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Albumina: A escolha natural para testes de diagnóstico

Autor: Helen Rawsthorne Ph.D., gerente superior da ciência, Albumedix

A pandemia global actual brilhou uma luz na importância do teste diagnóstico, especialmente para COVID-19. Porque o coronavirus continua a varrer através do globo, nunca foi mais vital centrar-se os esforços sobre a identificação daqueles contaminados com a doença para atrasar e parar a propagação da infecção. Um esforço coordenado é necessário acelerar a pesquisa e, enquanto a apresentação vacinal está ainda somente nas fases iniciais, o mundo é mais competente de como o teste diagnóstico seguro é uma ferramenta valiosa para salvar vidas.

Com o número de testes de diagnóstico novos que estão sendo tornados estando em um ponto mais alto e em uns sucessos comerciais que fazem o manchete das notícias global, a indústria está considerando o grande progresso. Mas este crescimento prometedor vem com desafios sendo a base. O mais bem documentado destes está reduzindo custos ao maximizar a produtividade, porém uma área que se está tornando cada vez mais importante, especialmente a propósito do teste COVID-19 está confiança, um teste mais rápido e a uma velocidade dos resultados.

Muitos testes de diagnóstico bem conhecidos para COVID-19 são available1. Estes incluem, 1) reacção em cadeia reversa da polimerase da transcrição (RT-PCR) - o teste padrão actual, 2) amplificação isothermal laço-negociada (LÂMPADA) - um teste simples, mas menos desenvolvido, 3) fluxo lateral - ensaios à mão do único-uso que fornecem os resultados dentro tão curtos quanto 15 minutos, e 4) ensaio enzima-ligado da imunoabsorção (ELISA) - ensaios tècnica simples que facilmente são lidos e oferecidos a produção relativamente alta. Mais testes ganham a aprovação da emergência cada dia e as técnicas novas continuam a fazer sua maneira através do encanamento da revelação, abastecido por pulos enormes na compreensão médica, em despesas de governo crescentes, e no número de aumentação dos casos COVID-19.

Muitos destes testes de diagnóstico estão tornando-se menores e mais rápidos, mas podem mais ser feitas para melhorar a precisão, a confiança e a velocidade dos resultados?

Desafios em testes de diagnóstico

O PCR, RT-PCR, a LÂMPADA e RT-LAMP são as maneiras as mais comuns de teste para os micróbios patogénicos.

A reacção em cadeia da polimerase (PCR) é usada “amplifica” segmentos pequenos do ADN. Uma vez que amplificado, o ADN produzido pelo PCR pode ser usado em muitos procedimentos de laboratório diferentes, incluindo a detecção de vírus. O PCR reverso da transcrição (RT-PCR) é usado quando o material começar é RNA. Neste método, o RNA é transcrito primeiramente em ADN complementar (cDNA) pelo transcriptase reverso do RNA total ou do RNA de mensageiro (mRNA). O cDNA é usado então como o molde para a reacção do PCR. RT-PCR é usado em uma variedade de aplicações que incluem a detecção do micróbio patogénico.

A LÂMPADA (amplificação Isothermal Laço-negociada) é uma única técnica da câmara de ar para a amplificação do ADN. Fornece uma alternativa barata à tecnologia da reacção em cadeia (PCR) da polimerase para detectar determinadas doenças. Envolve o projecto de primeiras demão do ensaio e de uso de uma polimerase dedeslocamento permitir a amplificação rápida em uma temperatura constante sem a necessidade para o ciclismo térmico (exigido para o PCR). Uma mistura de reacção típica da LÂMPADA contem 6 primeiras demão que visam 8 regiões no genoma bacteriano ou viral. Em RT-LAMP, as seqüências do RNA são detectadas em vez do ADN. O transcriptase reverso é adicionado à mistura da LÂMPADA, para converter o RNA viral no cDNA complementar que será usado para a amplificação. Este procedimento forneceu a grande ajuda em diagnosticar uma multidão de vírus do RNA.

Um elemento crucial de todos estes testes é a eficiência da amplificação. A capacidade plena do PCR diagnóstico é limitada, na parte, pela presença de inibidores nas amostras biológicas complexas que reduzem os inibidores da amplificação efficiency.2 podem igualmente afectar a sensibilidade do ensaio ou mesmo a conduzir ao ‐ falso results.3 negativo

Os facilitadores diferentes da amplificação, tais como a caseína e o formamide, podem ser usados para aumentar a amplificação do ADN. Os solventes orgânicos, incluindo DMSO e formamide, foram empregados frequentemente como aditivos para aumentar a eficiência da amplificação de seqüências altas do ADN do índice do GC (  do GC >   60%). A albumina de soro bovino (BSA) foi usada como um aditivo em diversas aplicações, incluindo digestões da enzima da limitação assim como na amplificação do PCR dos moldes das amostras ambientais que contêm inibidores potenciais, tais como compostos fenólicos. Pensa-se que BSA liga aos inibidores que reduzem assim seu efeito prejudicial na amplificação.

Em determinadas encenações, os aditivos ou os co-solventes químicos podem ser incluídos no amortecedor para melhorar a especificidade da amplificação reduzindo a mis-escorva e para aumentar a eficiência da amplificação removendo as estruturas secundárias. Os aditivos do PCR e os agentes da aumentação foram usados para aumentar o rendimento, a especificidade e a consistência de reacções do PCR. Estes aditivos podem ter efeitos benéficos na amplificação, aumentando a estabilidade da polimerase de ADN.

Diversos estudos mostraram os benefícios de BSA para aumentar significativamente o rendimento da amplificação do PCR quando usados em combinação com solventes orgânicos, DMSO ou formamide. BSA que aumentam efeitos foram obtidos em diversas aplicações do PCR, com moldes do ADN do índice alto e de medir do GC uma escala larga do tamanho. Quando adicionado ao amortecedor da reacção, promovendo efeitos de BSA foram vistos nos primeiros ciclos do PCR, apesar do tamanho do ADN a ser amplificado. Tais resultados demonstram uma alternativa eficaz na redução de custos para aumentar a eficiência da amplificação do PCR de alvos GC-ricos do ADN sobre um tamanho largo range.4

BSA foi relatado igualmente para reduzir a adesão da polimerase de ADN aos capilares de vidro usados em determinado PCR instruments.5 que do tempo real este é importante para reduzir a perda de reagentes com a adsorção às paredes da câmara de ar.

Os cientistas em Biolabs de Nova Inglaterra demonstraram a capacidade de um ensaio colorimetric da LÂMPADA para detectar o RNA do vírus SARS-CoV-2 que causa COVID-19.6 a propósito das técnicas da LÂMPADA, desafios podem elevarar quando a amostra começando está “suja”. Isto significa frequentemente que as etapas adicionais e os processos são necessários preparar a amostra, que pode ser demorada. BSA pode ajudar a fornecer um sinal mais rápido porque a amplificação é mais rápida. Além, o material do teste não tem que ser como “puro”, como a albumina liga as impurezas na mistura de reacção, removendo a necessidade para a purificação adicional pisa no processo.

Contudo, há uns desafios notáveis com BSA, e certamente algumas albuminas de soro humanas (HSA). É importante apreciar que não todas as albuminas estão criadas ingualmente, e as características de produto de deferimento podem impactar o desempenho, a eficácia e a segurança totais.

BSA e TEM desafios

Encontrar o aditivo direito, que aumenta o desempenho do teste de diagnóstico, é uma parte integrante da revelação e do caminho regulador. O produto ideal deve ser puro e são. A consistência da estabilidade e do grupo-à-grupo é igualmente considerações primordiais, devido a seu impacto no desempenho, na eficácia, e na segurança.

BSA e outras albuminas de recombinação podem sofrer da consistência deficiente do grupo-à-grupo. Também, BSA é derivado dos animais que podem levantar riscos potenciais da contaminação do vírus. A qualidade da albumina é essencial assegurar a consistência do grupo-à-grupo, mas também, a albumina pode ser alterada pela presença de impurezas e/ou de agregados. A pureza dos materiais é crucial para os reveladores que constroem a próxima geração de testes de diagnóstico avançados ao evitar o risco de resultados falsos.

As propriedades naturais de albuminas humanas de recombinação (rAlb) fazem-lhes a escolha natural para aditivos do teste de diagnóstico. Como uma proteína natural, a albumina é reconhecida extensamente como o cofre forte. Além, as versões de recombinação humanas e animal-livres reduzem o risco de micróbios patogénicos inesperados a zero.

o rAlb, um excipiente multi-funcional com propriedades validadas da estabilização, pode jogar um papel chave em assegurar a consistência e em manter a estabilidade e a eficácia de um teste de diagnóstico de modo que os pacientes recebam resultados óptimos. Ao contrário da albumina de soro humana derivada plasma (HSA) e de outras albuminas de recombinação, Recombumin® oferece uma fonte segura da albumina com consistência do grupo-à-grupo e segurança excelentes da fonte. Nossos produtos têm extremamente - baixos níveis de alterações translational do cargo (PTMs), qualidade absoluto do cGMP que encontra padrões de USP-NF e foram validados comercialmente em candidatos clínicos introduzido no mercado e da tarde-fase da droga e da vacina.

Conseqüentemente, o rAlb é uma escolha natural quando a segurança, a eficácia e a confiança são importantes.

Próprio revestimento da natureza

Somente uma albumina altamente pura, como Recombumin®, facilita a exploração completa do potencial da albumina ao reduzir a variabilidade e o risco. O produto animal e humano-livre oferece a consistência excelente do grupo-à-grupo e a segurança da fonte, fornecendo a segurança, a eficácia, a confiança, e a paz de espírito reguladora.

Recombumin® oferece uma alternativa mais segura a BSA e TEM-NA. Conduzido pelo desejo para de alta qualidade, os produtos humanos e do animal-componente livre da albumina, versões de recombinação estrutural e funcional equivalentes ao TÊM ter sido desenvolvidos sobre as décadas passadas. Preparou-se das variações genéticas diferentes dos presentes do plasma e exibe vários graus de truncamento, de glycation e de oxidação do N-terminal devido tempo de residência estendido às albuminas extraídas' no corpo. Ao contrário de TEM, os produtos do rAlb de Albumedix têm um perfil notàvel alto e consistente da qualidade.

Há frequentemente uma necessidade de evitar BSA ou albumina de uma fonte animal. Como BSA, a albumina humana de recombinação foi mostrada para impedir a adesão das enzimas às câmaras de ar da reacção e a pipeta surge. Igualmente estabiliza algumas proteínas durante a incubação. A albumina humana de Recombumin® pode igualmente ser usada para desactivar inibidores do PCR.

Como um aditivo do teste de diagnóstico, Recombumin® é:

  • Biològica estável
  • Quimicamente inerte
  • Não-tóxico
  • O solvente livra
  • Documentação reguladora detalhada
  • USP-NF complacente
  • fabricação da PBF-categoria
  • Pronto para uso fornecido

Benefícios chaves da albumina humana de recombinação para os testes COVID-19

Recombumin® pode permitir uns testes COVID-19 mais eficazes, incluindo jogos de teste de diagnóstico do PCR, do RT-PCR, da LÂMPADA e do RT-LAMP através de:

  • Tempo valioso de salvamento que prepara amostras; a pureza de Recombumin® pode permitir que a amplificação ocorra com níveis inferiores do ADN do molde, ou das amostras que estão “mais sujas”
  • Impedindo a adsorção não específica dos reagentes à câmara de ar do PCR
  • Maio actua enquanto um realçador enquanto liga aos inibidores do PCR
  • Maio permitindo o sinal ser conseguido mais rapidamente (LÂMPADA, RT-LAMP)

Devido à pureza absoluto de Recombumin® os locais obrigatórios para inibidores do PCR estarão livres (BSA desigual ou o plasma derivado TÊM), conseqüentemente fazendo o teste mais eficaz. Recombumin® é confirmado para ser vírus livre, eliminando o risco de falsos positivos que puderam de outra maneira elevarar de BSA ou TÊM.

Apoio regulador

Albumedix aplicou suas experiência e tecnologia científicas para apoiar uma escala de aplicações de teste diagnósticas.

Albumedix pode apoiar o registo de seu teste de diagnóstico dando lhe o acesso a nossa equipe de apoio reguladora altamente experiente. Nossos documentação e dados reguladores podem ajudar a aliviar a carga reguladora e a satisfazer exigências para reguladores.

Trabalhando em uma facilidade dedicada, nós temos a certificação do PBF do MHRA e nossa facilidade foi inspeccionada por FDA e por saúde Canadá a favor das aplicações do cliente.  Nós temos DMFs em muitas regiões que incluem os E.U. e podemos fornecer o apoio perguntas nos reguladores de resposta' com relação ao uso da albumina.  Fornecendo estes recursos chaves e capacidades, Albumedix jogou um papel vital em ajudar fabricantes do teste de diagnóstico desenvolve no mundo inteiro suas tecnologias avançadas.

Para o futuro de testes de diagnóstico

O sucesso do PCR e de outros jogos diagnósticos depende de diversos factores, com seus componentes da reacção que jogam papéis críticos na amplificação. Recombumin® oferece diversas vantagens: ligando aos inibidores da reacção, eliminando a limpeza adicional da amostra pisa enquanto combina impurezas e revestimento da superfície das câmaras de ar de modo que a amostra preciosa não esteja desperdiçada. Porque os testes de diagnóstico novos continuam a incorporar o mercado, nossas experiência e evidência serão instrumentais em apoiar a revelação de jogos novos. Nossos muitos anos de experiência na albumina humana de recombinação podem ser aplicados a tais produtos e Albumedix é aprontado para apoiar clientes em desenvolver os jogos COVID-19 de teste.

Este ano, o impacto o mais grande em nossa indústria foi obviamente a pandemia COVID-19. Porque nós estamos fornecendo os clientes que desenvolvem diagnósticos, dispositivos médicos, e vacinas na luta contra o coronavirus, nós estamos olhando vigilante estas revelações. Resolvendo desafios no armazenamento e no transporte da frio-corrente seja edições centrais, importantes em ambas as vacinas COVID-19 de segurança pacientes do alcance no mundo inteiro, mas igualmente os reveladores avançados edição de uma terapia estão endereçando para fazer terapias evolutivas. Um exemplo é a tendência de aumento para a aproximação amigável do ` e injecta' de terapias celulares.

A disponibilidade de jogos diagnósticos estabelecidos permitiu pesquisadores a apto para a utilização no projecto dos diagnósticos COVID-19. Tais tecnologias tomaram décadas para aperfeiçoar, mas estão jogando agora um papel importante em identificar e em controlar a propagação de COVID-19. Recombumin® fornece uma solução aumentada como parte desta caixa de ferramentas tratando esta doença.

Para aprender mais sobre a albumina humana de recombinação para testes de diagnóstico, contacte-nos hoje.

Referências

  1. Que testes poderiam potencial ser usados para a selecção, o diagnóstico e a monitoração de COVID-19 e que são suas vantagens e desvantagens? https://www.cebm.net/covid-19/what-tests-could-potentially-be-used-for-the-screening-diagnosis-and-monitoring-of-covid-19-and-what-are-their-advantages-and-disadvantages/
  2. Al-Soud W de Abu, Rådström P. Efeito de facilitadores da amplificação no PCR diagnóstico na presença do sangue, da fezes, e da carne. Microbiol de J Clin. 2000 dezembro; 38(12): 4463-70. doi: 10.1128/JCM.38.12.4463-4470.2000. PMID: 11101581; PMCID: PMC87622.
  3. Inibidores do PCR - ocorrência, propriedades e remoção https://t.co/gEQViMkNQ8
  4. Farell, E.M., Alexandre, albumina de soro bovino do G. mais adicional aumenta os efeitos de solventes orgânicos no rendimento aumentado da reacção em cadeia da polimerase de moldes GC-ricos. BMC Res nota 5, 257 (2012). https://doi.org/10.1186/1756-0500-5-257
  5. Plante D, Bélanger G, Leblanc D, divisão P, Houde A, Trottier YL. O uso da albumina de soro bovino melhorar a detecção RT-qPCR de vírus foodborne enxaguados das superfícies vegetais. Microbiol de Lett Appl. 2011 março; 52(3): 239-44. doi: Epub 2011 o 11 de janeiro 10.1111/j.1472-765X.2010.02989.x. PMID: 21219370.
  6. https://international.neb.com/nebinspired-blog/loop-mediated-isothermal-amplification-allows-testing-to-be-performed-anywhere

 

 

Citations

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    Albumedix Ltd.. (2021, February 02). Albumina: A escolha natural para testes de diagnóstico. News-Medical. Retrieved on January 21, 2022 from https://www.news-medical.net/news/20210202/Albumin-The-Natural-Choice-for-Diagnostic-Tests.aspx.

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    Albumedix Ltd.. 2021. Albumina: A escolha natural para testes de diagnóstico. News-Medical, viewed 21 January 2022, https://www.news-medical.net/news/20210202/Albumin-The-Natural-Choice-for-Diagnostic-Tests.aspx.