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Teste rápido, barato para a monitoração potencial do universal COVID-19

Uma equipe internacional dos pesquisadores apresentou um teste conveniente, barato do serology detectar anticorpos contra o coronavirus 2 da Síndrome Respiratória Aguda Grave (SARS-CoV-2) que poderia potencial ser feito disponível universal.  

SARS-CoV-2 é o agente responsável para a pandemia actual da doença 2019 do coronavirus (COVID-19) que continua a ameaçar a saúde pública global e a economia.

Alain Townsend (universidade de Oxford) e colegas relata que o teste de Hemagglutination (CHAPÉU) detecta anticorpos contra o domínio receptor-obrigatório (RBD) da proteína do ponto SARS-CoV-2 com uma sensibilidade de 90% e especificidade de 99%.

O RBD é um subdomínio encontrado na ponta da proteína do ponto - a estrutura que principal o vírus se usa para ligar a e incorporar pilhas de anfitrião humanas.

O CHAPÉU pode detectar titers de aumentação de anticorpos RBD-específicos dentro dos primeiros cinco dias da infecção, correlações bem com um teste comercial estabelecido, e pode ser aplicado no teste (POC) do ponto--cuidado.

Este teste versátil, eficaz na redução de custos não exige o equipamento do especialista ou facilidades centralizadas do laboratório e poderia ser feito disponível aos baixos e países de rendimento médio.

Além disso, o teste pode ser liofilizado para a facilidade do transporte, diz Townsend e colegas, que têm agora a produção reforçada deste reagente a um relvado - bastante para fornecer bem dez milhão testes, a custo de ao redor 0,27 moedas de um centavo BRITÂNICAS pelo teste.

As “partes alíquota deste reagente estão prontas para ser fornecido aos grupos qualificados em qualquer lugar no mundo que precisam de detectar anticorpos a SARS-CoV-2, mas não têm as facilidades para testes comerciais da alto-produção,” escrevem a equipe.

Uma versão da pré-impressão do papel está disponível no medRxiv* do server, quando o artigo se submeter à revisão paritária.

Teste de Haemagglutination (CHAPÉU) para a detecção de anticorpos a domínio obrigatório do receptor SARS-CoV-2. A) Conceito da seqüência do CHAPÉU B) de VHH (IH4) - proteína da fusão de RBD. Os resíduos sublinhados são codificados clonando locais AgeI (TG) e SalI. A seqüência aperfeiçoada codon do cDNA é mostrada no gel de VHH refinado (IH4) - proteínas da informação suplementar C) SDS-PAGE de RBD. Três microgramas da proteína foram executados no Bis-Tris do parafuso 4-12% sob a diminuição de circunstâncias. 1: IH4-RBD produziu na casa nas pilhas de Expi293F, 2: IH4-RBD produziu pelo anticorpo absoluto, Oxford nas pilhas HEK293.
Teste de Haemagglutination (CHAPÉU) para a detecção de anticorpos a domínio obrigatório do receptor SARS-CoV-2. A) Conceito da seqüência do CHAPÉU B) de VHH (IH4) - proteína da fusão de RBD. Os resíduos sublinhados são codificados clonando locais AgeI (TG) e SalI (AST). A seqüência aperfeiçoada codon do cDNA é mostrada no gel de VHH refinado (IH4) - proteínas da informação suplementar C) SDS-PAGE de RBD. Três microgramas da proteína foram executados no Bis-Tris do parafuso 4-12% sob a diminuição de circunstâncias. 1: IH4-RBD produziu na casa nas pilhas de Expi293F, 2: IH4-RBD produziu pelo anticorpo absoluto, Oxford nas pilhas HEK293.

Os testes disponíveis do serology são urgente necessários

Desde que os primeiros exemplos de SARS-CoV-2 foram identificados em Wuhan, China, tarde no ano passado, o vírus espalhou em uma taxa inaudita e teve um efeito devastador na saúde pública global e na economia mundial.

“A aparência de um vírus altamente contagioso tão novo provavelmente não será uma ocorrência original nas décadas adiante,” disse Townsend e colegas. “Uma das lições instruídas é a importância de desenvolver testes serological disponíveis para a detecção de respostas imunes a SARS-CoV-2.”

Tais testes são cruciais para determinar taxas do seroconversion nas populações, detectando o seroconversion depois da vacinação, e para avaliar se os níveis do anticorpo podem ser protectores contra COVID-19.

Diversos testes comerciais de capacidade elevada do anticorpo foram descritos, mas não são amplamente disponíveis aos baixos e países de rendimento médio, desde que exigem facilidades centralizadas caras do laboratório.

Testes de aglutinação da pilha vermelha, que envolvendo o enlace de uma molécula do repórter à superfície de pilhas vermelhas, tenha uma história longa e distinta na dactilografia de sangue e uma grande variedade de aplicações do serology. São baratos, e sua aplicação não exige a tecnologia do especialista.

Além disso, “na era recente, o enlace de um antígeno à superfície da pilha vermelha tornou-se mais fácil com a possibilidade de fundir uma seqüência do antígeno da proteína com aquele de um único anticorpo do domínio ou específico nanobody para uma molécula na superfície da pilha vermelha,” diz a equipe.

Que os pesquisadores fizeram?

Os pesquisadores aplicaram este conceito para fornecer um teste conveniente do CHAPÉU para a detecção de anticorpos RBD-específicos do ponto SARS-CoV-2.

A fim ligar o ponto RBD aos glóbulos vermelhos, os pesquisadores usaram o IH4 nanobody, que é específico para um resumo conservado no glycophorin A. da proteína da transmembrana.

A equipe relata que em uma avaliação formal da sensibilidade e da especificidade, o CHAPÉU demonstrou uma sensibilidade de 90% e uma especificidade de 99% para a detecção de anticorpos depois de um diagnóstico PCR-confirmado da infecção SARS-CoV-2.

O CHAPÉU correlacionou bem com o teste disponível no comércio da quimioluminescência de Siemens Atellica que detecta anticorpos RBD-específicos do ponto.

Interessante, diz a equipe, o desempenho ligeira superior demonstrado titulações do CHAPÉU sobre o teste de Siemens quando foi aplicada às amostras armazenadas do plasma tomadas dos doadores dentro dos primeiros cinco dias de sua admissão de hospital.

Nesta encenação, o CHAPÉU detectou anticorpos em 86% das amostras dos doadores PCR-diagnosticados, quando o teste de Siemens detectou 74%.  O CHAPÉU igualmente demonstrou a especificidade 100% quando aplicado às amostras do plasma do controle tomadas dos pacientes saudáveis ou daqueles com sepsia.

“Nas situações da suspeita clínica alta, o CHAPÉU podia potencial ter um lugar como um teste útil para apoiar o diagnóstico de COVID-19 detectando um titer de aumentação dos anticorpos ao RBD durante a admissão de hospital,” escreve os pesquisadores.

O CHAPÉU pôde igualmente ser útil para detectar o seroconversion depois da vacinação e para a identificação de doadores convalescentes potenciais com plasma alto do titer que poderia potencial ser usado como um tratamento.  

Bastante reagente para 10 milhão testes está disponível ao mundo

A equipe igualmente diz que o reagente liofilizado de IH4-RBF que foi enviado a Nova Deli executou bem no teste do POC de amostras da dedo-picada. Contudo, uma evidência mais adicional é necessário confirmar que a sensibilidade e a especificidade são comparáveis àquelas consideradas com os testes de amostras armazenadas do plasma.

“Isto deverá ser feito em condições de campo, que é planeado,” escreve Townsend e colegas.

Finalmente, a equipe diz: “Nós produzimos um relvado do reagente tornando-se de IH4-507 RBD (bastante para dez milhão poços do teste) e oferecemo-lo às partes alíquota liofilizadas navio deste material (suficiente para 10.000 testes) em qualquer lugar no mundo, gratuitamente, para o uso como um reagente da pesquisa para estudos serological de COVID-19.”

Observação *Important

o medRxiv publica os relatórios científicos preliminares que par-não são revistos e, não devem conseqüentemente ser considerados como conclusivos, guia a prática clínica/comportamento saúde-relacionado, ou tratado como a informação estabelecida.

Journal reference:
Sally Robertson

Written by

Sally Robertson

Sally first developed an interest in medical communications when she took on the role of Journal Development Editor for BioMed Central (BMC), after having graduated with a degree in biomedical science from Greenwich University.

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