Aviso: Esta página é uma tradução automática da página original em inglês. Por favor note uma vez que as traduções são geradas por máquinas, não tradução tudo será perfeita. Este site e suas páginas da Web destinam-se a ler em inglês. Qualquer tradução deste site e suas páginas da Web pode ser imprecisas e imprecisos no todo ou em parte. Esta tradução é fornecida como uma conveniência.

Os pesquisadores desenvolvem um ensaio barato, saliva-aperfeiçoado de RT-LAMP para uma detecção mais rápida de SARS-CoV-2

A pandemia do coronavirus 2 da Síndrome Respiratória Aguda Grave (SARS-CoV-2) destacou os defeitos na resposta de emergencia global e conduziu uma procura maciça para in vitro tecnologias diagnósticas do teste.

Estudo: Revelação de um ensaio saliva-aperfeiçoado de RT-LAMP para SARS-CoV-2. Crédito de imagem: sdecoret/Shutterstock
Estudo: Revelação de um ensaio saliva-aperfeiçoado de RT-LAMP para SARS-CoV-2. Crédito de imagem: Sdecoret/Shutterstock

A tecnologia quantitativa da reacção em cadeia da polimerase do tempo real (qPCR) está sendo amplamente utilizada como um teste de diagnóstico para a detecção SARS-CoV-2, mas não cumpre óptima as necessidades diagnósticas em grande escala desta pandemia global inaudita. O tempo de resposta longo, a complexidade, as faltas da cadeia de aprovisionamento, e o custo alto são algumas desvantagens do RT-qPCR que diminuem sua eficiência e os cabazes alcançam ao teste.

Muitos países estão adaptando-se a e tecnologias moleculars tornando-se para superar estes defeitos. Transcrição reversa a tecnologia isothermal laço-negociada da amplificação (RT-LAMP) é um deles e pode ser uma alternativa viável à tecnologia do qPCR em endereçar as necessidades diagnósticas da pandemia COVID-19.

A técnica de RT-LAMP e seu princípio

A LÂMPADA é uma técnica da detecção que trabalhe no mesmo princípio da amplificação do ácido nucleico que o PCR. Contudo, a LÂMPADA é uma tecnologia isothermal e não precisa os cyclers térmicos, que custam diverso mil dólares. Daqui, RT-LAMP usa o equipamento mínimo comparado ao RT-qPCR e é uma alternativa melhor aos métodos de teste actualmente usados.

O teste da LÂMPADA exige pelo menos 4 (e até 6) primeiras demão diferentes, de que 2 contêm uma região auto-complementar que produza um laço único-encalhado perpétuo e 2 visam a região na estrutura de laço único-encalhada. Assim, a LÂMPADA pode produzir quantidades detectáveis de ADN quase no mesmo tempo que o PCR mas em uma única temperatura da reacção. A detecção do ADN pode ser conseguida através dos métodos diferentes tais como a turbidez ou usando uma tintura fluorescente.

Os esforços de uma detecção mais adiantada focalizaram em usar a detecção colorimetric de produtos da amplificação usando uma tintura do pH, ou em um indicador do magnésio. As mudanças da cor produzidas por estas tinturas, embora adequadas, limitaram o contraste visível e podem frequentemente ser ambíguas.

A violeta do abajur oferece a melhor claridade visual e limita a ambigüidade

A fim endereçar as edições acima, os pesquisadores dos E.U. usaram recentemente a violeta nova do abajur da tintura do pH (LSV) em RT-LAMP. LSV tem o melhor contraste visual entre o pH do alto e baixo e um ponto mais forte da inflexão, ambo permite a interpretação fácil dos resultados e reduz a ambigüidade. Seu estudo foi publicado no server da pré-impressão, medRxiv*.

Para a detecção de SARS-CoV-2, os pesquisadores usaram a saliva como um espécime respiratório em vez dos cotonetes nasopharyngeal. A amostra da saliva é muito mais fácil comparada a recolher cotonetes nasopharyngeal. Os estudos precedentes confirmaram a compatibilidade da saliva com o RT-LAMP que testa mesmo na ausência da purificação do RNA. A equipe adicionou uma etapa da inactivação que normalizasse o pH, neutralizasse RNases, e liberasse o RNA. Contudo, desde que a saliva é heterogênea em indivíduos diferentes, um-tamanho-ajuste-toda estratégia da inactivação não é possível.

Nossos resultados da optimização da purificação igualmente sugerem diversos sentidos inexplorados para diagnósticos saliva-baseados futuro do ácido nucleico.”

Assim, aperfeiçoaram um protocolo da inactivação com melhor sucesso através das amostras heterogêneas da saliva combinadas com a violeta do abajur. Desenvolveram um protocolo minuto da purificação do RNA 10 da saliva e nomearam-no protocolo magnético SalivaBeads do grânulo. Igualmente desenvolveram uma vara magnética (MS), StickLAMP, que oferece a purificação grânulo-baseada segura do RNA e o acesso simples e barato ao teste dos espécimes da saliva.

O “MS igualmente tem diversas vantagens sobre o outro método tradicional da separação do grânulo, purificação magnética da cremalheira.”

Diversas características da purificação de SalivaBeads. (a) Uma comparação da uniformidade da cor da amostra da pre-incubação em 12 amostras, com reacções de SARS-CoV-2 e de actínio de lado a lado. A entrada directa da saliva neutralizada fenol comercial em uma reacção Vermelho-baseada é comparada a uma entrada SalivaBeads-refinada do RNA em nossa reacção Violeta-baseada abajur. (b) Uma comparação do RNA SARS-CoV-2 recuperada das amostras maquinadas da saliva pelo qPCR N1, medido pelo número de cópias recuperadas pelo qPCR dividido pelo número de cópias maquinadas na saliva. (c) Uma comparação visual do limite dos restos aos magnético-grânulos ao isolar grânulos pela cremalheira magnética (esquerda) ou por uma vara magnética (direita). (d) Uma comparação da sensibilidade entre SalivaBeads refinou através da cremalheira magnética (saiu) e da vara magnética (direita), por RT-LAMP com violeta do abajur.
Diversas características da purificação de SalivaBeads. (a) Uma comparação da uniformidade da cor da amostra da pre-incubação em 12 amostras, com reacções de SARS-CoV-2 e de actínio de lado a lado. A entrada directa da saliva neutralizada fenol comercial em uma reacção Vermelho-baseada é comparada a uma entrada SalivaBeads-refinada do RNA em nossa reacção Violeta-baseada abajur. (b) Uma comparação do RNA SARS-CoV-2 recuperada das amostras maquinadas da saliva pelo qPCR N1, medido pelo número de cópias recuperadas pelo qPCR dividido pelo número de cópias maquinadas na saliva. (c) Uma comparação visual do limite dos restos aos magnético-grânulos ao isolar grânulos pela cremalheira magnética (esquerda) ou por uma vara magnética (direita). (d) Uma comparação da sensibilidade entre SalivaBeads refinou através da cremalheira magnética (saiu) e da vara magnética (direita), por RT-LAMP com violeta do abajur.

Protocolos baratos ideais para as áreas do baixo-recurso que esforçam-se para conter a propagação de SARS-CoV-2

De acordo com os autores, os protocolos que da detecção SARS-CoV-2 desenvolveram são eficazes na redução de custos, em menos do que $5/test sem fatorar no trabalho e na amostra que associam-se, e fornecem a melhor escalabilidade comparada aos protocolos existentes sem afetar a sensibilidade dos testes. Os autores adicionaram que os protocolos novos são ideais para escolas ou locais de trabalho com um pequeno número estudantes ou de empregados na escala de menos de 10 aos baixos milhares. O baixo custo dos protocolos novos fazem-nos apropriados para o baixo-recurso e os ambientes underserved que foram afectados desproporcionalmente pela pandemia SARS-CoV-2.

As exigências de equipamento mínimas e o baixo custo igualmente fazem-nos bem-seridos para os baixos ambientes do recurso, que ainda puderam poder montar um laboratório médio da complexidade CLIA.”

Observação *Important

o medRxiv publica os relatórios científicos preliminares que par-não são revistos e, não devem conseqüentemente ser considerados como conclusivos, guia a prática clínica/comportamento saúde-relacionado, ou tratado como a informação estabelecida.

Journal reference:
Susha Cheriyedath

Written by

Susha Cheriyedath

Susha has a Bachelor of Science (B.Sc.) degree in Chemistry and Master of Science (M.Sc) degree in Biochemistry from the University of Calicut, India. She always had a keen interest in medical and health science. As part of her masters degree, she specialized in Biochemistry, with an emphasis on Microbiology, Physiology, Biotechnology, and Nutrition. In her spare time, she loves to cook up a storm in the kitchen with her super-messy baking experiments.

Citations

Please use one of the following formats to cite this article in your essay, paper or report:

  • APA

    Cheriyedath, Susha. (2021, January 08). Os pesquisadores desenvolvem um ensaio barato, saliva-aperfeiçoado de RT-LAMP para uma detecção mais rápida de SARS-CoV-2. News-Medical. Retrieved on January 22, 2022 from https://www.news-medical.net/news/20210108/Researchers-develop-a-low-cost-saliva-optimized-RT-LAMP-assay-for-faster-detection-of-SARS-CoV-2.aspx.

  • MLA

    Cheriyedath, Susha. "Os pesquisadores desenvolvem um ensaio barato, saliva-aperfeiçoado de RT-LAMP para uma detecção mais rápida de SARS-CoV-2". News-Medical. 22 January 2022. <https://www.news-medical.net/news/20210108/Researchers-develop-a-low-cost-saliva-optimized-RT-LAMP-assay-for-faster-detection-of-SARS-CoV-2.aspx>.

  • Chicago

    Cheriyedath, Susha. "Os pesquisadores desenvolvem um ensaio barato, saliva-aperfeiçoado de RT-LAMP para uma detecção mais rápida de SARS-CoV-2". News-Medical. https://www.news-medical.net/news/20210108/Researchers-develop-a-low-cost-saliva-optimized-RT-LAMP-assay-for-faster-detection-of-SARS-CoV-2.aspx. (accessed January 22, 2022).

  • Harvard

    Cheriyedath, Susha. 2021. Os pesquisadores desenvolvem um ensaio barato, saliva-aperfeiçoado de RT-LAMP para uma detecção mais rápida de SARS-CoV-2. News-Medical, viewed 22 January 2022, https://www.news-medical.net/news/20210108/Researchers-develop-a-low-cost-saliva-optimized-RT-LAMP-assay-for-faster-detection-of-SARS-CoV-2.aspx.