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La mutación de SARS-CoV-2 D614G no afecta al funcionamiento de análisis serológicos

En un nuevo estudio publicado en el gorrón de enfermedades infecciosas, los investigadores de los E.E.U.U. consideraban la aparición de una nueva variante de la proteína del pico SARS-CoV-2. Compararon análisis del pico G614-based al análisis original de D614-based - apuntando hacia el revelado de la inmunidad humoral reconocible, cruz-responsiva.

La necesidad de entender el pandémico de la enfermedad del coronavirus (COVID-19) causado por el SARS-CoV-2 ha girado nuestro aro hacia la adquisición y el revelado de la inmunidad de la población. Sabemos que el sistema inmune humano responde a la infección SARS-CoV-2 con una plétora de determinantes celulares y humorales - incluyendo los anticuerpos producidos por las células de B.

Y de hecho, los anticuerpos desarrollados contra SARS-CoV-2 pueden reconocer las proteínas múltiples SARS-CoV-2, que incluyen el nucleocapsid, el envolvente, y las proteínas del pico. Sin embargo, estos anticuerpos pueden no ofrecer la protección adecuada si se presentan las mutaciones virales.

Fue mostrado recientemente que la serie original del genoma de la proteína del pico ha sido reemplazada por un aminoácido modificado en la posición 614, es decir, de D614 a G614. Esta deformación emeregente G614 es más infecciosa en naturaleza; por lo tanto, hay preocupación auténtica si la exposición a una variante de un virus dará lugar a memoria cruz-reactiva al segunda.

En este estudio recientemente publicado, un grupo de investigadores de los E.E.U.U. llevados por el Dr. Carleen Klumpp-Thomas del centro nacional para avance ciencias de translación de los institutos de la salud nacionales en Rockville (Maryland) generó una construcción completa del ectodomain del pico G614 e integró esta proteína mientras que un antígeno en el análisis enzima-conectado del inmunosorbente (ELISA).

Aproximación metodológica

Para valorar la capacidad de los anticuerpos montados durante la infección SARS-CoV-2 para reaccionar contra ambas variantes de la proteína del pico (es decir, D614 y G614), los investigadores han medido reactividad serológica usando ELISA para la detección de IgG, de IgM, y de IgA que ataba para clavar por completo los trímeros del ectodomain.

Para ese propósito, los trímeros solubles del pico fueron generados con una serie de la proteína que era básicamente idéntica a la variante original del pico, a excepción de la adición de la mutación ya mencionada de D614G.

Por otra parte, las construcciones de la DNA fueron sintetizadas con los genes optimizados para la expresión en células humanas y subcloned además en un vector mamífero de la expresión del alto rendimiento. Las proteínas fueron expresadas en las células Expi293 (que penetrante se utilizan para su expresión) y purificado.

Un total de 88 muestras de donantes convalecientes en una comunidad de la alto-incidencia fueron probadas, así como 100 mandos negativos pre-pandémicos, y entonces comparado a los datos previamente publicados para el D614 original clave la proteína.

El atar a cualquier variante del pico no alterada por una mutación

Las muestras del suero de los donantes que probaron el positivo para los anticuerpos del anti-pico cuando el pico D614 fue utilizado también probaron el positivo usando el pico G614 para los anticuerpos de IgG, de IgM, y de IgA. Una correlación positiva cuando todas las subclases del anticuerpo fueron valoradas y todos los donantes con una reacción positiva a los anticuerpos D614 también exhibieron reactividad fuerte al pico G614.

Persiguiendo una regresión lineal y un análisis de correlación, los investigadores han encontrado una correlación fuerte y un buen ajuste entre ambas variantes. Había una índice de la intensidad de la señal del 1:1 según el declive de la línea de regresión.

Cuando el funcionamiento de la prueba fue referido, ambas proteínas fueron mostradas para purificar semejantemente, sin la diferencia en comportamiento de la proteína en cromatografía analítica de la exclusión de la talla. Este último significa que ambas proteínas formaron análogo las estructuras trímeras previstas.

Reacción policlonal del anticuerpo

Estos datos implican sin obstrucción que el uso de la construcción completa de la proteína del pico no debe afectar a funcionamiento seroassay o “falte” las muestras que son seropositivas. Por otra parte, puede ser concluido que la reacción humana del anticuerpo a SARS-CoV-2 se puede reconocer usando la proteína del pico D614 o G614 en análisis enzima-conectados del inmunosorbente.

“El hecho de que D614 y G614 ambos seropositividad sacada quizás esté preveído, dado que la inmunorespuesta humana es policlonal”, dice a autores del estudio.

“Mientras que puede haber los anticuerpos producidos que reconocen los epitopos de la proteína del pico específicos para D614 o G614, éstos estarían entre los muchos anticuerpos que reconocen la proteína del pico SARS-CoV-2 usada en nuestro seroassay”, ellos agregan.

En todo caso, los esfuerzos profundizados adicionales de la investigación en este tema deben valorar copias individuales del linfocito B e inmunorespuestas en la correlación con la secuencia viral del genoma. Esto puede dar lugar a rupturas profundas en nuestra comprensión de la biología de la enfermedad y del revelado del tratamiento.

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Dr. Tomislav Meštrović

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Dr. Tomislav Meštrović

Dr. Tomislav Meštrović is a medical doctor (MD) with a Ph.D. in biomedical and health sciences, specialist in the field of clinical microbiology, and an Assistant Professor at Croatia's youngest university - University North. In addition to his interest in clinical, research and lecturing activities, his immense passion for medical writing and scientific communication goes back to his student days. He enjoys contributing back to the community. In his spare time, Tomislav is a movie buff and an avid traveler.

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