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O teste novo é mais barato, mais fácil, e pode confiantemente diagnosticar a infecção SARS-CoV-2

O teste de fluxo lateral novo vigilante é mais barato, mais fácil usar-se e tão seguro quanto o teste actual do PCR da bandeira de ouro para diagnosticar a infecção SARS-CoV-2.

Um SARS-CoV-2 que o teste de fluxo lateral que combine duas enzimas bacterianas com as seqüências genéticas e as um par pontas de prova é mais barato e mais fácil se usar do que o PCR testa ao produzir resultados comparàvel seguros. Vigilante chamado e projetado em KAUST, o teste pode detectar muito pequenas quantidades de RNA viral em uma amostra.

Diversos tipos de testes de fluxo laterais estão actualmente disponíveis ou sob a pesquisa para detectar SARS-CoV-2. Segundo como trabalham, todos têm as desvantagens, incluindo detectando o vírus somente diversos dias após a infecção ou produzindo resultados do falso positivo e do negativo falso.”

Estanhe Marsic, diga Ph.D. Estudante, KAUST

Os testes do PCR, que são conduzidos nos laboratórios, uns resultados mais seguros do produto mas são caros e exigem equipamento sofisticado e pessoais especializados.

“Vigilante pode ser conduzido em ajustes nonlaboratory e é significativamente mais barato e mais fácil usar-se do que testes do PCR,” diz Marsic.

O primeiro passo crítico da plataforma vigilante envolve uma técnica chamada a amplificação reversa da polimerase da transcrição-recombinase (RT-RPA) para fazer muitas cópias de uma região específica no genoma SARS-CoV-2, se existe na amostra do cotonete do nariz e da garganta de uma pessoa. Os testes do PCR igualmente amplificam seqüências virais do gene nas amostras mas envolvem-nas passar as amostras através dos ciclos múltiplos da temperatura do alto e baixo. RT-RPA pode estar a uma temperatura ambiente do doneat com equipamento muito mais barato e fácil de usar.

Todos os genes amplificados SARS-CoV-2 no produto deste processo são etiquetados com uma molécula chamada biotina, a seguir adicionada a um tubo de ensaio que contem o complexo especialmente projetado da detecção de KAUST.

Este complexo é formado de duas enzimas. Em uma extremidade, uma enzima bacteriana chamada Cas9 é conjugada com um guia do RNA que somente reconheça e anexe à seqüência correspondente do gene SARS-CoV-2. Na outra extremidade, uma outra enzima bacteriana chamada VirD2 é anexada a uma seqüência de nucleotide fluorescente-etiquetada.

As gotas da reacção entre o complexo e o produto de RT-RPA são adicionadas então a uma tira de teste lateral do fluxo impregnada com uma proteína dereconhecimento chamada streptavidin em uma extremidade e um anticorpo dereconhecimento fluorescente na outro. Se a amostra contem seqüências do gene SARS-CoV-2, terão limitado ao complexo VirD2-Cas9. Um resultado positivo ocorre quando duas linhas visíveis aparecem. A primeira linha é onde a biotina no amplicon SARS-CoV-2 liga ao streptavidin. A segunda linha é onde a etiqueta fluorescente na outra extremidade dos diplomatas do complexo ao anticorpo da tira. Um resultado negativo mostra somente como uma única linha causada pela etiqueta fluorescente que liga ao anticorpo.

“Nós estamos trabalhando agora em fazer nossa plataforma vigilante mais de fácil utilização acoplando a com uma técnica mesmo mais simples da amplificação,” diz o bioengineer Magdy Mahfouz de KAUST, que conduziu a pesquisa. “Nós igualmente estamos trabalhando em produzir outros testes de diagnóstico eficientes e rápidos que podem detectar ácidos nucleicos para permitir o teste do ponto--cuidado para os micróbios patogénicos, incluindo vírus e marcadores da doença.”

Source:
Journal reference:

Marsic, T., et al. (2021) Vigilant: An engineered VirD2-Cas9 complex for lateral flow assay-based detection of SARS-CoV-2. Nano Letters. doi.org/10.1021/acs.nanolett.1c00612.