Ethacridine obstrui SARS-CoV-2 com um modo distinto de acção

By Susha Cheriyedath, M.Sc.Nov 1 2020

A doença 2019 de Coronavirus (COVID-19) é causada pelo coronavirus 2 da Síndrome Respiratória Aguda Grave (‐ 2) de CoV do ‐ do SARS, uma peça nova do vírus do RNA da família do betacoronavirus. Emergindo em Wuhan, em China, ao fim de 2019, do ‐ do SARS em ‐ 2 de CoV espalhados através do globo, progredindo em uma pandemia desenvolvida que causa a morbosidade e a mortalidade do cant do fi do signi em 190 países e territórios.

Os sintomas da infecção do ‐ 2 de CoV do ‐ do SARS incluem a tosse seca, a febre, e sintomas gastrintestinais na maioria de pacientes, quando alguns experimentarem uma perda provisória de cheiro e de gosto. Os pacientes com infecção SARS-CoV-2 severa podem experimentar a aflição respiratória aguda, o incómodo miocárdico, o curso, e dano multiorgan durante os estados finais.

Actualmente, o FDA aprovou o remdesivir, um inibidor da réplica SARS-CoV-2, para tratar COVID-19, embora o WHO relatasse recentemente que oferece pouco efeito protector contra COVID-19.

Uma droga segura e poderoso que iniba SARS-CoV-2 mesmo em concentrações muito baixas

Agora, os pesquisadores da Universidade da California, San Francisco, e a Universidade de Stanford, Califórnia, EUA, relataram que um cofre forte e um anti-séptico poderoso para o uso nos seres humanos nomearam o ethacridine, que inibe eficazmente SARS-CoV-2 mesmo em concentrações muito baixas EC50 de µM do ~ 0,08. Seu trabalho tem é publicado no bioRxiv* do server da pré-impressão.

Ethacridine foi identificado pela selecção da alto-produção de uma biblioteca aprovado pelo FDA da droga em pilhas vivas com a ajuda de um ensaio fluorescente. A fim identificar as drogas que inibem o vírus SARS-CoV-2, os pesquisadores remodelaram a proteína fluorescente verde (GFP) em um repórter da actividade de Mpro que gira fluorescente na segmentação pelo Mpro activo. Usando este ensaio fluorescente, identificaram muitas drogas que inibem a actividade de Mpro, e o mais eficaz delas era o ethacridine, que inibe a produção de SARS-CoV-2 com a inactivação das partículas virais.

Projecto e demonstração de um repórter GFP-baseado da actividade SARS-CoV2 do protease principal Mpro. (a) Diagrama esquemático do repórter. (b) Seqüência do GFP10-11 lançado. (c) Construção do repórter FlipGFPMpro. (d) Imagens da fluorescência (deixadas) e análise quantitativa (direita) de SARS-CoV-2 ou de pilhas zombaria-contaminadas de HEK293T esse hACE2 co-expressado. As imagens no canal de FlipGFP eram a dobra 30 iluminada comparada àquelas em (e). (e) Imagens da fluorescência das pilhas de HEK293T que expressam FlipGFPMpro e mCherry, junto com o mutante inactivo C145A de Mpro (painéis superiores) ou o tipo selvagem Mpro (mais baixos painéis). (f) Fluorescência normalizada de FlipGFP por mCherry. A relação de FlipGFP/mCherry para o Mpro/C145A é normalizada a 1. dados é o ± médio SD (n = 5). FlipGFPTEV é um repórter da actividade de TEV que contem a seqüência da segmentação de TEV em FlipGFP. Barra da escala: 5 μm (d); 10 μm (f).

Ethacridine obstrui SARS-CoV-2 em linha celular humanas e não é citotóxico nos modelos animais

Os resultados do estudo mostram uma aproximação nova contra SARS-CoV-2 que neutraliza partículas virais, e a eficácia desta aproximação é esperada ser independente do tipo da pilha. Ethacridine foi mostrado para obstruir SARS-CoV-2 em pilhas humanas da linha celular A549ACE2 e em pilhas preliminares de HNE. Além disso, não era tóxico nos modelos animais, incluindo ratos, ratos, e coelhos.

De acordo com os autores, o ethacridine tem uma potência antivirosa mais forte comparada ao remdesivir e igualmente tem a toxicidade muito pequena da pilha. Outras drogas identificadas por este estudo mostram uma escala IC50 similar em inibir Mpro e EC50 contra o vírus SARS-CoV-2. Contudo, o ethacridine mostrou uma potência antivirosa muito mais alta EC50 do μM do ~ 0,08 do que a actividade deinibição (IC50 μM do ~ 3,5). Isto mostra que a acção principal dos ethacridine não está inibindo Mpro.

“Nossos resultados revelam uma aproximação nova contra SARS-CoV-2 através de neutralizar partículas virais, de que a eficácia é esperada ser pilha tipo-independente.”

Ethacridine neutraliza partículas virais sem afetar a réplica do vírus

Os autores reivindicam que seu trabalho identificou uma droga poderosa com um modo claro de acção contra o vírus SARS-CoV-2 enquanto o ethacridine neutraliza partículas virais e as impede assim ligar às pilhas de anfitrião. O trabalho igualmente fornece a evidência directa das partículas SARS-CoV-2 que perdem suas infectividade e capacidade ligar pilhas de anfitrião após o tratamento do ethacridine. Também, o ethacridine das mostras dos dados qRT-PCR não impacta a réplica viral do RNA. Assim, os resultados sugerem que o ethacridine obstrua o vírus SARS-CoV-2 principalmente neutralizando as partículas virais sem afetar a réplica do vírus. A posterior investigação centrada sobre mudanças ultrastructural em partículas virais e em ethacridine que ligam no RNA viral ou na proteína é necessário compreender como o ethacridine neutraliza o vírus.

“Os mecanismos detalhados de como o ethacridine neutraliza as partículas virais exigirão a posterior investigação, tal como mudanças ultrastructural potenciais de partículas virais e emperramento do ethacridine ao RNA viral ou à proteína.”

Actualmente, o ethacridine é usado como um desinfectante tópico, mas tem sido usado já para tratar pacientes com a sepsia puerperal através da injecção intravenosa. Assim, seu efeito antiviroso pode facilmente ser validado nos modelos assim como nos pacientes COVID-19 animais. Também, desde que neutraliza directamente partículas do vírus SARS-CoV-2, o ethacridine pode ser combinado com as drogas tais como o remdesivir, o inibidor do replicase, para tratar os pacientes COVID-19 e para melhorar seu resultado clínico.

“Quando o ethacridine for usado actualmente principalmente como um desinfectante esbaforido tópico, estêve aplicado aos pacientes para tratar a sepsia puerperal através da injecção intravenosa.”

Observação *Important

o bioRxiv publica os relatórios científicos preliminares que par-não são revistos e, não devem conseqüentemente ser considerados como conclusivos, guia a prática clínica/comportamento saúde-relacionado, ou tratado como a informação estabelecida.