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Podiam os cotonetes secos fornecer um material mais barato, mais seguro e mais rápido para o teste SARS-CoV-2?

O pedágio social e econômico pesado da pandemia da doença 2019 do coronavirus (COVID-19) conduziu a upscaling de estratégias do teste para o micróbio patogénico causal, o coronavirus 2 da Síndrome Respiratória Aguda Grave (SARS-CoV-2).

Um estudo novo, liberado como uma pré-impressão no server do bioRxiv*, trata a possibilidade de usar amostras secas do cotonete para isolar o vírus, em relação aos cotonetes molhados, para reduzir custos ao melhorar a segurança.

A necessidade para o estudo

Actualmente, a maioria de testes de diagnóstico dependem da reacção em cadeia quantitativa da polimerase do transcriptase reverso (RT-qPCR) detectar o ácido ribonucléico viral (RNA), conduzido em amostras nasopharyngeal ou orofaríngeas dos pacientes. Contudo, este método é caro, pode ser lento produzir resultados e tem uma taxa falso-negativa significativa.

Estas desvantagens conduziram à exploração de técnicas alternativas para a detecção do vírus. Isto inclui alterações da técnica do PCR, eliminando o media do transporte, por exemplo, ou deixando para fora a etapa da extracção do RNA.

Uma pesquisa mais adiantada indicou que o ponto inicial do ciclo (Ct) para os testes do PCR realizados nos cotonetes secos, isto é, aqueles incubados em circunstâncias secas, e molhou os cotonetes, incubados em media molhados. Isto tem igualmente, com as alterações acima, levantadas a possibilidade de reduzir a época do teste e a despesa do teste.

Os cotonetes da via aérea superior são usados igualmente para detectar partículas virais infecciosas. Isto é importante porque a presença de fragmentos genomic virais ou mesmo do genoma inteiro não é um indicador da infectividade. Mesmo semanas depois que o vírus é cancelado, o ácido nucleico viral pode ainda esta presente nos tecidos do anfitrião. Eis porque o isolamento do vírus vivo e da cultura bem sucedida é a única evidência segura, até agora, que o indivíduo é infeccioso na altura do teste.

A cultura viral exige condições do laboratório III da seguridade biológica, espécimes de alta qualidade e é demorada. O custo dos reagentes e do media de cultura deve igualmente ser considerado. Contudo, esta é a aproximação a mais próxima a um teste da bandeira de ouro da infectividade SARS-CoV-2 disponível até agora.

Alvo do estudo

O estudo actual aponta explorar a viabilidade de SARS-CoV-2 para a cultura do vírus em amostras secas do cotonete. Os estoques virais do titer conhecido foram inoculados em inoculação específicas em cotonetes, apenas como as amostras recolhidas dos pacientes.

Os cotonetes foram aglomerados em três grupos a ser processados separada. O primeiro era o grupo armazenado como cotonetes secos; o segundo compreendeu os cotonetes armazenados no media do transporte do vírus; e o último grupo conteve os cotonetes armazenados na solução de amortecedor. Estes foram incubados então na temperatura ambiente, no 25°C, assim como no 4°C.

A incubação foi realizada por 1, 4, 8, 12, 24, 48 e 72 horas, seguindo que todos foram mantidos em -80°C até o passo seguinte. Os cotonetes cravados foram usados então para contaminar pilhas de Vero na cultura.

O media foi substituído então com um media fresco. As pilhas Uninfected de Vero actuaram como controles da pilha, quando as pilhas contaminadas com o estoque conhecido do vírus foram usadas como controles da infecção, respectivamente.

A extracção do RNA foi realizada então, e o RNA foi detectado usar o RT-qPCR. Os genes detectaram incluíram o ORF 1ab e nucleoprotein N.

Que eram os resultados?

Os cotonetes em todos os três grupos experimentais rendidos o vírus elutes que eram viáveis às extensões similares na temperatura ambiente e no 4Co. Os valores do Ct em todos os grupos eram comparáveis, ou seja para o ORF 1ab e o gene de N.

Os valores do Ct variaram entre 16 e 19 em seguida enquanto 12 horas, em ambas as temperaturas, a saber, em 25Co e em 4Co.

Os valores do Ct aumentaram lentamente após 24 horas do armazenamento, até 72 horas, entre a 24 e a 36. Isto sugere uma diminuição na viabilidade viral ao longo do tempo, tais que se recomende recuperar quanto antes partículas virais das amostras experimentais.

Contudo, os resultados igualmente mostram que os valores do Ct são mais baixos por aproximadamente 2 com o vírus do grupo do proteger-armazenamento de cotonetes, comparado aos outros dois.

Que são as implicações?

“No estudo actual, nós demonstramos que os isolados virais viáveis podem ser obtidos e propagado do método de coleção seco da amostra do cotonete.” O uso de cotonetes secos facilita a amostra dos pacientes e evita o uso de media líquidos do transporte.

Estas características, além do que a ausência de toda a necessidade para o uso de media do transporte do vírus, e para a extracção do RNA, rendem o processo de teste mais rapidamente, mais barato e mais seguro. Além disso, permitiria que as partículas viáveis do vírus fossem cultivadas para vários alvos de pesquisa, como demonstra que tais partículas podem ser obtidas após ter incubado o cotonete seco na temperatura ambiente ou em 4Co.

Observação *Important

o bioRxiv publica os relatórios científicos preliminares que par-não são revistos e, não devem conseqüentemente ser considerados como conclusivos, guia a prática clínica/comportamento saúde-relacionado, ou tratado como a informação estabelecida.

Journal reference:
Dr. Liji Thomas

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Dr. Liji Thomas

Dr. Liji Thomas is an OB-GYN, who graduated from the Government Medical College, University of Calicut, Kerala, in 2001. Liji practiced as a full-time consultant in obstetrics/gynecology in a private hospital for a few years following her graduation. She has counseled hundreds of patients facing issues from pregnancy-related problems and infertility, and has been in charge of over 2,000 deliveries, striving always to achieve a normal delivery rather than operative.

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