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Les écouvillons secs ont-ils pu fournir le matériau meilleur marché, plus sûr et plus rapide pour le contrôle SARS-CoV-2 ?

Le péage social et économique lourd de la pandémie de la maladie 2019 de coronavirus (COVID-19) a mené à upscaling des stratégies de contrôle pour l'agent pathogène causal, le coronavirus 2 (SARS-CoV-2) de syndrôme respiratoire aigu sévère.

Une étude neuve, relâchée comme prétirage sur le serveur de bioRxiv*, traite la faisabilité d'employer les échantillons secs d'écouvillon pour isoler le virus, par rapport aux écouvillons mouillés, pour réduire des coûts tout en améliorant la sécurité.

Le besoin d'étude

Actuel, la plupart des tests diagnostique dépendent de l'amplification en chaîne par polymérase quantitative de transcriptase inverse (Droite-qPCR) de trouver l'acide ribonucléique viral (ARN), conduit sur les échantillons nasopharyngaux ou oro-pharyngés provenant des patients. Cependant, cette méthode est chère, peut être lente pour produire des résultats et a un taux des faux négatifs significatif.

Ces désavantages ont mené à l'exploration des techniques alternatives pour la détection des virus. Ceci comprend des modifications de la technique d'ACP, en éliminant le support de transport, par exemple, ou en omettant l'opération d'extraction d'ARN.

La première recherche a précisé que le seuil de cycle (Ct) pour les tests d'ACP effectués sur les écouvillons secs, c.-à-d., ceux incubés en conditions sèches, et a mouillé des écouvillons, incubés dans des medias mouillés. Ceci a également, avec les modifications ci-dessus, augmentées la possibilité de réduire la période de contrôle et les frais du contrôle.

Des écouvillons des voies aériennes supérieures sont également utilisés pour trouver les particules virales infectieuses. C'est important parce que la présence des éclats génomiques viraux ou même du génome entier n'est pas un indicateur de pouvoir infectant. Même les semaines après que le virus soit libéré, acide nucléique viral peuvent encore être présentes dans les tissus d'hôte. C'est pourquoi l'isolement du virus sous tension et de la culture couronnée de succès est la seule preuve fiable, jusqu'ici, qui la personne est infectieuse au moment du contrôle.

La culture virale exige des états du laboratoire III de sécurité biologique, spécimens de haute qualité et est longue. Le coût des réactifs et du milieu de culture doit également être considéré. Cependant, c'est l'approche la plus proche à un test d'étalon-or du pouvoir infectant SARS-CoV-2 procurable jusqu'ici.

Objectif d'étude

L'étude actuelle vise à explorer la viabilité de SARS-CoV-2 pour la culture de virus dans les échantillons secs d'écouvillon. Des barres virales du titre connu ont été inoculées dans les inoculums spécifiques dans des écouvillons, juste comme des échantillons rassemblés des patients.

Les écouvillons ont été groupés dans trois groupes à traiter séparé. Le premier était le groupe enregistré en tant qu'écouvillons secs ; le deuxième a comporté des écouvillons enregistrés dans le support de transport de virus ; et le dernier groupe a contenu des écouvillons enregistrés dans la solution tampon. Ceux-ci ont été alors incubés à la température ambiante, au 25°C, ainsi qu'au 4°C.

L'incubation a été effectuée pendant 1, 4, 8, 12, 24, 48 et 72 heures, suivant que toutes ont été maintenues à -80°C jusqu'à la prochaine opération. Les écouvillons pointus ont été alors utilisés pour infecter des cellules de Vero dans la culture.

Le support a été alors remplacé par un support frais. Les cellules non infectées de Vero ont agi en tant que contrôles de cellules, alors que des cellules infectées avec la barre connue de virus étaient employées comme contrôles d'infection, respectivement.

L'extraction d'ARN a été alors effectuée, et l'ARN a été trouvé utilisant Droite-qPCR. Les gènes ont trouvé ont compris le cadre ouvert de lecture 1ab et nucléoprotéine N.

Quels étaient les résultats ?

Les écouvillons à chacun des trois groupes expérimentaux fournis le virus s'élue qui étaient viables jusqu'aux degrés assimilés à la température ambiante et au 4Co. Les valeurs de Ct dans tous les groupes étaient comparables, en d'autres termes, pour le cadre ouvert de lecture 1ab et le gène de N.

Les valeurs de Ct se sont échelonnées entre 16 et 19 ensuite tant que 12 heures, les aux deux températures, à savoir, à 25Co et à 4Co.

Les valeurs de Ct ont lentement monté après 24 heures de stockage, jusqu'à 72 heures, à entre 24 et 36. Ceci propose une diminution de viabilité virale au fil du temps, tels qu'on lui recommande de récupérer des particules virales des échantillons expérimentaux dès que possible.

Cependant, les résultats prouvent également que les valeurs de Ct sont inférieures par environ 2 avec le virus du groupe de mettre en mémoire tampon-stockage d'écouvillons, comparé aux autres deux.

Quelles sont les implications ?

« Dans la présente étude, nous expliquons que des isolats viraux viables peuvent être obtenus et propagés de la méthode de ramassage sèche témoin d'écouvillon. » L'utilisation des écouvillons secs facilite l'échantillonnage des patients et évite l'utilisation des medias liquides de transport.

Ces caractéristiques, en plus de l'absence de n'importe quel besoin d'utilisation des medias de transport de virus, et pour l'extraction d'ARN, rendent le procédé du contrôle plus rapidement, meilleur marché et plus sûr. D'ailleurs, il permettrait aux particules viables de virus d'être cultivées pour différents objectifs de recherches, comme il explique que de telles particules peuvent être obtenues après incubation de l'écouvillon sec à la température ambiante ou à 4Co.

Avis *Important

le bioRxiv publie les états scientifiques préliminaires qui pair-ne sont pas observés et ne devraient pas, en conséquence, être considérés comme concluants, guident la pratique clinique/comportement relatif à la santé, ou traité en tant qu'information déterminée.

Journal reference:
Dr. Liji Thomas

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Dr. Liji Thomas

Dr. Liji Thomas is an OB-GYN, who graduated from the Government Medical College, University of Calicut, Kerala, in 2001. Liji practiced as a full-time consultant in obstetrics/gynecology in a private hospital for a few years following her graduation. She has counseled hundreds of patients facing issues from pregnancy-related problems and infertility, and has been in charge of over 2,000 deliveries, striving always to achieve a normal delivery rather than operative.

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