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O ensaio novo do anticorpo para COVID-19 promete a detecção sensível da massa-escala

A probabilidade que a pandemia COVID-19 não se abrandará muito em breve acendeu a pesquisa intensiva sobre seus detecção e tratamento, para impedir a transmissão para a frente. Um papel novo por pesquisadores nas ciências da saúde da universidade e do Hamilton de McMaster, publicadas no medRxiv* do server da pré-impressão em setembro de 2020, relata na revelação de um ensaio serologic que seja apropriado para o teste sensível do anticorpo da alto-produção para COVID-19.

Esta imagem do microscópio de elétron da transmissão mostra SARS-CoV-2, o vírus que causa COVID-19, isolado de um paciente no vírus que dos E.U. as partículas são mostradas emergir da superfície das pilhas cultivadas no laboratório. Os pontos na borda exterior das partículas do vírus dão a coronaviruses seu nome, coroa-como. A imagem capturou e colorized em laboratórios da montanha rochosa de NIAID em Hamilton, Montana. Crédito: NIAID
Esta imagem do microscópio de elétron da transmissão mostra SARS-CoV-2, o vírus que causa COVID-19, isolado de um paciente no vírus que dos E.U. as partículas são mostradas emergir da superfície das pilhas cultivadas no laboratório. Os pontos na borda exterior das partículas do vírus dão a coronaviruses seu nome, coroa-como. A imagem capturou e colorized em laboratórios da montanha rochosa de NIAID (RML) em Hamilton, Montana. Crédito: NIAID

Detectando COVID-19 assintomático

Os sintomas COVID-19 aparecem geralmente 2-14 dias após a exposição ao coronavirus 2 da Síndrome Respiratória Aguda Grave (SARS-CoV-2), mas muitos povos são contaminados asintomaticamente - de facto, até 80% dos casos não indicam sintomas. Desde que tais casos negociam a propagação viral ao meio de todas as infecções conhecidas, o teste serologic torna-se vital pegarar taxas de infecção reais.

O teste de diagnóstico usado em COVID-19 é uma reacção em cadeia da transcrição-polimerase do reverso do tempo real (PCR do RT) em que o genoma viral do RNA é amplificado para permitir a detecção. Este ácido nucleico viral é obtido tipicamente dos cotonetes nasais ou da garganta. As possibilidades de obter um resultado positivo exacto de tais cotonetes são as mais altas no quatro dias antes que os sintomas comecem geralmente. De facto, partindo do primeiro dia dos sintomas, a detecção do RNA é possível, repicando na primeira semana da infecção. Contudo, na semana 3, os testes do PCR começam a reverter ao negativo, a menos que em casos severos. Uma advertência é que a positividade do PCR indica somente a presença de RNA viral e de vírus nao viável ou infeccioso. Este teste é aproximadamente 80% sensível mas específico de 100%.

Teste Serologic

É evidente que o teste SARS-CoV-2 é essencial para a retenção da transmissão viral, chamando para métodos de teste altamente exactos. Uma tal opção é serology, para detectar uma resposta imune e para ajudá-la assim a pegarar aqueles que são contaminadas entre contactos, identificam doadores convalescentes potenciais do plasma e avaliam a eficácia vacinal.

Os anticorpos Anti-SARS-CoV-2 indicam que a pessoa talvez desenvolveu a imunidade protectora dirigida contra a grande glicoproteína S do ponto, compor de dois domínios, S1 e S2. O primeiro contem o domínio receptor-obrigatório (RBD), que é limitado pela maioria do ligamento de neutralização dos anticorpos.

A proteína de S existe na natureza como um homotrimer, ligando à enzima deconversão 2 do receptor da pilha humana (ACE2). Subseqüentemente, a fusão da vírus-pilha é provocada, conduzindo à entrada do vírus na pilha de anfitrião.

Uns estudos mais adiantados indicam uns mais baixos titers de anticorpos específicos de IgG nos povos com a infecção assintomática ou suave mas os níveis elevados naquelas que recuperaram de COVID-19 severo.

Estabelecendo um ensaio da Alto-Produção

O estudo actual descreve os resultados de um método de teste novo usado em dez pacientes convalescentes PCR-positivos, em 4 indivíduos PCR-negativos, e em 332 controles do pre-COVID. Todas as amostras pacientes foram obtidas entre o dia 23 e o dia 89 da infecção. Dos controles, 26 eram saudáveis, quando 306 foram pensados para ter as baixas contagens de plaqueta, imunes na natureza ou devido ao uso da heparina.

Os investigador desenvolveram então um teste de ELISA para a proteína completo de S e de RBD. Estabeleceram as concentrações óptimas de RBD e de S para ser 2 µg/mL (figura 1A) e proteína de S em 5 µg/mL, em termos de caracterizar valores positivos e negativos. Similarmente, a diluição óptima do soro para uma interrupção entre o positivo e o negativo foram encontrados para ser 1/100.

ELISAs fortemente reactivo e reprodutível

As amostras convalescentes eram uniformemente fortemente reactivas a ambos os antígenos, mais contra o S completo do que o RBD. As amostras Pre-COVID-19 eram na maior parte não-reactivas. Encontraram que anti-s e anti-RBD IgM era menos específico e IgA para ambos os antígenos, o mais específico entre todos os anticorpos.

Igualmente asseguraram-se de que os resultados do ensaio fossem reprodutíveis repetindo o teste quatro ou mais vezes, com variabilidade mínima entre ensaios. Muitos métodos são usados para assegurar a segurança quando segurar vírus-contaminou amostras, tais como o tratamento térmico e o Triton X-100. Encontraram que esse tratamento térmico afectou a taxa da detecção para IgG e IgM. Isto podia ser devido à desnaturação e à agregação dos antígenos no aquecimento. IgM tem as estruturas da corrente pesada que fazem mais vulnerável à instabilidade térmica.

O tratamento com Triton X-100 não teve nenhum efeito significativo na reactividade da amostra nas amostras pacientes. Os titers do anticorpo nos titers pre-COVID-19 tornaram-se mais altamente após o tratamento por qualquer um destes métodos.

Inibição de IgG que liga a RBD

As amostras COVID-19 pacientes foram encontradas uniformemente para mostrar a inibição de anti-RBD emperramento por aproximadamente 80%, como era um controle que testou o positivo para anti-RBD IgG. A validação dos ensaios foi feita usando ensaios disponíveis no comércio.

Os pesquisadores dizem, “nós descrevem uma produção alta, método serological reprodutível, semiquantitativo para detectar anticorpos contra SARS-CoV-2.” O ensaio mede todos os três tipos do anticorpo que são reactivos a S e às proteínas virais de RBD.

De uns estudos mais adiantados, é aparente que todos os isotipos do anticorpo aumentam firmemente, com picos de IgA e de IgM em 1-3 semanas após a infecção, e subseqüentemente o IgG. A capacidade para medir todos os três isotipos, permite conseqüentemente um visualização mais largo da resposta imune com um risco mais baixo de resultados falso-negativos.

Além disso, o S completo e os antígenos de RBD foram usados no ensaio actual. A especificidade de tais testes depende de muitos factores, incluindo o tipo de teste e antígeno, assim como outros autoantibodies do anfitrião tais como o factor reumatóide e outros anticorpos heterophile.

Reactividade cruzada com o outro Coronaviruses

A reactividade cruzada com os antígenos de outros coronaviruses é igualmente um factor significativo que seja identificado em jogos disponíveis no comércio de ELISA SARS-CoV-2 e no ensaio actual. IgAs parece ser o o mais menos específico entre os anticorpos COVID-19. Assim, a razão para resultados da análise positivos em 19 controles pre-COVID-19 pode ser reactividade cruzada. Os pesquisadores dizem, “os controles pre-COVID-19 que tiveram o anti-RBD anticorpo não eram falso positivo por si mesmo porque o emperramento do anticorpo poderia ser inibido pelo excesso RBD.” Isto é mais provável ser devido aos anticorpos cruz-reactivos gerados a outros coronaviruses sazonais.

A especificidade é igualmente uma variável da população do controle selecionada. Os investigador encontraram aquele com o ELISA aperfeiçoado usado aqui, a especificidade era 94% ou baseado mais na classe e no antígeno selecionados do anticorpo. Estes resultados são igualmente de acordo com aqueles relatados usando dois ensaios comerciais com sensibilidade e especificidade de 100% e de 90%, respectivamente. Em alguns papéis mais adiantados, contudo, o último foi relatado para ter uma sensibilidade e uma especificidade significativamente mais baixas de 65% e de 74%, respectivamente.

Implicações

Uma vantagem da aproximação actual do teste de ELISA é que é rápida e directa, sem a necessidade para todos os instrumentos especializados. É capaz da adaptação aos laboratórios diagnósticos padrão e é altamente reprodutível entre ensaios diferentes quando os testes são repetidos.

Este ELISA sensível, específico, e reprodutível da alto-produção é provável ser útil em detectar taxas de infecção e as mudanças em respostas imunológicas ao vírus em estudos longitudinais. Pode igualmente complementar o teste viral do RNA para permitir que os pesquisadores pegarem infecções recentes e descrevam a resposta do anticorpo a SARS-CoV-2 mais exactamente. Poderia igualmente doadores do plasma da tela de ajuda e trabalhadores convalescentes dos cuidados médicos, para seleccionar aqueles pelo menos para arriscar para servir os pacientes COVID-19 de categorias diferentes. A duração da imunidade podia igualmente melhor ser compreendida por estudos serological longitudinais em indivíduos sintomáticos e assintomáticos.

Observação *Important

o medRxiv publica os relatórios científicos preliminares que par-não são revistos e, não devem conseqüentemente ser considerados como conclusivos, guia a prática clínica/comportamento saúde-relacionado, ou tratado como a informação estabelecida.

Journal reference:
Dr. Liji Thomas

Written by

Dr. Liji Thomas

Dr. Liji Thomas is an OB-GYN, who graduated from the Government Medical College, University of Calicut, Kerala, in 2001. Liji practiced as a full-time consultant in obstetrics/gynecology in a private hospital for a few years following her graduation. She has counseled hundreds of patients facing issues from pregnancy-related problems and infertility, and has been in charge of over 2,000 deliveries, striving always to achieve a normal delivery rather than operative.

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