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O estudo novo ajudará a investigar respostas imunes inatas às infecções virais

Os pesquisadores da Faculdade de Medicina da universidade de Boston (BUSM) relatam a formação de pilhas humanas que contêm uma proteína ou um GFP fluorescente verde (uma das proteínas as mais importantes na imagem lactente da biologia e da fluorescência) fundida genetically com os dois genes estimulados interferona (ISGs), a saber Viperin e ISG15. Esta criação nova faz estes reagentes altamente valiosos das pilhas para relatar respostas imunes inatas às infecções virais, incluindo aqueles causados por coronaviruses.

Estas pilhas projetadas, que giram o verde quando tratadas com a interferona, são altamente novas porque este é a primeira vez um gene do repórter (um gene que permita a detecção ou a medida da expressão genética), como GFP, foram introduzidas em locus endógenos dos ISG.

As infecções virais fazem com que as pilhas humanas soem um alarme bioquímico através da sinalização da interferona, conduzindo a uma expressão de nível elevado dos ISG. Contudo, os ISG são genes muito firmemente regulados, porque demasiada expressão e uma incapacidade tamp mais tarde para baixo níveis do ISG podem ser apenas como prejudiciais à saúde celular.

Esta sinalização imune inata overactive conduz do “a uma tempestade cytokine” (quando uma infecção provoca o sistema imunitário para inundar sua circulação sanguínea com as proteínas inflamatórios chamadas cytokines) que distingue um exemplo suave da infecção do vírus dos sintomas inteiramente debilitantes, todo um resultado demasiado predominante na pandemia COVID19.

As melhores ferramentas da pesquisa para estudar o regulamento do ISG são ainda necessários, não agora para a pesquisa do coronavirus mas para muitos outros vírus que nossa sociedade afirmará com.”

Nelson Lau, PhD, autor Co-Correspondente do estudo e professor adjunto da bioquímica, Faculdade de Medicina da universidade de Boston

A fim etiquetar com sucesso primeiramente genes antivirosos humanos com o GFP, os pesquisadores necessários para produzir uma metodologia nova para criar um molde longo do reparo do ADN para o genoma CRISPR-Cas9 mais eficiente e mais autêntico que edita nas pilhas animais. Nomearam sua metodologia do molde o BL3SSO (soa como o “blasso”) porque se ajusta - acima do ADN para um reparo mais exacto e para a introdução de um transgene fluorescente como GFP no local corte por Cas-9 durante a edição do genoma.

Estes resultados são o resultado de uma colaboração entre o laboratório de Lau e o laboratório de Mohsan Saeed, PhD, membros da faculdade no departamento de BUSM da bioquímica e investigador nos laboratórios nacionais infecciosas emergente das doenças dos BU (NEIDL).

Source:
Journal reference:

Bandyopadhyay, S., et al. (2021) DNA templates with blocked long 3' end single-stranded overhangs (BL3SSO) promote bona fide Cas9-stimulated homology-directed repair of long transgenes into endogenous gene loci. G3: Genes, Genomes, Genetics. doi.org/10.1093/g3journal/jkab169.