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La nuova prova è più economica, più facile e può diagnosticare attendibilmente l'infezione SARS-CoV-2

La nuova prova di portata laterale vigilante è più economica, più facile usare ed affidabile quanto la prova corrente di PCR di sistema monetario aureo per la diagnostica dell'infezione SARS-CoV-2.

Un SARS-CoV-2 che la prova di portata laterale che combina due enzimi batterici con le sequenze genetiche ed una coppia di sonde è più economica e più facile usare che la PCR prova mentre fornisce i risultati in modo paragonabile affidabili. Vigilant chiamato e progettato a KAUST, la prova può individuare molto le piccole quantità di RNA virale in un campione.

Parecchi tipi di prove di portata laterali sono attualmente disponibili o nell'ambito della ricerca per la rilevazione del SARS-CoV-2. Secondo come funzionano, tutti presentano gli svantaggi, compreso la rilevazione del virus soltanto parecchi giorni dopo l'infezione o fornire i risultati del falso negativo e del falso positivo.„

Inscatoli Marsic, dice Ph.D. Student, KAUST

Le prove di PCR, che sono effettuate in laboratori, risultati più affidabili dei prodotti ma sono costose e richiedono il materiale di avanguardia e nel il personale esperto.

“Vigilante può essere condotto nelle impostazioni nonlaboratory ed è significativamente più economico e più facile usare che prove di PCR,„ dice Marsic.

La prima tappa critica della piattaforma vigilante comprende una tecnica chiamata amplificazione inversa della polimerasi della trascrizione-recombinase (RT-RPA) per fare molte copie di una regione specifica sul genoma SARS-CoV-2, se esiste nel campione del tampone del radiatore anteriore e della gola di una persona. Le prove di PCR egualmente ampliano le sequenze virali del gene in campioni ma comprendono fare passare i campioni durante i cicli multipli di bassa temperatura e di livello. RT-RPA può essere temperatura ambiente del doneat con strumentazione molto più economica e di facile impiego.

Tutti i geni ampliati SARS-CoV-2 nel prodotto di questo trattamento sono etichettati con una molecola chiamata biotina, quindi aggiunta ad una provetta che contiene il complesso specialmente progettato di rilevazione di KAUST.

Questo complesso è formato di due enzimi. Su un'estremità, un enzima batterico chiamato Cas9 è coniugato con una guida del RNA che soltanto riconosce e fissa alla sequenza corrispondente del gene SARS-CoV-2. Sull'altra estremità, un altro enzima batterico chiamato VirD2 è fissato ad una sequenza di nucleotide fluorescente-etichettata.

Le gocce dalla reazione fra il complesso ed il prodotto di RT-RPA poi si aggiungono ad un nastro laterale della prova di portata impregnato di proteina diriconoscimento chiamata streptavidin su un'estremità e un anticorpo diriconoscimento fluorescente d'altro canto. Se il campione contiene le sequenze del gene SARS-CoV-2, avranno limitato al complesso VirD2-Cas9. Un risultato positivo accade quando due righe visibili compaiono. La prima riga è dove la biotina sul amplicon SARS-CoV-2 lega a streptavidin. La seconda riga è dove il tag fluorescente sull'altra estremità dei attaches del complesso all'anticorpo del nastro. Un risultato negativo mostra soltanto come singola riga causata dal tag fluorescente che lega all'anticorpo.

“Ora stiamo lavorando a rendere la nostra piattaforma vigilante più facile da usare coppia con una tecnica ancora più semplice di amplificazione,„ dice il bioengineer Magdy Mahfouz di KAUST, che piombo la ricerca. “Egualmente stiamo lavorando a produrre altri test diagnostici efficienti e rapidi che possono individuare gli acidi nucleici per permettere alla prova di punto-de-cura per gli agenti patogeni, compreso i virus e gli indicatori di malattia.„

Source:
Journal reference:

Marsic, T., et al. (2021) Vigilant: An engineered VirD2-Cas9 complex for lateral flow assay-based detection of SARS-CoV-2. Nano Letters. doi.org/10.1021/acs.nanolett.1c00612.