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O método iscan das mostras do estudo podia ser eficaz para o teste COVID-19 rápido

Um jogo simples do teste COVID-19 combina a amplificação do vírus com um sistema de CRISPR-CAS para a detecção SARS-CoV-2 eficaz. O jogo, chamado iSCAN, usa os reagentes que podem ser localmente manufacturados.

Nosso procedimento inteiro do iSCAN pode ser terminado em menos do que uma hora e pode facilmente ser adotado como um sistema de detecção do ponto--cuidado em aeroportos e em beiras.”

Ahmed Mahas, aluno de doutoramento, rei Abdullah Universidade da ciência & da tecnologia

A bandeira de ouro actual no teste SARS-CoV-2 é o teste do PCR, em que as primeiras demão do ADN reconhecem as seqüências específicas do RNA no genoma viral que são copiadas então usando uma enzima específica.

Este processo da “amplificação” facilita detectar originalmente as pequenas quantidades de RNA viral actuais nos cotonetes nasopharyngeal tomados dos pacientes.

Este teste pode confiantemente detectar se uma pessoa tem realmente o vírus sem fornecer falso positivo ou resultados negativos demais. Mas precisa pessoais altamente qualificados de conduzir o teste, que é feito em etapas múltiplas em laboratórios centrais com equipamento sofisticado.

o iSCAN, desenvolvido por uma equipe conduzida pelo bioengineer Magdy Mahfouz de KAUST supera muitas das desvantagens do teste do PCR ao fornecer resultados relativamente de confiança.

Significativamente, os reagentes do teste eram manufacturados em KAUST. Isto inclui as enzimas necessários para a amplificação e uma outra enzima que detecte especificamente seqüências virais dentro do material copiado. A disponibilidade dos reagentes e do equipamento foi um obstáculo enorme desde o início da pandemia COVID-19.

Para usar o iSCAN, os índices da amostra de um paciente, recolhida com um cotonete nasopharyngeal, são colocados em um tubo de ensaio pequeno que contem as primeiras demão e as enzimas do ADN que podem amplificar o material SARS-CoV-2 genético. Os índices são incubados em uma temperatura de 62 graus Célsio para meias horas. Este processo é referido como RT-LAMP.

Uma vez que bastante RNA viral é amplificado, uma gota que contem a enzima Cas12 está adicionada à mistura e saiu por outros 15 minutos. Esta enzima reconhece somente o RNA viral que pertence a SARS-CoV-2, superando uma edição com RT-LAMP, onde a amplificação e a contaminação colateral falsas podem ser um problema.

Finalmente, um de dois métodos pode ser usado para visualizar o resultado. Um envolve a luz ultravioleta de brilho na amostra, com um detector que analisa a luz que sai dele relatar a quantidade de RNA viral.

A outra aproximação envolve introduzir tiras especialmente projetadas nas câmaras de ar, similares àquelas usadas em testes de gravidez. Ambas as aproximações trabalham bem, embora o método da luz ultravioleta forneça uns resultados mais exactos.

Os cientistas testaram seu jogo no RNA viral sintetizado e em amostras pacientes reais. “Nós somos agora de melhoramento e simplificando nosso sistema para usuários a fim comercializar nosso jogo da detecção do iSCAN,” diz o cientista Zahir Ali da pesquisa de KAUST.

Source:
Journal reference:

Ali, Z., et al. (2020) iSCAN: An RT-LAMP-coupled CRISPR-Cas12 module for rapid, sensitive detection of SARS-CoV-2. Virus Research. doi.org/10.1016/j.virusres.2020.198129.