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Rapida, prova a basso costo per il video potenziale dell'universale COVID-19

Un gruppo internazionale dei ricercatori ha presentato una prova conveniente e a basso costo di sierologia individuare gli anticorpi contro il coronavirus 2 (SARS-CoV-2) di sindrome respiratorio acuto severo che potrebbe potenzialmente essere messo a disposizione universalmente.  

SARS-CoV-2 è l'agente responsabile della pandemia corrente di malattia 2019 di coronavirus (COVID-19) che continua a minacciare la salute pubblica globale e l'economia.

Alain Townsend (università di Oxford) e colleghi riferisce che la prova di emagglutinazione (CAPPELLO) individua gli anticorpi contro il dominio dell'ricevitore-associazione (RBD) della proteina della punta SARS-CoV-2 con una sensibilità di 90% e una specificità di 99%.

Il RBD è un sottodominio trovato al suggerimento della proteina della punta - la struttura che principale il virus usa per legare a ed entrare nelle cellule ospiti umane.

Il CAPPELLO può individuare bene i titoli aumentanti degli anticorpi RBD-specifici entro i primi cinque giorni dell'infezione, componenti con una prova commerciale stabilita e può applicarsi in prova (POC) di punto-de-cura.

Questa prova versatile e redditizia non richiede le attrezzature dello specialista o gli impianti centralizzati del laboratorio e potrebbe essere messa a disposizione dei paesi bassi e con reddito medio.

Ancora, la prova può essere liofilizzata per facilità di trasporto, dice Townsend ed i colleghi, che ora hanno produzione ingrandita in scala di questo reagente ad un grammo - abbastanza per fornire bene dieci milione prove, ad un costo di circa 0,27 penny del Regno Unito per prova.

“Le aliquote di questo reagente sono pronte ad essere fornito ai gruppi qualificati dovunque nel mondo che devono individuare gli anticorpi a SARS-CoV-2, ma non hanno gli impianti per le prove commerciali di alto-capacità di lavorazione,„ scrive il gruppo.

Una versione della pubblicazione preliminare del documento è disponibile nel medRxiv* del " server ", mentre l'articolo subisce la revisione tra pari.

Prova di emagglutinazione (CAPPELLO) per rilevazione degli anticorpi al dominio obbligatorio del ricevitore SARS-CoV-2. A) Concetto della sequenza del CAPPELLO B) di VHH (IH4) - proteina di fusione di RBD. I residui sottolineati sono codificati clonando i siti AgeI (TG) e SalI. La sequenza del cDNA ottimizzata codone è indicata in gel di VHH depurativo (IH4) - proteine di informazioni supplementari C) SDS-PAGE di RBD. Tre microgrammi di proteina sono stati fatti funzionare su Banca dei Regolamenti Internazionali-Tris del perno di zavorra 4-12% negli ambienti riducente. 1: IH4-RBD ha prodotto in casa in celle di Expi293F, 2: IH4-RBD ha prodotto dall
Prova di emagglutinazione (CAPPELLO) per rilevazione degli anticorpi al dominio obbligatorio del ricevitore SARS-CoV-2. A) Concetto della sequenza del CAPPELLO B) di VHH (IH4) - proteina di fusione di RBD. I residui sottolineati sono codificati clonando i siti AgeI (TG) e SalI (AST). La sequenza del cDNA ottimizzata codone è indicata in gel di VHH depurativo (IH4) - proteine di informazioni supplementari C) SDS-PAGE di RBD. Tre microgrammi di proteina sono stati fatti funzionare su Banca dei Regolamenti Internazionali-Tris del perno di zavorra 4-12% negli ambienti riducente. 1: IH4-RBD ha prodotto in casa in celle di Expi293F, 2: IH4-RBD ha prodotto dall'anticorpo assoluto, Oxford in celle HEK293.

Le prove accessibili di sierologia sono necessarie urgentemente

Da quando i primi casi di SARS-CoV-2 sono stati identificati a Wuhan, Cina, tardi l'anno scorso, il virus si è sparso ad una tariffa senza precedenti ed ha avuto un effetto devastatore sulla salute pubblica globale e sull'economia mondiale.

“L'aspetto di così nuovo virus altamente contagioso probabilmente non sarà un avvenimento unico nelle decadi avanti,„ ha detto Townsend ed i colleghi. “Una delle lezioni istruite è l'importanza di sviluppare i test sierologici accessibili per la rilevazione delle risposte immunitarie a SARS-CoV-2.„

Tali prove sono cruciali per la determinazione delle tariffe di sieroconversione in popolazioni, individuando la sieroconversione dopo la vaccinazione e per la valutazione se i livelli dell'anticorpo possono essere protettivi contro COVID-19.

Parecchie prove commerciali ad alto rendimento dell'anticorpo sono state descritte, ma non sono a disposizione ampiamente - dei paesi bassi e con reddito medio, poiché richiedono gli impianti centralizzati costosi del laboratorio.

Prove di agglutinazione delle cellule rosse, comprendendo il legame di una molecola del reporter alla superficie delle celle rosse, che una cronologia lunga e distinta nel digitare di sangue e un'ampia varietà di applicazioni di sierologia. Sono economiche e la loro applicazione non richiede la tecnologia dello specialista.

Ancora, “nell'era recente, il legame di un antigene alla superficie delle cellule rosse è diventato più facile con la possibilità della fusione della sequenza dell'antigene della proteina con quello di singolo anticorpo del dominio o specifico nanobody per una molecola sulla superficie delle cellule rosse,„ dice il gruppo.

Che cosa i ricercatori hanno fatto?

I ricercatori hanno applicato questo concetto per fornire una prova conveniente del CAPPELLO per la rilevazione degli anticorpi RBD-specifici della punta SARS-CoV-2.

Per collegare la punta RBD ai globuli rossi, i ricercatori hanno usato il IH4 nanobody, che è specifico per un epitopo conservato sul glycophorin A. della proteina del transmembrane.

Il gruppo riferisce che in una valutazione convenzionale della sensibilità e della specificità, il CAPPELLO ha dimostrato una sensibilità di 90% e una specificità di 99% per la rilevazione degli anticorpi dopo una diagnosi PCR-confermata dell'infezione SARS-CoV-2.

Il CAPPELLO ha correlato bene con la prova disponibile nel commercio di chemiluminescenza di Siemens Atellica che individua gli anticorpi RBD-specifici della punta.

Interessante, dice il gruppo, la prestazione leggermente superiore dimostrata le titolazioni del CAPPELLO sopra la prova di Siemens quando si è applicato ai campioni memorizzati del plasma prelevati dai donatori entro i primi cinque giorni del loro ricovero ospedaliero.

In questo scenario, il CAPPELLO ha individuato gli anticorpi in 86% dei campioni dai donatori PCR-diagnosticati, mentre la prova di Siemens ha individuato 74%.  Il CAPPELLO egualmente ha dimostrato la specificità 100% una volta applicato ai campioni del plasma di controllo prelevati dai pazienti in buona salute o da quelli con sepsi.

“Nelle situazioni di alto sospetto clinico, il CAPPELLO ha potuto potenzialmente avere un posto come prova utile per supportare la diagnosi di COVID-19 individuando un titolo aumentante degli anticorpi al RBD durante il ricovero ospedaliero,„ scrive i ricercatori.

Il CAPPELLO potrebbe anche essere utile per la rilevazione della sieroconversione dopo la vaccinazione e per l'identificazione dei donatori convalescenti potenziali con l'alto plasma di titolo che potrebbe potenzialmente essere usato come trattamento.  

Abbastanza reagente per 10 milione prove è disponibile al mondo

Il gruppo egualmente dice che reagente liofilizzato di IH4-RBF che è stato inviato a Nuova Delhi ha eseguito bene in prova di POC dei campioni della barretta-puntura. Tuttavia, ulteriore prova è necessaria confermare che la sensibilità e la specificità sono comparabili a quelle vedute con le prove dei campioni memorizzati del plasma.

“Questo dovrà essere fatto nell'ambiente operativo, che pianificazione,„ scrive Townsend ed i colleghi.

Per concludere, il gruppo dice: “Abbiamo prodotto un grammo del reagente di sviluppo di IH4-507 RBD (abbastanza per dieci milione pozzi della prova) ed offriamo alle aliquote liofilizzate nave di questo materiale (sufficiente per 10.000 prove) dovunque nel mondo, gratis, per uso come reagente della ricerca per gli studi sierologici di COVID-19.„

Avviso *Important

il medRxiv pubblica i rapporti scientifici preliminari che pari-non sono esaminati e, pertanto, non dovrebbero essere considerati conclusivi, guida la pratica clinica/comportamento correlato con la salute, o trattato come informazioni stabilite.

Journal reference:
Sally Robertson

Written by

Sally Robertson

Sally first developed an interest in medical communications when she took on the role of Journal Development Editor for BioMed Central (BMC), after having graduated with a degree in biomedical science from Greenwich University.

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