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El nuevo análisis del anticuerpo para COVID-19 promete la detección sensible de la masa-escala

La probabilidad que no se desplome el pandémico COVID-19 en cualquier momento pronto ha chispeado la investigación intensiva sobre su detección y tratamiento, para prevenir la transmisión hacia delante. Un nuevo papel de los investigadores en las ciencias de la salud de la universidad y de Hamilton de McMaster, publicadas en el medRxiv* del servidor de la prueba preliminar en septiembre de 2020, denuncia sobre el revelado de un análisis serológico que sea conveniente para la prueba sensible del anticuerpo de la alto-producción para COVID-19.

Esta imagen del microscopio electrónico de la transmisión muestra SARS-CoV-2, el virus que causa COVID-19, aislado de un paciente en el virus de los E.E.U.U. que las partículas se muestran emerger de la superficie de las células cultivadas en el laboratorio. Los picos en el filo exterior de las partículas del virus dan a coronaviruses su nombre, corona-como. La imagen capturó y colorized en los laboratorios de la montaña rocosa de NIAID en Hamilton, Montana. Haber: NIAID
Esta imagen del microscopio electrónico de la transmisión muestra SARS-CoV-2, el virus que causa COVID-19, aislado de un paciente en el virus de los E.E.U.U. que las partículas se muestran emerger de la superficie de las células cultivadas en el laboratorio. Los picos en el filo exterior de las partículas del virus dan a coronaviruses su nombre, corona-como. La imagen capturó y colorized en los laboratorios de la montaña rocosa de NIAID (RML) en Hamilton, Montana. Haber: NIAID

Descubrir COVID-19 asintomático

Los síntomas COVID-19 aparecen generalmente 2-14 días después de ser expuesto al coronavirus 2 (SARS-CoV-2) de la neumonía asiática, pero infectan a mucha gente asintomáticamente - de hecho, los hasta 80% de casos no visualizan síntomas. Puesto que tales casos median la extensión viral por la mitad de todas las infecciones sabidas, la prueba serológica llega a ser vital tomar índices de infección reales.

La prueba diagnóstica usada en COVID-19 es una reacción en cadena reversa en tiempo real de la transcripción-polimerasa (polimerización en cadena del RT) en la cual el genoma viral del ARN se amplifica para permitir la detección. Este ácido nucléico viral se obtiene típicamente de los lampazos nasales o del paso. Las ocasiones de conseguir un resultado positivo exacto de tales lampazos son las más altas de cuatro días antes de que los síntomas comienzan generalmente. De hecho, a partir del primer día de síntomas, la detección del ARN es posible, enarbolando en la primera semana de la infección. Sin embargo, por la semana 3, las pruebas de la polimerización en cadena comienzan a invertir a la negativa, a menos que en casos graves. Una advertencia es que la positividad de la polimerización en cadena indica solamente la presencia de ARN viral y de virus no viable o contagioso. Esta prueba es el cerca de 80% sensible pero específico del 100%.

Prueba serológica

Es evidente que la prueba SARS-CoV-2 es esencial para la contención de la transmisión viral, pidiendo métodos de pruebas altamente exactos. Una tal opción es serología, descubrir una inmunorespuesta y ayudar así a tomar a los que se infecten entre contactos, determinen a donantes convalecientes potenciales del plasma y evalúen eficacia vaccínea.

Los anticuerpos Anti-SARS-CoV-2 indican que la persona quizás ha desarrollado la inmunidad protectora dirigida contra la glicoproteína grande S del pico, integrada por dos dominios, S1 y S2. El primer contiene el dominio receptor-obligatorio (RBD), que es limitado por la mayoría de lazo de neutralización de los anticuerpos.

La proteína de S existe en naturaleza como homotrimer, atando a la enzima angiotensina-que convierte 2 (ACE2) del receptor de la célula humana. Posteriormente, la fusión de la virus-célula se acciona, llevando al asiento del virus en la célula huesped.

Estudios anteriores indican títulos más inferiores de los anticuerpos específicos de IgG en gente con la infección asintomática o suave pero niveles en los que se han recuperado de COVID-19 severo.

Establecimiento de un análisis de la Alto-Producción

El estudio actual describe los resultados de un nuevo método de pruebas usado en diez pacientes convalecientes Polimerización en cadena-positivos, 4 individuos Polimerización en cadena-negativos, y 332 mandos del pre-COVID. Todas las muestras pacientes fueron obtenidas entre el día 23 y el día 89 de infección. De los mandos, 26 eran sanos, mientras que 306 fueron pensados para tener cuentas de plaqueta inferiores, inmunes en naturaleza o debido al uso de la heparina.

Los investigadores entonces desarrollaron una prueba de ELISA para la proteína integral de S y de RBD. Establecieron las concentraciones óptimas de RBD y de S para ser 2 µg/mL (figura 1A) y proteína de S en 5 µg/mL, en términos de caracterizar valores positivos y negativos. Semejantemente, la dilución óptima del suero para un atajo entre el positivo y la negativa fueron encontradas para ser 1/100.

ELISAs fuertemente reactivo y reproductivo

Las muestras convalecientes eran uniformemente fuertemente reactivas a ambos antígenos, más contra el S integral que el RBD. Las muestras Pre-COVID-19 eran sobre todo no-reactivas. Encontraron que IgM anti-s y anti-RBD era menos específico e IgA para ambos antígenos, el más específico entre todos los anticuerpos.

También se aseguraron que los resultados del análisis fueran reproductivos relanzando la prueba cuatro o más veces, con variabilidad mínima entre los análisis. Muchos métodos se utilizan para asegurar seguro mientras que el manejo virus-contaminó muestras, tales como tratamiento térmico y Tritón X-100. Encontraron que ese tratamiento térmico afectó al régimen de la detección para IgG e IgM. Esto podía ser debido a la desnaturalización y a la agregación de los antígenos en la calefacción. IgM tiene estructuras de la cadena pesada que hagan más vulnerable a la inestabilidad térmica.

El tratamiento con Tritón X-100 no tenía ningún efecto importante sobre reactividad de la muestra en las muestras pacientes. Los títulos del anticuerpo en los títulos pre-COVID-19 se convirtieron más arriba después del tratamiento por cualquiera de estos métodos.

Inhibición de IgG que ata a RBD

Las muestras pacientes COVID-19 fueron encontradas uniformemente para mostrar la inhibición del atascamiento anti-RBD por el cerca de 80%, al igual que un mando que probó el positivo para IgG anti-RBD. La validación de los análisis fue hecha usando análisis disponibles en el comercio.

Los investigadores dicen, “nosotros describen una alta producción, método serológico reproductivo, semiquantitativo para descubrir los anticuerpos contra SARS-CoV-2.” El análisis mide los tres tipos del anticuerpo que son reactivos a S y a las proteínas virales de RBD.

De estudios anteriores, es evidente que todos los isotipos del anticuerpo aumentan constantemente, con los picos de IgA y de IgM en 1-3 semanas después de la infección, y posteriormente IgG. La capacidad de medir los tres isotipos, por lo tanto, permite una visualización más amplia de la inmunorespuesta con un más poco arriesgado de los resultados del falso negativo.

Por otra parte, el S integral y los antígenos de RBD fueron utilizados en el análisis actual. La especificidad de tales pruebas depende de muchos factores, incluyendo el tipo de prueba y antígeno, así como otros autoanticuerpos del ordenador principal tales como factor reumatoide y otros anticuerpos heterophile.

Reactividad cruzada con el otro Coronaviruses

La reactividad cruzada con los antígenos de otros coronaviruses es también un factor importante que se ha determinado en estuches disponibles en el comercio de ELISA SARS-CoV-2 y en el análisis actual. IgAs aparece ser el lo más menos posible específico entre los anticuerpos COVID-19. Así, la razón de resultados de la prueba positivos en 19 mandos pre-COVID-19 puede ser reactividad cruzada. Los investigadores dicen, “los mandos pre-COVID-19 que tenían anticuerpo anti-RBD no eran positivo falso por sí mismo porque el atascamiento del anticuerpo se podría inhibir por el exceso RBD.” Esto es más probable ser debido a los anticuerpos cruz-reactivos generados a otros coronaviruses estacionales.

La especificidad es también una variable de la población del mando seleccionada. Los investigadores encontraron eso con el ELISA optimizado usado aquí, la especificidad era el 94% o basado más en la clase y el antígeno seleccionados del anticuerpo. Estos resultados están también de acuerdo con ésos denunciados usando dos análisis comerciales con sensibilidad y la especificidad de 100% y el 90%, respectivamente. En algunos papeles anteriores, sin embargo, este último se ha denunciado para tener una sensibilidad y especificidad importante más inferiores del 65% y el 74%, respectivamente.

Implicaciones

Una ventaja de la aproximación actual de la prueba de ELISA es que es rápida y directa, sin la necesidad de cualquier instrumento especializado. Es capaz de la adaptación a los laboratorios diagnósticos estándar y es altamente reproductiva entre diversos análisis cuando se relanzan las pruebas.

Este ELISA sensible, específico, y reproductivo de la alto-producción es probable ser útil en descubrir índices de infección y los cambios en reacciones inmunológicas al virus en estudios longitudinales. Puede también complementar la prueba viral del ARN para permitir que los investigadores tomen infecciones recientes y que describan la reacción del anticuerpo a SARS-CoV-2 más exacto. Podría también los donantes del plasma de la pantalla de ayuda y los trabajadores convalecientes de la atención sanitaria, para seleccionar ésos por lo menos para arriesgar para servir a los pacientes COVID-19 de diversas categorías. La duración de la inmunidad se podía también entender mejor por estudios serológicos longitudinales en individuos sintomáticos y asintomáticos.

Advertencia *Important

el medRxiv publica los partes científicos preliminares que par-no se revisan y, por lo tanto, no se deben mirar como concluyentes, conduce práctica clínica/comportamiento relativo a la salud, o tratado como información establecida.

Journal reference:
Dr. Liji Thomas

Written by

Dr. Liji Thomas

Dr. Liji Thomas is an OB-GYN, who graduated from the Government Medical College, University of Calicut, Kerala, in 2001. Liji practiced as a full-time consultant in obstetrics/gynecology in a private hospital for a few years following her graduation. She has counseled hundreds of patients facing issues from pregnancy-related problems and infertility, and has been in charge of over 2,000 deliveries, striving always to achieve a normal delivery rather than operative.

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