Advertencia: Esta página es una traducción de esta página originalmente en inglés. Tenga en cuenta ya que las traducciones son generadas por máquinas, no que todos traducción será perfecto. Este sitio Web y sus páginas están destinadas a leerse en inglés. Cualquier traducción de este sitio Web y su páginas Web puede ser imprecisa e inexacta en su totalidad o en parte. Esta traducción se proporciona como una conveniencia.

Los investigadores desarrollan el biosensor innovador que puede descubrir y cuantificar la infección SARS-CoV-2

Las acciones de una droga o de un objetivo molecular in vitro hacen a menudo no traducido en un celular o in vivo un contexto. La permeabilidad de membrana, los efectos del lejos-objetivo, y la citotoxicidad son algunos de los factores que pueden contribuir a esta diferencia. Esto es un atascamiento enorme en el esfuerzo de determinar urgente terapias antivirus nuevas, especialmente como consecuencia del pandémico de la enfermedad 2019 del coronavirus (COVID-19).

El agente etiológico de COVID-19 es el coronavirus 2 (SARS-CoV-2) de la neumonía asiática. Ha infectado durante 123,5 millones de vidas, y causado sobre 2,7 millones de muertes. El único agente antivirus más prometedor contra SARS-CoV-2 usado actualmente en la clínica es el remdesivir ARN-relacionado del inhibidor de la polimerasa de ARN. Sin embargo, ha presentado resultados variados y efectos secundarios.

Mientras que las vacunas efectivas contra el SARS-CoV-2 ahora se están administrando en muchas partes del mundo, se sospecha que el virus puede persistir y continuar infectar a seres humanos. También, las variantes emergentes pueden contribuir a la circulación y a la infección del virus.

Para luchar este brote SAR-CoV-2 y cualquier coronaviruses zoonótico futuro potencial, es esencial tener herramientas eficientes - dirija los análisis bioquímicos - que ofrezca la información más fisiológico relevante y permita el estudio de fenotipos terciarios complejos tales como réplica viral.

Actualmente, las pruebas de neutralización convencionales de la reducción de la placa (PRNT) son el patrón oro para la cuantificación de la réplica viral. Sin embargo, la producción inferior y el tiempo de vuelta largo de estos análisis limitan su utilidad para la investigación en grande de drogas o de sueros.

Para cubrir una necesidad urgente de un simple, la alto-producción célula-basó análisis, para cuantificar la infección auténtica SARS-CoV-2 y las nuevas variantes clínicas, investigadores explotaron la presencia de actividad viral de la proteasa. Las proteasas SARS-CoV-2 son objetivos terapéuticos atractivos.

En un nuevo estudio publicado recientemente en el servidor del bioRxiv*, generaron los biosensores fluorescentes y luminiscentes de la proteasa-activatable para la actividad de SARS-CoV-2 MPro (proteasa principal) y de PLPro (papaína-como la proteasa), una basada en el “tirón” GFP (FlipGFP), y la otra basada en el luciferase circular permutado de la luciérnaga (FFluc). Las personas, de la universidad de Cambridge y la sangre y el trasplante de NHS, Cambridge, Reino Unido, desarrollaron una variedad de células luminiscente sensible del reportero que cuantifica exacto el virus infeccioso SARS-CoV-2.

Comparado con los virus fluorescentes o luminiscentes reverso-dirigidos del reportero, una ventaja dominante de nuestra variedad de células luminiscente del reportero es el potencial de descubrir un alcance de los aislantes clínicos SARS-CoV-2, incluyendo variantes emergentes de la preocupación.”

Los investigadores confirmaron la especificidad y la utilidad de estos reporteros que usaban las proteasas virales recombinantes. Establecieron que estos reporteros podrían descubrir y cuantificar las células infectadas.

Finalmente, desarrollaron una variedad de células estable, luminiscente del reportero, en la cual el FFluc es activado por la expresión de PLPro durante la infección SARS-CoV-2. Demostraron la utilidad de estas células en análisis de los pequeños antivirals de la molécula y de los anticuerpos de neutralización usando un tipo salvaje SARS-CoV-2.

En este trabajo, demostraron su utilidad para la investigación de la droga y la titulación de anticuerpos de neutralización.

Después de que los investigadores generados FlipGFP-basaran a reporteros de la proteasa SARS-CoV-2, probaron si estos biosensores podrían descubrir actividad de la proteasa SARS-CoV-2 en células. De los tres reporteros estudiados aquí, observaron la señal más fuerte del reportero de PLP2-FlipGFP.

Además, también confirmaron que los biosensores seleccionados SARS-CoV-2 son específicos para sus proteasas cognadas, y activado de una manera estrictamente serie-relacionada.

Los datos en este estudio soportaron el principio que célula-basó los análisis para el correlativo antivirus de las composiciones mejor con actividad contra la réplica viral que in vitro análisis, los investigadores declarados.

Usando la variedad de células ACE2 de sobre-expresión de HEK293T y el furin (llamado las células HEK293T-ACE2), los investigadores demostraron que durante una infección SARS-CoV-2, la expresión viral de la proteasa activó a los reporteros FlipGFP-basados. Así los biosensores de la proteasa-activatable se pueden explotar para hacer señales la infección SARS-CoV-2. Sin embargo, el estudio señaló que no pudo demostrar una ventana usable para los experimentos de la alto-producción.

Generaron a un reportero luciferase-basado de la proteasa SARS-CoV-2 que puede cuantificar la infección SARS-CoV-2, y también desarrollaron un análisis luminiscente superficial para revisar los inhibidores de la réplica SARS-CoV-2.

Usando esto célula-basó el análisis, los investigadores distinguidos, de un panel de inhibidores, entre las composiciones que pueden inhibir la réplica viral (GC373 y GC376) y las que no son (el carmofur, el disulfiram, PX-12, tideglusib).

Para una variedad de células luminiscente sensible del reportero para la droga, la neutralización y los análisis virológicos generales, los investigadores entonces desarrollaron una variedad de células estable, células HEK293T-ACE2-30F-PLP2; utilizado con una lectura luminiscente simple.

La primera variedad de células estable, luminiscente del reportero para la infección SARS-CoV-2 generada en este estudio se adapta idealmente a las pantallas de la alto-producción de las composiciones antivirus del candidato o de los anticuerpos terapéuticos, y/o a los levantamientos topográficos serológicos en grande para la actividad de neutralización contra virus auténtico.

En conclusión, los investigadores en este estudio han desarrollado una caja de herramientas versátil de los reporteros fluorescentes y luminiscentes célula-basados activados por las proteasas SARS-CoV-2.

Nuestros datos establecen la viabilidad de los biosensores activatable de la proteasa para la detección de la infección SARS-CoV-2, y demuestran la utilidad práctica de una variedad de células luciferase-basada del reportero para la cuantificación de células infectadas, de la prueba de la droga y de análisis serológicos.”

Advertencia *Important

el bioRxiv publica los partes científicos preliminares que par-no se revisan y, por lo tanto, no se deben mirar como concluyentes, conduce práctica clínica/comportamiento relativo a la salud, o tratado como información establecida.

Journal reference:
Dr. Ramya Dwivedi

Written by

Dr. Ramya Dwivedi

Ramya has a Ph.D. in Biotechnology from the National Chemical Laboratories (CSIR-NCL), in Pune. Her work consisted of functionalizing nanoparticles with different molecules of biological interest, studying the reaction system and establishing useful applications.

Citations

Please use one of the following formats to cite this article in your essay, paper or report:

  • APA

    Dwivedi, Ramya. (2021, March 24). Los investigadores desarrollan el biosensor innovador que puede descubrir y cuantificar la infección SARS-CoV-2. News-Medical. Retrieved on June 23, 2021 from https://www.news-medical.net/news/20210324/Researchers-develop-innovative-biosensor-that-can-detect-and-quantitate-SARS-CoV-2-infection.aspx.

  • MLA

    Dwivedi, Ramya. "Los investigadores desarrollan el biosensor innovador que puede descubrir y cuantificar la infección SARS-CoV-2". News-Medical. 23 June 2021. <https://www.news-medical.net/news/20210324/Researchers-develop-innovative-biosensor-that-can-detect-and-quantitate-SARS-CoV-2-infection.aspx>.

  • Chicago

    Dwivedi, Ramya. "Los investigadores desarrollan el biosensor innovador que puede descubrir y cuantificar la infección SARS-CoV-2". News-Medical. https://www.news-medical.net/news/20210324/Researchers-develop-innovative-biosensor-that-can-detect-and-quantitate-SARS-CoV-2-infection.aspx. (accessed June 23, 2021).

  • Harvard

    Dwivedi, Ramya. 2021. Los investigadores desarrollan el biosensor innovador que puede descubrir y cuantificar la infección SARS-CoV-2. News-Medical, viewed 23 June 2021, https://www.news-medical.net/news/20210324/Researchers-develop-innovative-biosensor-that-can-detect-and-quantitate-SARS-CoV-2-infection.aspx.