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El mejor del ARN SARS-CoV-2 preservado en aguas residuales bajo congelación condiciona

La vigilancia de las aguas residuales se ha denunciado para ser una posible y un modo eficaz vigilar la incidencia del coronavirus 2 (SARS-CoV-2) de la neumonía asiática en el pandémico actual COVID-19. Un estudio reciente drena la atención a la necesidad de congelar muestras de las aguas residuales si el análisis se realiza más adelante bastante que inmediatamente.

El análisis de las aguas residuales es no sólo una herramienta que vigila útil para que la incidencia actual pero las ayudas prediga los brotes futuros temprano por un aumento amonestador en las cuentas de las aguas residuales del virus. Tal análisis también ha llevado al trazado del virus a su primera aparición en muchas de las ciudades del mundo. De hecho, muchos partes han trazado ya SARS-CoV-2 en muchas situaciones por todo el mundo antes de los primeros partes de Wuhan, China.

Esto está llevando a las tentativas intensivas de determinar la situación en donde el virus hizo su primera aparición. Actualmente, las muestras salvadas se pueden analizar como recursos de la prueba de las aguas residuales están llegando a ser más fácilmente disponibles. Sin embargo, onda en curso del pandémico la segunda puede necesitar otras restricciones, que podrían demorar otra vez análisis de la muestra.

El impacto de las condiciones de almacenamiento en los resultados de la prueba es un parámetro importante que las ayudas determinan la confiabilidad de pruebas. A partir de ahora, la información directa sobre la persistencia del virus en muestras salvadas de las aguas residuales está disponible solamente para las temperaturas entre 4°C y los estudios 37°C. en otros coronaviruses han agregado la información relacionada.

El estudio actual, publicado en el medRxiv* del servidor de la prueba preliminar en noviembre de 2020, presenta una solución al retraso frecuente en el tramitación de las partes alícuotas de las aguas residuales durante COVID-19. Las razones de tal retraso son múltiple, colocando de la escasez del estado mayor, del cierre de laboratorios, de la falta de reactivos y de labware, y de una comprensión pobre de las mejores técnicas. Por este motivo, ha sido a menudo necesario salvar las muestras para el análisis posterior.

Este estudio es el primer estudio finlandés diseñado para descubrir SARS-CoV-2 en aguas residuales municipales. Su objetivo era destapar la estabilidad del ARN SARS-CoV-2 en temperaturas más frías. Esto ayudaría a fijar la exactitud de los resultados en muchos estudios de las aguas residuales publicados ya.

Los investigadores utilizaron un análisis del qPCR de E-Sarbeco RT para medir el título del gen del envolvente del SARS, y el análisis del N2 para el gen del nucleocapsid SARS-CoV-2 en un cierto plazo. Las muestras de las aguas residuales examinadas habían sido salvadas en 4ᴼC, -20ᴼC, y -75ᴼC.

La depuradora de aguas residuales muestreada era la instalación de Viikinmaki que sirve a 860.000 personas en los ocho municipios. Las muestras afuentes fueron recogidas antes de cualquier tratamiento, en un contenedor de 20 litros, siendo tomado del influente compuesto cerco durante 24 horas. La muestra de 20 litros fue salvada en el 6°C, y las otras muestras de 5 y 2 litros en dos diversos puntos del tiempo, para alcanzar el laboratorio en el plazo de 26 horas. Las pequeñas muestras después fueron divididas en partes alícuotas de 30 ml y guardadas en 4°C, -20°C, y -75°C hasta que fueran probadas.

En los primeros 28 días, el número de copia del ARN iba unmeasured debido a una falta de la metodología requerida para el análisis. La cantidad fue tomada para ser similar a la medición asumida el control el primer mes del almacenamiento en el frío, en otra muestra cerco después de 5 semanas.

La curva de extinción del pico SARS-CoV-2 (log10 copia 100 ml-1) en influente de las aguas residuales en 4°C, -20°C, y - 75°C, enumerado con E-Sarbeco y análisis del RT-qPCR del N2.
La curva de extinción del pico SARS-CoV-2 (log10 copia 100 ml-1) en influente de las aguas residuales en 4°C, -20°C, y - 75°C, enumerado con E-Sarbeco y análisis del RT-qPCR del N2.

Entre 29 y 84 días, los investigadores encontraron que bajo todas estas condiciones, el ARN viral seguía siendo casi estable. Esto estaba en contraste con la 1 reducción del tronco en ARN del norovirus GII durante este período. Esto muestra que los virus no-envueltos no persisten siempre para duraciones más largas en el frío, como fue pensada previamente.

Usando el análisis de E-Sarbeco, los investigadores observaron cantidades similares del ARN con independencia de temperatura de almacenamiento, con una tendencia hacia la detección de cantidades más altas de ARN viral en las temperaturas de congelación. En 4°C, había una extinción lineal en el número de copia del ARN para los objetivos del gen descubiertos por ambos análisis durante 21 días.

El análisis del N2 mostró una extinción importante mayor en 4°C. Esto sugiere que los genes del nucleocapsid y del envolvente tengan índices diferenciados de extinción. Sin embargo, el estudio adicional se requiere entender la estabilidad de diversos genes del marcador requeridos para la vigilancia SARS-CoV-2 en aguas residuales.

En las temperaturas de congelación, -20°C y -75°C, seguía habiendo la cuenta del ARN en las aguas residuales afuentes intacto durante 58 días. Los resultados fueron validados agregando una muestra nasofaríngea del lampazo de un paciente COVID-19, en la dilución, al influente de las aguas residuales. La muestra de SARS-CoV-2-spiked contuvo el contenido estable del ARN durante 28 y 58 días, el primer en refrigerado y el segundo en condiciones de congelación.

Mientras que el determinante primero de la desactivación viral es la temperatura de almacenamiento, otros factores que puedan hacer que un impacto importante incluya la presencia y la cantidad de materia orgánica y si otros microbios están presentes.

Hay también una necesidad de descubrir títulos inferiores del ARN viral en las aguas residuales, que requiere el muestreo de alta calidad y eficiente, preservando, y tramitando procedimientos. Esto es determinado esencial teniendo en cuenta que los virus previamente probados en aguas residuales han sido virus no-envueltos, mientras que se envuelve SARS-CoV-2.

Una vez más la fracción de la muestra a la cual el virus es asociado se debe determinar definitivo por más investigación, si en las bolitas en el ultrafiltrado de las aguas residuales antes de la centrifugación o de la macropartícula el agua materia-libre fracciona. El estudio actual encontró cantidades ligeramente más altas de ARN viral en el anterior, quizás debido al envolvente viral. Una cierta investigación reciente, sugiere de hecho el uso del sedimento de las aguas residuales para la detección viral.

Este estudio es importante en ofrecer los datos que pueden desarrollar los protocolos seguros para la prueba de las aguas residuales en epidemiología COVID-19.

Los investigadores concluyen, “El ARN SARS-CoV-2 parecían asombrosamente estables en estas temperaturas de la conservación en cámara frigorífica durante 29, 64, y 84 días,” en 4°C, -20°C, y -75°C. Así, si el análisis inmediato es imposible, estas temperaturas se deben preferir para el almacenamiento.

Advertencia *Important

el medRxiv publica los partes científicos preliminares que par-no se revisan y, por lo tanto, no se deben mirar como concluyentes, conduce práctica clínica/comportamiento relativo a la salud, o tratado como información establecida.

Journal reference:
Dr. Liji Thomas

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Dr. Liji Thomas

Dr. Liji Thomas is an OB-GYN, who graduated from the Government Medical College, University of Calicut, Kerala, in 2001. Liji practiced as a full-time consultant in obstetrics/gynecology in a private hospital for a few years following her graduation. She has counseled hundreds of patients facing issues from pregnancy-related problems and infertility, and has been in charge of over 2,000 deliveries, striving always to achieve a normal delivery rather than operative.

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