Aviso: Esta página é uma tradução automática da página original em inglês. Por favor note uma vez que as traduções são geradas por máquinas, não tradução tudo será perfeita. Este site e suas páginas da Web destinam-se a ler em inglês. Qualquer tradução deste site e suas páginas da Web pode ser imprecisas e imprecisos no todo ou em parte. Esta tradução é fornecida como uma conveniência.

O anticorpo monoclonal HB27 mostra a actividade de neutralização poderoso contra SARS-CoV-2

Coronavirus 2 da Síndrome Respiratória Aguda Grave (SARS-CoV-2) - o micróbio patogénico causal da doença 2019 do coronavirus (COVID-19) - contaminou sobre 61,1 milhões de pessoas no mundo inteiro e causado sobre 1,43 milhão mortes.

Enquanto os cientistas continuam a sondar para intervenções farmacêuticas eficazes contra SARS-CoV-2, um estudo novo relata um anticorpo monoclonal muito prometedor, HB27, que parece ter dois mecanismos distintos da acção inibir a interacção da pilha do vírus-anfitrião e a infecção subseqüente. Este poderia conseqüentemente ser “um candidato prometedor para imunoterapias contra COVID-19,” diz a equipa de investigação.

Estudo: Fechamento dobro de um anticorpo monoclonal humano poderoso contra SARS-CoV-2. Crédito de imagem: Alexyz3d/Shutterstock

O vírus ganha a entrada às pilhas de anfitrião através de sua proteína do ponto, uma proteína de dois-subunidade que contrate o receptor deconversão da enzima 2 (ACE2) na membrana de pilha do anfitrião. Isto expor a proteína aos proteases da pilha de anfitrião, que provoca então uma mudança maciça na conformação da pre-fusão às fases da cargo-fusão. Isto conduz à fusão das membranas viral e do anfitrião de pilha para permitir que o vírus entre no cytosol da pilha de anfitrião.

A proteína de S existe como um trimer na natureza, mas tem um receptor-acessível e - estado inacessível, onde o RBDs é aberto (uns ou vários) ou fechado (tudo). Estes estados são possíveis devido ao dobradiça-como o movimento no RBD negociado por interacções complexas da proteína-proteína com pilhas de anfitrião.

Embora neutralizando anticorpos (NAb) foram identificados, alguns, como CR3022, falha para impedir a infecção com o vírus. Isto é provavelmente devido à conformação flexível dos resumos de neutralização, que permitem a infecção de continuar apesar da presença NAbs. Por outro lado, outros anticorpos estão sendo descobertos que parecem neutralizar o vírus sem obstruir o receptor ACE2.

O estudo actual, publicado no server do bioRxiv* em novembro de 2020, visa compreender o mecanismo da neutralização de SARS-CoV-2 por um anticorpo monoclonal recentemente identificado. NAb foi identificado de uma biblioteca do anticorpo obtida dos ratos imunizados com SARS-CoV-2 de recombinação RBD, e era quiméricoe, nomeado MHB27. Desde que isto teve o emperramento poderoso e a actividade de neutralização contra o vírus, um formulário humanizado foi gerado, chamado HB27.

IgG e os formulários HB27 deste anticorpo ligam ao RBD de SARS-CoV-2 no ponto baixo e na afinidade nanomolar muito baixa, mas não ao RBD dos SARS-CoV e do MERS-CoV mais adiantados. Sua concentração inibitório metade-máxima (IC50) está igualmente na escala nanomolar muito baixa. Foi testada mais contra o vírus do wildtype em um teste de neutralização da redução da chapa (PRNT), e mostrou uma concentração de neutralização nanomolar.

Infecção do rato impedida

Em ratos suscetíveis, uma única dose de HB27 podia impedir a infecção com o SARS-CoV-2 rato-adaptado, MASCp6, quando um ou outro dado antes ou depois da exposição ao vírus, com a carga viral que está sendo reduzida perto sobre 99,9% nos pulmões e na traqueia.

Testaram então a capacidade de HB27 para impedir a infecção SARS-CoV-2 em um modelo do rato adaptado para expressar os receptors ACE2 humanos. Encontraram, outra vez, que esta molécula podia reduzir cargas virais nos pulmões e na traqueia em 5 dias que seguem o desafio com o vírus, se o anticorpo era um ou outro administrado antes ou depois da exposição. Contudo, a dose preventiva era mais poderosa, com os níveis virais do pulmão que estão sendo reduzidos sobre uma mil-dobra.

Os baixos níveis de RNA viral considerados nos pulmões e na traqueia nos dias 3 e a cargo-infecção 5 podem ser devido ao desafio intranasal, onde os anticorpos de IgG não podem ligar ao vírus directamente, permitindo que entre nos pulmões e na traqueia. Contudo, nenhum virions infeccioso podia ser encontrado nestes tecidos nestes pontos do tempo, como mostrado por um PRNT.

Quando os ratos do controle mostraram sinais da pneumonia intersticial moderado, os ratos de HB27-treated tiveram mínimo ou inflamatório muito suave infiltra, mostrando a capacidade apanhar para impedir ou tratar a infecção depois da exposição a SARS-CoV-2.

Não-tóxico em doses altas

Os pesquisadores igualmente testaram a toxicidade do anticorpo dando a em uma única dose alta, intravenosa, em 10 vezes a dose eficaz calculada nos seres humanos, ao modelo não-humano (NHP) do primata, macaques do rhesus. Dos quatro animais testados, nenhuns mostraram todos os sinais da toxicidade, e a meia-vida foi encontrada para ser aproximadamente 10 dias, em média. Interessante, este período é provavelmente adequado para sua eficácia terapêutica, desde que em 5 dias, havia uma redução 99,9% na carga viral. Os resultados indicaram sua segurança em NHPs.

“Fechamento dobro” em SARS-CoV-2

Os cientistas investigaram então o mecanismo da neutralização, e encontraram que HB27 impediu completamente a interacção solúvel de ACE2-trimeric S. Não somente assim, já limite ACE2 solúvel foi substituído por HB27, porque o último tem uma afinidade obrigatória mil vezes mais forte à proteína do ponto. Contudo, umas concentrações muito mais altas estão exigidas para neutralizar este emperramento quando o receptor ACE2 está na superfície da pilha, talvez porque é dimeric. Quando testados pela transcrição do reverso da reacção em cadeia da polimerase do tempo real (RT-PCR), os pesquisadores confirmaram que as pilhas tratadas com o HB27 antes e depois de que o acessório do vírus abaixo-micromolar de concentrações poderia deslocar virions já limitados em uma concentração de aproximadamente 2,5 nanômetro.

Base estrutural para a neutralização de SARS-CoV-2 por ideias ortogonais de HB27 (a) dos conflitos entre HB27 Fabs e ACE2 em cima da ligação ao trimer de SARS-CoV-2 S. O trimer de SARS-CoV-2 S é apresentado como diagramas da fita e superfícies moleculars translúcidas com os três monómeros coloridos em ciano, em amarelo e em violeta, respectivamente. As três cópias de HB27 Fabs são rendidas como as superfícies moleculars coloriram 636 o mesmos que em figura 6. O ACE2 superposed é apresentado como diagramas verdes da fita assim como a superfície molecular translúcida. Inserir são ideias do close-up dos conflitos entre ACE2 e HB27 em cima da ligação a SARS-CoV-2 RBD. (b) Ideias ortogonais da estrutura de complexed Fabuloso-Um, Fabuloso-b e Fabuloso-c de HB27 com SARS-CoV-2 RBD. As subunidades S1 do trimer de SARS-CoV-2 S são rendidas como as superfícies cianas, amarelas e da violeta e as subunidades S2 são rendidas como superfícies cinzentas.
Base estrutural para a neutralização de SARS-CoV-2 por ideias ortogonais de HB27 (a) dos conflitos entre HB27 Fabs e ACE2 em cima da ligação ao trimer de SARS-CoV-2 S. O trimer de SARS-CoV-2 S é apresentado como diagramas da fita e superfícies moleculars translúcidas com os três monómeros coloridos em ciano, em amarelo e em violeta, respectivamente. As três cópias de HB27 Fabs são rendidas como as superfícies moleculars coloriram 636 o mesmos que em figura 6. O ACE2 superposed é apresentado como diagramas verdes da fita assim como a superfície molecular translúcida. Inserir são ideias do close-up dos conflitos entre ACE2 e HB27 em cima da ligação a SARS-CoV-2 RBD. (b) Ideias ortogonais da estrutura de complexed Fabuloso-Um, Fabuloso-b e Fabuloso-c de HB27 com SARS-CoV-2 RBD. As subunidades S1 do trimer de SARS-CoV-2 S são rendidas como as superfícies cianas, amarelas e da violeta e as subunidades S2 são rendidas como superfícies cinzentas.

Em segundo lugar, encontraram que HB27 igualmente inibe a fusão das membranas viral e do anfitrião de pilha. Usaram um sistema ponto-negociado da fusão da pilha-pilha com uma linha celular que expressasse SARS-CoV-2 e uma etiqueta de GFP como as pilhas do effector que propagam a infecção, e pilhas de Vero E6 como as pilhas de alvo que sofrem a infecção. Encontraram que quando ambos os tipos da pilha foram incubados, as centenas de pilhas fundiram para formar uma grande pilha syncytial. Contudo, a presença de HB27 impediu esta completamente, em uma concentração de 0,5 μM. Isto não foi visto com um outro anticorpo de neutralização, H104.

Igualmente realizaram os ensaios da neutralização, conduzidos introduzindo HB27 após o vírus tinham limitado já a seu receptor. Encontraram que impediu ou reduziram a formação do syncytium, segundo a dose em que se adicionou, de 4-100 nanômetro, e em 100 nanômetro, inibição completa foram observados. É igualmente capaz de obstruir a fusão pH-dependente do vírus com membranas do lipossoma em uma maneira dependente da dose, que ofereça um outro mecanismo da neutralização, embora em uma concentração mais alta.

Os pesquisadores concluem que o mecanismo principal da neutralização é provável inibir o acessório do vírus-receptor. A inibição de fusão da membrana pode depender sobre se a molécula pode aceder ao endosome contendo o vírus.

Mecanismo da inibição

Fizeram então um visualização estrutural do processo da inibição. A cabeça de RBD é introduzida em uma cavidade formada por cinco regiões dos CDR, através de muitas interacções hidrofóbicas, com cinco ligações de hidrogênio adicionais. O local antigénico a que HB27 liga tem 12 resíduos, simplesmente 7 que são comuns a SARS-CoV-2 e a SARS-CoV, que podem explicar porque o anticorpo não pode neutralizar os últimos. Além disso, das mutações de RBD relatadas até agora, nenhuns encontram-se dentro deste resumo, e todos os mutantes de RBD tiveram afinidaoes obrigatórias similares no teste com HB27, como fez o mutante de D614G.

O mecanismo da neutralização é pelo obstáculo steric do emperramento ACE2, com as duas moléculas HB27 adjacentes que impedem sterically o emperramento de uma molécula ACE2. O S trimeric foi observado para estar em somente um estado conformational, de um fechado com os dois abertos. O fabuloso do HB27 anexado ao RBD fechado parece ancorar todos os três RBDs e mantem-nos da mudança.

Ao contrário de diversos outros anticorpos monoclonais cruz-reactivos com os testes padrões diferentes da neutralização, envolvendo correcções de programa conservadas dos ácidos aminados perto da borda do RBM mas não dentro dele, HB27 está na borda mais variável do núcleo de RBM e ocupa todo o RBDs. Isto poderia explicar porque este anticorpo é específico e altamente neutralizando.

Conclusão

Os pesquisadores concluem, “HB27 inibem provavelmente a infecção SARS-CoV-2 em etapas múltiplas durante o processo viral da entrada.” Este é o primeiro anticorpo relatado para ser capaz de impedir a fusão da membrana por um coronavirus. Além disso, na linha de alguma pesquisa recente, o rompimento do acessório do pilha-vírus do anfitrião por este anticorpo podia impedir a associação entre o vírus e o protease TMPRSS2 da pilha de anfitrião; além disso, possivelmente, impedindo a fusão viral da membrana inibindo a segmentação do ponto de TMPRSS2-mediated.

Os autores descrevem este: “A actividade de neutralização poderoso de HB27 resulta provavelmente de sua intervenção em duas etapas da infecção viral, travando o acessório ausente do vírus a seu receptor e obstruindo a fusão da membrana; tendo por resultado um fechamento dobro.” Os resultados dos ensaios clínicos em curso deste anticorpo em China devem estar completos do interesse.

Observação *Important

o bioRxiv publica os relatórios científicos preliminares que par-não são revistos e, não devem conseqüentemente ser considerados como conclusivos, guia a prática clínica/comportamento saúde-relacionado, ou tratado como a informação estabelecida.

Journal reference:
Dr. Liji Thomas

Written by

Dr. Liji Thomas

Dr. Liji Thomas is an OB-GYN, who graduated from the Government Medical College, University of Calicut, Kerala, in 2001. Liji practiced as a full-time consultant in obstetrics/gynecology in a private hospital for a few years following her graduation. She has counseled hundreds of patients facing issues from pregnancy-related problems and infertility, and has been in charge of over 2,000 deliveries, striving always to achieve a normal delivery rather than operative.

Citations

Please use one of the following formats to cite this article in your essay, paper or report:

  • APA

    Thomas, Liji. (2020, November 27). O anticorpo monoclonal HB27 mostra a actividade de neutralização poderoso contra SARS-CoV-2. News-Medical. Retrieved on March 03, 2021 from https://www.news-medical.net/news/20201127/Monoclonal-antibody-HB27-shows-potent-neutralizing-activity-against-SARS-CoV-2.aspx.

  • MLA

    Thomas, Liji. "O anticorpo monoclonal HB27 mostra a actividade de neutralização poderoso contra SARS-CoV-2". News-Medical. 03 March 2021. <https://www.news-medical.net/news/20201127/Monoclonal-antibody-HB27-shows-potent-neutralizing-activity-against-SARS-CoV-2.aspx>.

  • Chicago

    Thomas, Liji. "O anticorpo monoclonal HB27 mostra a actividade de neutralização poderoso contra SARS-CoV-2". News-Medical. https://www.news-medical.net/news/20201127/Monoclonal-antibody-HB27-shows-potent-neutralizing-activity-against-SARS-CoV-2.aspx. (accessed March 03, 2021).

  • Harvard

    Thomas, Liji. 2020. O anticorpo monoclonal HB27 mostra a actividade de neutralização poderoso contra SARS-CoV-2. News-Medical, viewed 03 March 2021, https://www.news-medical.net/news/20201127/Monoclonal-antibody-HB27-shows-potent-neutralizing-activity-against-SARS-CoV-2.aspx.