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La mutazione di SARS-CoV-2 D614G non pregiudica la prestazione delle analisi sierologiche

In un nuovo studio pubblicato nel giornale delle malattie infettive, i ricercatori degli Stati Uniti hanno considerato l'emergenza di nuova variante della proteina della punta SARS-CoV-2. Hanno confrontato l'analisi della punta G614-based all'analisi originale di D614-based - indicando verso lo sviluppo di immunità umorale riconoscibile e inter-rispondente.

La necessità di capire la pandemia di malattia di coronavirus (COVID-19) causata dal SARS-CoV-2 ha girato il nostro occhio verso l'acquisizione e lo sviluppo di immunità della popolazione. Sappiamo che il sistema immunitario umano risponde all'infezione SARS-CoV-2 con una pletora di effettori cellulari ed umorali - compreso gli anticorpi prodotti dai linfociti B.

Ed effettivamente, gli anticorpi sviluppati contro SARS-CoV-2 possono riconoscere le proteine multiple SARS-CoV-2, che includono il nucleocapsid, la busta e le proteine della punta. Tuttavia, questi anticorpi non possono assicurare la protezione adeguata se le mutazioni virali sorgono.

Recentemente è stato indicato che la sequenza originale del genoma della proteina della punta è stata sostituita da un amminoacido modificato alla posizione 614, cioè, da D614 a G614. Questo sforzo emergente G614 è più contagioso in natura; quindi, c'è preoccupazione genuina se l'esposizione ad una variante di un virus provocherà la memoria inter-reattiva al seconda.

In questo studio recentemente pubblicato, un gruppo di ricercatori degli Stati Uniti piombo dal Dott. Carleen Klumpp-Thomas dal centro nazionale per l'avanzamento delle scienze di traduzione degli istituti della sanità nazionali a Rockville (Maryland) ha generato una costruzione completa del ectodomain della punta G614 ed ha integrato questa proteina mentre un antigene nell'analisi enzima-collegata dell'immunosorbente (ELISA).

Approccio metodologico

Per valutare l'abilità degli anticorpi montati durante l'infezione SARS-CoV-2 per reagire contro entrambe le varianti della proteina della punta (cioè, D614 e G614), i ricercatori hanno misurato la reattività sierologica usando ELISA per la rilevazione di IgG, di IgM e di IgA che lega in pieno per chiodare i trimeri del ectodomain.

Per quello scopo, i trimeri solubili della punta sono stati generati con una sequenza della proteina che era basicamente identica alla variante originale della punta, eccezione fatta per l'aggiunta della mutazione suddetta di D614G.

Inoltre, le costruzioni del DNA sono state sintetizzate con i geni ottimizzati per l'espressione in cellule umane ed ulteriormente subcloned in un vettore mammifero di espressione dell'alto rendimento. Le proteine sono state espresse in Expi293 celle (che dominante sono usate per la loro espressione) e depurativo.

Complessivamente 88 campioni dai donatori convalescenti in una comunità di alto-incidenza sono stati provati, insieme a 100 comandi negativi pre-pandemici ed allora confrontato ai dati precedentemente pubblicati per il D614 originale chiodi la proteina.

Legando a qualsiasi variante della punta non alterata da una mutazione

I campioni del siero dai donatori che hanno verificato il positivo ad anticorpi della anti-punta quando la punta D614 è stata usata egualmente hanno verificato il positivo facendo uso della punta G614 ad anticorpi di IgG, di IgM e di IgA. Una correlazione positiva quando tutte le sottoclassi dell'anticorpo sono state valutate e tutti i donatori con una reazione positiva agli anticorpi D614 egualmente hanno esibito la forte reattività alla punta G614.

Perseguendo un'analisi di correlazione e di regressione lineare, i ricercatori hanno trovato una forte correlazione e una buona misura fra entrambe le varianti. C'era un rapporto dell'intensità del segnale di 1:1 secondo il pendio della riga di regressione.

Quando la prestazione della prova è stata interessata, entrambe le proteine sono state indicate per depurare similmente, senza la differenza nel comportamento della proteina in cromatografia analitica di esclusione di dimensione. L'ultimo significa che entrambe le proteine hanno formato analogamente le strutture trimeric previste.

Risposta policlonale dell'anticorpo

Questi dati implicano chiaramente che l'uso della costruzione completa della proteina della punta non dovrebbe pregiudicare la prestazione seroassay o “manchi„ i campioni che sono sieropositivi. Inoltre, può essere concluso che la risposta umana dell'anticorpo a SARS-CoV-2 può essere riconosciuta facendo uso della proteina della punta D614 o G614 nelle analisi enzima-collegate dell'immunosorbente.

“Il fatto che D614 e G614 entrambi la sieropositività suscitata forse è preveduto, dato che la risposta immunitaria umana sia policlonale„, dice gli autori di studio.

“Mentre ci possono essere anticorpi prodotti che riconoscono gli epitopi della proteina della punta specifici per D614 o G614, questi sarebbero fra i molti anticorpi che riconoscono la proteina della punta SARS-CoV-2 utilizzata nel nostro seroassay„, essi aggiungono.

Comunque, gli sforzi approfonditi supplementari della ricerca su questo argomento dovrebbero valutare i diversi cloni del linfocita B e le risposte immunitarie nella correlazione con sequenziamento del genoma virale. Ciò può provocare le innovazioni profonde nella nostra comprensione della biologia di malattia e dello sviluppo del trattamento.

Journal reference:
Dr. Tomislav Meštrović

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Dr. Tomislav Meštrović

Dr. Tomislav Meštrović is a medical doctor (MD) with a Ph.D. in biomedical and health sciences, specialist in the field of clinical microbiology, and an Assistant Professor at Croatia's youngest university - University North. In addition to his interest in clinical, research and lecturing activities, his immense passion for medical writing and scientific communication goes back to his student days. He enjoys contributing back to the community. In his spare time, Tomislav is a movie buff and an avid traveler.

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