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L'analyse neuve d'anticorps pour COVID-19 promet le dépistage sensible de masse-écaille

La probabilité que la pandémie COVID-19 ne s'abaissera pas n'importe quand bientôt a suscité la recherche intensive sur son dépistage et demande de règlement, pour éviter la boîte de vitesses en avant. Un papier neuf par des chercheurs aux sciences de santé d'université et de Hamilton de McMaster, publiées sur le medRxiv* de serveur de prétirage en septembre 2020, états sur le développement d'une analyse sérologique qui convient pour le contrôle sensible d'anticorps de haut-débit pour COVID-19.

Cette image de microscope électronique de boîte de vitesses montre SARS-CoV-2, le virus qui entraîne COVID-19, d
Cette image de microscope électronique de boîte de vitesses montre SARS-CoV-2, le virus qui entraîne COVID-19, d'isolement dans un patient au virus des États-Unis que des particules sont montrées apparaître de la surface des cellules cultivées dans le laboratoire. Les pointes sur l'arête extérieure des particules de virus donnent à des coronaviruses leur nom, tête tête. L'image a capté et colorized aux laboratoires de la montagne rocheuse de NIAID (RML) à Hamilton, Montana. Crédit : NIAID

Trouver COVID-19 asymptomatique

Les sympt40mes COVID-19 apparaissent habituellement 2-14 jours après avoir été exposé au coronavirus 2 (SARS-CoV-2) de syndrôme respiratoire aigu sévère, mais beaucoup de gens sont asymptomatiquement infectés - en fait, jusqu'à 80% de cas ne manifestent pas des sympt40mes. Puisque de tels cas négocient l'étendre viral dans la moitié de toutes les infections connues, le test sérologique devient indispensable de capter des taux d'infection réels.

Les tests diagnostique utilisés dans COVID-19 sont une réaction en chaîne inverse en temps réel de transcription-polymérase (ACP de droite) dans laquelle le génome d'ARN viral est amplifié pour permettre le dépistage. Cet acide nucléique viral est obtenu type à partir des écouvillons nasaux ou de gorge. La probabilité d'obtenir un résultat positif précis de tels écouvillons est la plus grande dans pendant quatre jours avant que les sympt40mes commencent habituellement. En fait, à partir du premier jour des sympt40mes, le dépistage d'ARN est possible, faisant une pointe pendant la première semaine de l'infection. Cependant, par la semaine 3, les tests d'ACP commencent à retourner au négatif, à moins que dans des cas sévères. Une opposition est que la positivité d'ACP indique seulement la présence de l'ARN viral et du virus non viable ou contagieux. Ce test est environ 80% sensible mais détail 100%.

Test sérologique

Il est évident que le contrôle SARS-CoV-2 soit essentiel pour l'endiguement de la transmission du virus, nécessitant des méthodes hautement précises d'essai. Une telle option est sérologie, pour trouver une réaction immunitaire et aider ainsi à prendre ceux qui sont infectés parmi des contacts, recensent les donneurs convalescents potentiels de plasma et évaluent l'efficacité vaccinique.

Les anticorps Anti-SARS-CoV-2 indiquent que la personne a peut-être développé l'immunité protectrice dirigée contre la grande glycoprotéine S de pointe, composée de deux domaines, S1 et S2. Le premier contient le domaine récepteur-grippant (RBD), qui est lié à la majorité de grippage de neutralisation d'anticorps.

La protéine de S existe en nature comme homotrimer, grippant à l'enzyme de conversion de l'angiotensine 2 (ACE2) de récepteur de cellule humaine. Par la suite, la fusion de virus-cellule est déclenchée, menant à l'entrée du virus dans la cellule hôte.

Des études plus tôt indiquent des titres inférieurs des anticorps d'IgG spécifique dans les gens avec l'infection asymptomatique ou bénigne mais les hauts niveaux dans ceux qui ont récupéré de COVID-19 sévère.

Déterminer une analyse de Haut-Débit

L'étude actuelle décrit les résultats d'une méthode d'essai neuve utilisée sur dix patients convalescents ACP-positifs, 4 personnes ACP-négatives, et 332 contrôles de pre-COVID. Tous les échantillons patients ont été obtenus entre le jour 23 et le jour 89 de l'infection. Des contrôles, 26 étaient sains, alors que 306 étaient pensés pour avoir des comptes de plaquette inférieurs, immunisés en nature ou dus à l'usage d'héparine.

Les chercheurs ont alors développé un test d'ELISA pour la protéine intégrale de S et de RBD. Ils ont déterminé les concentrations optimales de RBD et de S pour être 2 µg/mL (figure 1A) et protéine de S à 5 µg/mL, en termes de caractériser des valeurs positives et négatives. De même, la dilution optimale de sérum pour une coupure entre le positif et le négatif se sont avérés 1/100.

ELISA fortement réactifs et reproductibles

Les échantillons convalescents étaient uniformément fortement réactifs aux deux antigènes, plus contre le S intégral que le RBD. Les échantillons Pre-COVID-19 étaient en grande partie non-réactifs. Ils ont constaté que l'anti-s et anti-RBD IgM étaient moins détail et IgA pour les deux antigènes, la plupart de détail parmi tous les anticorps.

Ils se sont également assurés que les résultats d'analyse étaient reproductibles en répétant le test quatre fois ou plus, avec la variabilité minimale entre les analyses. Beaucoup de méthodes sont employées pour assurer la sécurité tout en traitant les échantillons virus-contaminés, tels que le traitement thermique et le Triton X-100. Ils ont trouvé que ce traitement thermique a affecté le régime de dépistage pour l'IgG et l'IgM. Ceci a pu être dû à la dénaturation et à la totalisation des antigènes sur le chauffage. L'IgM a les structures de réseau lourd qui le rendent plus vulnérable à l'instabilité thermique.

La demande de règlement avec Triton X-100 n'a exercé aucun effet significatif sur la réactivité d'échantillon dans les échantillons patients. Les titres d'anticorps dans les titres pre-COVID-19 étaient plus haut après demande de règlement par l'un ou l'autre de ces méthodes.

Inhibition d'IgG grippant à RBD

Les échantillons COVID-19 patients se sont uniformément avérés pour montrer l'inhibition du l'anti-RBD grippement environ de 80%, de même qu'un contrôle qui a vérifié le positif pour l'anti-RBD IgG. La validation des analyses a été faite utilisant des analyses disponibles dans le commerce.

Les chercheurs disent, « nous décrivent un débit élevé, méthode sérologique reproductible et semi-quantitative pour trouver des anticorps contre SARS-CoV-2. » L'analyse mesure chacun des trois types d'anticorps qui sont réactifs à S et à protéines virales de RBD.

Des études plus tôt, il est apparent que tous les isotypes d'anticorps augmentent solidement, avec des crêtes d'IgA et d'IgM à 1-3 semaines après infection, et par la suite l'IgG. La capacité de mesurer chacun des trois isotypes permet, pour cette raison, une visualisation plus grande de la réaction immunitaire avec un plus à faible risque des résultats faussement négatifs.

D'ailleurs, le S intégral et des antigènes de RBD ont été employés dans l'analyse actuelle. La spécificité de tels tests dépend de beaucoup de facteurs, y compris le type du test et d'antigène, ainsi que d'autre des autoanticorps d'hôte tels que le facteur rhumatoïde et d'autres anticorps heterophile.

Activité hétérospécifique avec l'autre Coronaviruses

L'activité hétérospécifique avec des antigènes d'autres coronaviruses est également un facteur important qui a été recensé dans les nécessaires disponibles dans le commerce de SARS-CoV-2 ELISA et dans l'analyse actuelle. Les IgA semblent être le moins détail parmi les anticorps COVID-19. Ainsi, la raison des résultats de test positifs dans 19 contrôles pre-COVID-19 peut être activité hétérospécifique. Les chercheurs disent, « les contrôles pre-COVID-19 qui ont eu l'anti-RBD anticorps n'étaient pas faux positif en soi parce que le grippement d'anticorps pourrait être empêché par l'excès RBD. » C'est le plus susceptible d'être dû aux anticorps croix-réactifs produits à d'autres coronaviruses saisonniers.

La spécificité est également une variable de la population de contrôle sélectée. Les chercheurs ont trouvé cela avec l'ELISA optimisé utilisé ici, la spécificité était 94% ou davantage basé sur la classe et l'antigène sélectés d'anticorps. Ces résultats sont conformes également à ceux rapportés utilisant deux analyses commerciales avec la sensibilité et la spécificité de 100% et de 90%, respectivement. En quelques papiers en avance, cependant, ce dernier a été rapporté pour avoir la sensibilité et la spécificité sensiblement inférieures de 65% et de 74%, respectivement.

Implications

Un avantage de l'approche de contrôle du courant ELISA est qu'il est rapide et droit, sans besoin de tous les instruments spécialisés. Il est capable de l'adaptation aux laboratoires diagnostiques normaux et est hautement reproductible entre différentes analyses quand les tests sont répétés.

Ce haut-débit sensible, spécifique, et reproductible ELISA est susceptible d'être utile en trouvant des taux d'infection et les changements des réactions immunologiques au virus dans des études longitudinales. Il peut également compléter l'ARN viral vérifiant pour permettre à des chercheurs de capter des infections récentes et de décrire la réaction des anticorps à SARS-CoV-2 plus exactement. Il pourrait également les donneurs et les membres du personnel soignant convalescents de plasma d'écran d'aide, afin de sélecter ceux au moins pour risquer de servir les patients COVID-19 de différentes catégories. La durée de l'immunité a pu également mieux être comprise par des études sérologiques longitudinales sur les personnes symptomatiques et asymptomatiques.

Avis *Important

le medRxiv publie les états scientifiques préliminaires qui pair-ne sont pas observés et ne devraient pas, en conséquence, être considérés comme concluants, guident la pratique clinique/comportement relatif à la santé, ou traité en tant qu'information déterminée.

Journal reference:
Dr. Liji Thomas

Written by

Dr. Liji Thomas

Dr. Liji Thomas is an OB-GYN, who graduated from the Government Medical College, University of Calicut, Kerala, in 2001. Liji practiced as a full-time consultant in obstetrics/gynecology in a private hospital for a few years following her graduation. She has counseled hundreds of patients facing issues from pregnancy-related problems and infertility, and has been in charge of over 2,000 deliveries, striving always to achieve a normal delivery rather than operative.

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