers de Wendy (université de Cape Town, de l'Afrique du Sud) et les collègues.

Une version de prétirage du papier est procurable sur le medRxiv* de serveur, alors que l'article subit l'inspection professionnelle.

Des sérodiagnostics sont eus un besoin urgent pour suivre l'écart de la pandémie

La pandémie COVID-19 - provoquée par SARS-CoV-2 - a rapidement balayé le globe depuis qu'elle a commencé à Wuhan, Chine, tard l'année dernière. Le virus, qui a maintenant plus de 18,65 millions de personnes infectés et a entraîné les plus de 703.000 morts, continue à constituer la santé globale significative et le danger socio-économique.

« Il y a un besoin critique du développement des sérodiagnostics de trouver les anticorps SARS-CoV-2, » écrivez les hamburgers et l'équipe. La « séroprévalence de population étudie pour estimer l'ampleur de la pandémie étendue dans les communautés, et étudie définir l'immunité protectrice à SARS-CoV-2, tout dépendent des sérodiagnostics fiables. »

Dans le meilleur des cas, ces tests doivent également être rentables, de sorte que leur application dans les réglages à faibles revenus soit faisable, ajoute l'équipe.

Produire des protéines virales recombinées

Les protéines recombinées épurées exigées pour des analyses sérologiques peuvent être produites utilisant différents systèmes variés d'expression de la protéine, y compris bactérien, mammifère, la levure, l'insecte, et les systèmes centrale centrale.

les systèmes centrale Centrale offrent plusieurs avantages par rapport aux systèmes mammifère- et basés sur insecte conventionnels plus très utilisés. En particulier, ils sont rapides et rentables puisqu'ils n'exigent pas des medias ou des états chers d'accroissement, qui est particulièrement désirable dans les réglages à faibles revenus. Ils offrent également des avantages par rapport aux systèmes bactériens ou basés sur levure, puisqu'ils supportent des modifications goujon-de translation assimilées à ceux des systèmes de cellules mammifères.

Historiquement, le désavantage principal lié aux systèmes centrale centrale d'expression de la protéine a été puissance inférieure, mais les avances en technologie de centrale ont aidé à surmonter ce défi.

Les auteurs disent que benthamiana de nicotiana est préférée comme système d'expression de la protéine dû à son rétablissement rapide de biomasse, de gène goujon-transcriptionnel défectueux amortissant le système, et d'un large éventail de stratégies de bureau d'études cette toute l'aide pour surmonter le problème de la puissance inférieure.

L'analyse neuve d'ELISA emploie des protéines virales exprimées en benthamiana de nicotiana

La sous-unité S1 de la protéine virale de pointe est hautement immunogène, et sa partie de RBD est l'objectif principal des anticorps de neutralisation après l'infection, signifiant que ces derniers les antigènes de protéine de pointe sont devenus un centre important de beaucoup d'études sérologiques.

Maintenant, les hamburgers et les collègues ont développé une analyse indirecte d'ELISA utilisant la pointe S1, et des antigènes de RBD de SARS-CoV-2 exprimé en benthamiana de nicotiana.

L'équipe a rassemblé des échantillons de sérum de 77 patients convalescents sud-africains qui avaient précédemment été infectés avec SARS-CoV-2, comme confirmé par le contrôle (PCR) d'amplification en chaîne par polymérase. Des échantillons ont été pris une médiane de six semaines suivant le diagnostic, et la plupart des patients avaient remarqué le léger à modéré COVID-19.

des anticorps de Virus-détail ont été promptement trouvés

Utilisant l'ELISA developpé récemment avec des antigènes viraux centrale-dérivés, les chercheurs ont prouvé que les immunoglobulines de SARS-CoV-2-specific (Igs) étaient promptement détectables dans les échantillons.  

Parmi les 77 participants, la réactivité de S1-specific IgG a été trouvée dans 51 cas (de 66%), et la réactivité du RBD-détail IgG a été trouvée dans 48 cas (de 62%).

Notamment, les résultats étaient hautement concordants avec validée, analyse commerciale de la haut-sensibilité ELISA, dit l'équipe.

« Dépistage robuste des anticorps spécifiques SARS-CoV-2 »

« Notre étude explique que les protéines SARS-CoV-2 recombinées produites aux centrales activent le dépistage robuste des anticorps de SARS-CoV-2-specific, » écrivent des hamburgers et des collègues.

Les auteurs disent qu'un des objectifs principaux était de développer une analyse rentable qui pourrait être employée pour le seroepidemiology de grande puissance et la recherche dans l'immunité humorale SARS-CoV-2.

« Nous avons réalisé ceci en se servant des centrales pour la production des antigènes viraux, qui a l'avantage de l'écaille- rapide, et les réactifs d'accès qui étaient localement et ainsi procurables procurable à un plus peu coûteux, » elles écrivent.

« Les études sérologiques dans un réglage aiment le nôtre, en Afrique du Sud, où les comorbidités telles que le VIH et la TB sont hautement répandues, underexplored et peuvent tirer bénéfice de cette analyse, » conclut l'équipe.

Avis *Important

le medRxiv publie les états scientifiques préliminaires qui pair-ne sont pas observés et ne devraient pas, en conséquence, être considérés comme concluants, guident la pratique clinique/comportement relatif à la santé, ou traité en tant qu'information déterminée.

Journal reference:
Sally Robertson

Written by

Sally Robertson

Sally first developed an interest in medical communications when she took on the role of Journal Development Editor for BioMed Central (BMC), after having graduated with a degree in biomedical science from Greenwich University.

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